De maartuitgave van het Journal of Visualized Experiments (JoVE) begint met een artikel dat zich richt op drie fundamenteel belangrijke assays voor het meten van het locomotorisch gedrag van Drosophila. Specifiek omvatten deze assays de kruipassay voor larven (voor de motorische functie van larven), de RING-assay (voor de motorische functie van volwassenen) en de hofmakerijassay (om coördinatie en sensorische vermogens te beoordelen).
De kruiptest voor larven omvat het verzamelen van larven en het blootstellen van de juveniele vliegen aan een experimenteel geneesmiddel van belang. De dieren worden vervolgens overgebracht naar een petrischaal die op een vel ruitjespapier is geplaatst, waarna het aantal per minuut overgestoken rasterlijnen kan worden berekend.
Het Rapid Iterative Negative Geotaxis-protocol, of RING-protocol, houdt in dat volwassen vliegen in gespecialiseerde vials worden geplaatst waar ze door voorzichtig tikken naar de bodem worden gedwongen. Fruitvliegen zullen instinctief omhoog kruipen, tegen de zwaartekracht in. Via beeldanalyse kan de mate van locomotorische vaardigheid van de volwassenen worden bepaald door te meten hoe ver de vliegen in een korte periode omhoog kunnen klimmen.
Om een complexer, zintuigelijk gestuurd gedrag te beoordelen, wordt de hofmakerij-assay gebruikt, die begint met het plaatsen van seksueel naïeve mannetjes en vrouwtjes in een gespecialiseerd apparaat dat bekend staat als het paringsrad. Tijdens de experimentele sessies registreren onderzoekers de hoeveelheid tijd waarin het mannelijke vliegje verschillende karakteristieke hofmakerijgedragingen vertoont. Indrukwekkend genoeg zal het mannelijke vliegje zich binnen enkele minuten naar het vrouwtje richten, op haar abdomen tikken, een lied produceren met zijn vleugel, het vrouwtje aflikken en uiteindelijk copuleren.
Samen vormen deze assays een reeks krachtige gedragstesten die kunnen helpen bij het verduidelijken van de genetische en omgevingsfactoren die bijdragen aan het gedrag van drosophila.
Later in de maand verschuift JoVE de focus naar inspanningsfysiologie, waarbij onderzoekers van de Universiteit van São Paulo een methode presenteren die is ontworpen om de bijdrage van de verschillende energiesystemen aan complexe inspanningen, zoals sporten, te onthullen. Als voorbeeld hebben onze auteurs judo gekozen voor hun demonstratie. Met behulp van een zorgvuldig geplaatste draagbare gasanalyser kan het zuurstofverbruik tijdens judo-inspanningen onder gecontroleerde omstandigheden worden gemeten. Door het zuurstofverbruik vóór, tijdens en na de inspanning te vergelijken, kan de energetische bijdrage van het aerobe en alactische anaerobe metabolisme worden bepaald. Bloedafname vóór en na de inspanning, gevolgd door elektrochemische analyse, wordt gebruikt om de energetische bijdrage van het lactische anaerobe metabolisme aan de sport judo te bepalen. Wanneer men de gegevens van het zuurstofverbruik combineert met de plasmalactaatconcentratie, kunnen de relatieve bijdragen van de verschillende energiesystemen aan specifieke aspecten van complexe inspanning, zoals iemands favoriete judoworp, worden bepaald.
Ook in maart plant JoVE de release van een ontwikkelingsstudie betreffende alcoholblootstelling bij zebravissen. Zodra embryo's zich hebben ontwikkeld tot het gewenste tijdstip, kunnen de effecten van alcoholblootstelling op de genexpressie worden beoordeeld door mRNA te zuiveren en qPCR uit te voeren, en door whole mount in situ hybridisatie. Met behulp van lichtmicroscopie kunnen ook morfologische veranderingen, zoals de vorm van de somieten, worden beoordeeld. Als wordt waargenomen dat een gen van belang afneemt of toeneemt door ethanolblootstelling, kan er gecapt mRNA of morpholino in het embryo worden geïnjecteerd, rond het tweecelstadium, om het door alcohol geïnduceerde fenotype te herstellen. Onze auteurs tonen aan dat alcoholblootstelling in de ontwikkelende zebravissen resulteert in morfologische fenotypes en genexpressieprofielen die vergelijkbaar zijn met die waargenomen bij zoogdieren, en zij demonstreren ook dat mRNA-injectie de effecten van alcohol op ontwikkelingsafwijkingen kan omkeren.
In Immunology and Infection presenteert JoVE een experiment in de plantparasitologie, afkomstig van UC Riverside. In het bijzonder zijn onze auteurs geïnteresseerd in de wortelknutupmaagd - een obligate plantparasiet die zich vrij door vochtige grond verplaatst om de wortels van planten te infecteren en zich te voeden. Allereerst worden methoden beschreven voor het verwerken van geïnfecteerde planten en het verzamelen van wortelknutupmaagden. Zodra juveniele wormen een stadium van hoge infectiviteit bereiken, kan de bodem worden geïnoculeerd. Vervolgens kunnen wortels worden gekleurd en beoordeeld op de aanwezigheid van de kenmerkende wortelknobbels die door deze parasieten worden veroorzaakt. Naast experimenten met potplanten laten onze auteurs zien hoe wortelknut-assays kunnen worden uitgevoerd met planten die in transparante zakken zijn gekweekt, wat het bekijken van de wortels vergemakkelijkt en high-throughput screening mogelijk maakt voor de aanwezigheid van deze verwoestende infectie, die jaarlijks verantwoordelijk is voor 5% van het wereldwijde oogstverlies.
Deze samenvatting van de inhoud van JoVE voor maart belicht vier van de meer dan vijftig artikelen die deze maand worden gepubliceerd. Andere opmerkelijke experimenten omvatten methoden voor het in beeld brengen van geur-evokeerde responsen in de antenne van fruitvliegen, het gebruik van een elektronische neus voor de analyse van vluchtige verbindingen uit fruit, en het hergebruik van gewone kantoorbenodigdheden voor het afleveren van macromoleculen in levende cellen.