Basis-<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Methoden: Synchronisatie-en-

Samenvatting

Het gemak van het behoud en het uitdragen van de nematode C. elegans Maken het een leuk model organisme om mee te werken. De mogelijkheid synchronisatie wormen kan het werken met een aanzienlijke hoeveelheid onderwerpen aan dezelfde ontwikkelingsfase, wat maakt de studie van een bepaald proces veel dieren.

Samenvatting

Onderzoek naar de Ontwikkelings-en Moleculaire biologie van de nematode Caenorhabditis elegans is begonnen in de vroege jaren zeventig door Sydney Brenner en het is sindsdien veelvuldig gebruikt als modelorganisme ^1. C. elegans bezit essentiële eigenschappen als eenvoud, transparantie en korte levenscyclus hebben gemaakt dat het een geschikte experimentele systeem voor fundamenteel biologisch onderzoek voor vele jaren ^2. Ontdekkingen in deze nematode heeft grote gevolgen, omdat vele cellulaire en moleculaire processen die de dieren ontwikkeling zijn evolutionair geconserveerd ^3.

C. elegans levenscyclus gaat door middel van een embryonale fase en vier larvale stadia voordat de dieren volwassen zijn. Ontwikkeling kan 2 tot 4 dagen te afhankelijk van de temperatuur. In elk van de fasen een aantal kenmerkende eigenschappen waar te nemen. De kennis van de complete cellijn ^4,5 samen met de diepe annotation van zijn genoom maken van dit aaltje in een groot model in uiteenlopende gebieden als de neurobiologie ^6, de vergrijzing ^7,8, stamcelbiologie ⁹ en kiembaan biologie ^10.

Een extra functie dat C. maakt elegans aantrekkelijk model te werken met de mogelijkheid om populaties wormen gesynchroniseerd in een bepaald stadium met een relatief eenvoudige protocol. Het gemak van onderhoud en propageren van deze nematode toegevoegd om de mogelijkheid van synchronisatie een krachtig middel grote hoeveelheden wormen, die kunnen worden gebruikt voor een groot aantal kleine of high-throughput experimenten zoals RNAi schermen, microarrays, massieve sequencing verkrijgen, immunoblot of in situ hybridisatie, onder anderen.

Door de transparantie C. elegans structuren kunnen worden onderscheiden onder de microscoop met differentieel interferentie contrast microscopie, ook bekend als micro Nomarskikopiëren. Het gebruik van een fluorescerende DNA bindmiddel DAPI (4 ', 6-diamidino-2-fenylindool) bijvoorbeeld kan leiden tot de specifieke identificatie en lokalisatie van individuele cellen alsmede subcellulaire structuren / defecten worden herkend.

Protocol

1. Protocol A: Het kweken van Worms voor het bleken van ¹¹

Grote populaties van C. elegans kan worden verkregen door het kweken die hetzij in vloeibare media of vast medium in platen. Ze zijn meestal gegroeid op vaste NGM (Nematode Groei Media) en gevoed met E. coli bacteriën, die aan de platen een levend of dood (gedood door UV ^12, door hitte ¹³ of koude door ^14). De meest gebruikelijke procedure maakt gebruik van live-OP50 E. coli die defect in de synthese van uracil en niet overwoekeren een dikke laag zou belemmeren de wormen.

1. Meng 3 g NaCl, 17 g agar en ....

Discussie

Nematode Synchronisatie

Verschillende oplossingen bleken zijn beschreven. We hebben geprobeerd vijf verschillende recepten (Tabel I) en, in onze handen, ze toonde geen significante verschillen in de synchronisatie van worm populaties (afb. 1). Maar onze experimenten toonden aan dat zoals temperatuur (Fig. 2), de verhouding bleekoplossing: volume van wormen (fig. 3) en het volume van M9 met de embryo's geïncubeerd broedeiere.......