$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Onderhoud van antigeen-specifieke T-cellijnen of klonen in cultuur vereist rondes van antigeen-geïnduceerde activatie van elkaar gescheiden door fasen van celexpansie 1,2. Toevoeging van interleukine 2 tot en met de cultuur media tijdens de expansiefase nodig is om celdood te voorkomen en voldoende is om op korte termijn T-cel-lijnen te handhaven, maar is aangetoond dat Th1-polarisatie 3 te verhogen. Vervanging van interleukine-2 door T-cel groeifactor (TCGF), die een mix van cytokines bevat, is effectiever dan interleukine 2 het behoud op lange termijn T-cellijnen in vitro 3. Bovendien kan TCGF gemakkelijk worden bereid in grote hoeveelheden in het laboratorium en is veel goedkoper dan recombinant interleukine 2.
Hier laten we zien hoe TCGF te bereiden van de rat splenocyten kweeksupernatanten. Voor deze procedure, oogsten we de milt van naïeve Lewis-ratten gedood voor de thymus en bloedafname. Wij bereiden single-cell schorsingen van de milt, Lyze de rode bloedcellen door osmotische schok, en zaad van de splenocyten in kweekmedium. De cellen worden gestimuleerd met Concanavaline A, een mitogeen dat niet-selectief activeert alle rat T-lymfocyten, het induceren van de productie van cytokines. De cultuur supernantant is 48 uur later verzameld andexcess Concanavaline A is gebonden aan alfa-methyl-mannoside om te voorkomen dat het activeren van T-cellijnen die TCGF zal worden toegevoegd. De TCGF wordt dan steriel gefiltreerd, gealiquoteerd, en opgeslagen bij -20 ° C.