Om de progressie van een immuunrespons na verloop van tijd in dezelfde muis volgen, kunnen de lymfeklieren achter elkaar worden verwijderd door een operatie. Hier wordt beschreven hoe deze techniek kan worden uitgevoerd.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Murine Oppervlakkige lymfkliertest Chirurgie
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Op het gebied van de immunologie, om de progressie van een immuunrespons tegen een vaccin, een infectie of tumor te begrijpen wordt de reactie vaak tijd te volgen. Ook de studie van lymfocyten homeostase vergt tijd natuurlijk experimenten. Het uitvoeren van deze studies in dezelfde muis is ideaal om de experimentele variabiliteit en het aantal muizen gebruikt verminderen. Blood terugtrekking kan uitvoeren van tijdsverloop experimenten maar geeft slechts over circulerende lymfocyten en geeft een beperkt aantal cellen 1-4. Sinds lymfocyten circuleren door het lichaam en die woonachtig zijn in de lymfeklieren hebben verschillende eigenschappen, is het belangrijk om te onderzoeken beide locaties. De sequentiële verwijdering van lymfeklieren door een operatie biedt een unieke gelegenheid om een immuunrespons of immuun cel expansie in dezelfde muis over de tijd te volgen. De techniek levert tussen 1 2x10 6 cellen per lymfeknoop die voldoende is om ierform fenotypische karakterisering en / of functionele assays. Sequential lymfklier operatie of lymfadenectomie is met succes gebruikt door ons en anderen 5-11. Hier beschrijven we hoe de arm en lies lymfeklieren kan worden verwijderd door een kleine incisie in de huid van een narcose muis. Sinds de operatie is oppervlakkig en snel gedaan, de muis herstelt heel snel geneest goed en niet een overmatige pijn. Elke tweede dag, is het mogelijk om oogsten een of twee lymfeknopen waardoor tijdsverloop experimenten. Deze techniek is dus geschikt om de eigenschappen van lymfeknoop-verblijvende lymfocyten bestuderen tijd. Deze aanpak is geschikt voor verschillende experimentele ontwerpen en wij geloven dat veel laboratoria baat zouden hebben bij het uitvoeren van opeenvolgende lymfeknoop operaties.
Protocol
1. Voorbereiding voor de operatie
Muizen werden behandeld in overeenstemming met de Canadese Raad voor Dierenaangelegenheden Care richtlijnen.
- Verdoven muizen door injectie van ketamine / xylazine (150/300 mg / kg, ip) of door inhalatie van isofluraan (2% 1L zuurstof). Indien beschikbaar is, dient isofluraan worden gebruikt als het zorgt voor een betere controle van de narcose tijd en diepte. Ook is zuurstof toegediend op hetzelfde moment waarop de fysiologische functies van het dier ondersteunt. Bovendien wordt isofluraan direct geëlimineerd door de longen en dus vereist geen lever-of nierproblemen metabolisme.
- Injec....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
We hebben beschreven een protocol van LN operatie die kan worden toegepast op een groot aantal experimentele systemen. Hoewel het zeer nuttig om te volgen immuunreacties of immuuncellen homeostase, deze techniek heeft een aantal beperkingen. Ten eerste kan slechts vier LNS worden geoogst. Ten tweede moet de bestudeerde immuunrespons zijn systemische of voorkomen in de oppervlakkige inguinale of brachiale (huid-drainage) LNS. Tenslotte wordt het aantal geoogste cellen beïnvloed door de kwaliteit van de LN verwijdering, t.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Geen belangenconflicten verklaard.
Dankbetuigingen
Wij danken Sylvie Lesage en alle lab-leden voor de kritische lezing van het protocol. Dit werk werd ondersteund door een subsidie (MOP-77545) van de Canadese Institutes of Health Research (CIHR). Nathalie Labrecque wordt ondersteund door een FRSQ Senior Scholarship en Melissa Mathieu kreeg een NSERC Alexander Graham Bell Canada Graduate Scholarship.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Reagens Naam | Vennootschap | Catalogusnummer | Reacties |
| Graefe Fine Patroon Premium tang | Harvard Apparatuur | 52-2144 | Sterk gebogen, 10 cm (4 in), 0,8 mm tip |
| Michel Clip toepassen en verwijderen tang | Harvard Apparatuur | 52-3779 | 12,5 cm (5 cm) |
| Michel Clip 100 | Harvard Apparatuur | 52-3746 | 7.5-1.75 mm |
| Temgesic (buprenorfinehydrochloride) | Schering-Plough | ||
| Vetalar (Ketamine hydrochloride) | Boniche Animal Healthcare | DIN: 01989529 | |
| Rompun (xylazine) | Bayer | DIN: 02169592 | |
| Isofluraan | ABBOTT | DIN: 02032384 | |
| Hypotears oogzalf | Novartis Ophtalmics | DIN: 02133288 | |
| Baxedin (Clorhexidine gluconaat 2% in isopropylalcohol 70%) | Omega | L0000017 | DIN: 02251477 |
Referenties
- Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen. Nature. 458, 211-214 (2009).
- Vezys, V. Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience. Nature. 457, 196-199 (2009).
- Zho....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
