Erratum: Reaggregatie van thymusculturen

Samenvatting

Er is een correctie aangebracht in: Reaggregate Thymus Cultures. Vanwege een fout van de uitgever is een herziene samenvatting opnieuw gepubliceerd.

Samenvatting

Er is een correctie aangebracht in: Reaggregate Thymus Cultures. Vanwege een fout van de uitgever is een herziene samenvatting opnieuw gepubliceerd. De samenvatting is als volgt gecorrigeerd:

Stromale cellen binnen lymfoïde weefsels zijn georganiseerd in driedimensionale structuren die een steiger vormen die naar verluidt de migratie en ontwikkeling van hematopoëtische cellen reguleert. Belangrijk is dat het behoud van deze driedimensionale organisatie cruciaal lijkt te zijn voor de normale functie van stromale cellen, aangezien tweidimensionale monolaagculturen vaak slechts in staat blijken individuele fragmenten van de lymfoïde weefselfunctie te ondersteunen. In de thymus fungeren complexe netwerken van corticale en medullaire epitheelcellen als een raamwerk dat de rekrutering, proliferatie, differentiatie en overleving van lymfoïde progenitoren reguleert terwijl zij het meerstaps proces van intrathymische T-celontwikkeling doorlopen. Inzicht in de functionele rol van individuele stromale compartimenten in de thymus is essentieel om te bepalen hoe de thymus onderscheid maakt tussen eigen en niet-eigen cellen. Hier beschrijven we een techniek waarbij we de plasticiteit van foetale weefsels benutten om in vitro opnieuw intacte driedimensionale structuren te vormen, na hun enzymatische disaggregatie. De dissociatie van foetale thymuskwabben in heterogene cellulaire mengsels, gevolgd door hun scheiding in individuele cellulaire componenten, wordt vervolgens gecombineerd met de in vitro re-associatie van deze gewenste celtypen tot driedimensionale re-aggregaatstructuren in gedefinieerde verhoudingen, waardoor de mogelijkheid ontstaat om specifieke aspecten van de T-celontwikkeling onder gedefinieerde cellulaire condities te onderzoeken. (Dit artikel is gebaseerd op werk dat voor het eerst is beschreven in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pagina's 185-196).

van

In de thymus ondergaan onrijpe CD4+8+ thymocyten, die willekeurig gerearrangeerde T-celreceptor α- en β-ketengenen tot expressie brengen, positieve en negatieve selectieprocessen op basis van hun vermogen om zelfpeptide/major histocompatibility complex (MHC)-moleculen te herkennen die worden tot expressie gebracht door thymische stromale cellen. In vivo-analyse van de rol van thymische stromale cellen tijdens intrathymische selectie wordt bemoeilijkt door de cellulaire complexiteit van de thymische micro-omgeving in de volwassen thymus in rusttoestand, en door het gebrek aan geschikte targeting-strategieën om de genexpressie in specifieke thymische stromale compartimenten te manipuleren. Wij hebben aangetoond dat de thymische micro-omgeving in vitro eenvoudig kan worden gemanipuleerd door het gebruik van reaggregeerde thymus-organculturen, waarmee driedimensionale thymuslobuli kunnen worden geprepareerd uit gedefinieerde stromale en lymfoïde cellen. Hoewel andere in vitro-systemen bepaalde aspecten van de T-celontwikkeling ondersteunen, blijft de reaggregeerde thymus-organcultuur het enige in vitro-systeem dat in staat is om efficiënte MHC-klasse I- en II-gemedieerde thymocytselectieprocessen te ondersteunen, en kan het daarom worden gebruikt als een effectief instrument om de cellulaire en moleculaire regulatie van positieve en negatieve selectie in de thymus te bestuderen.

Protocol

Er is een correctie aangebracht in: Reaggregate Thymus Cultures. Een herziene samenvatting is opnieuw gepubliceerd vanwege een fout van de uitgever. De samenvatting is als volgt gecorrigeerd:

Stromale cellen binnen lymfoïde weefsels zijn georganiseerd in driedimensionale structuren die een steungeraamte vormen dat naarstreefsel de migratie en ontwikkeling van hematopoëtische cellen reguleert. Belangrijk is dat het behoud van deze driedimensionale organisatie cruciaal lijkt te zijn voor de normale functie van stromale cellen, aangezien tweedimensionale monoculturen vaak slechts in staat zijn om individuele fragmenten van de lymfoïde weefselfunctie te ondersteunen. In de thymus fungeren complexe netwerken van corticale en medullaire epitheelcellen als een raamwerk dat de rekrutering, proliferatie, differentiatie en overleving van lymfoïde progenitoren reguleert terwijl zij het meerstaps proces van intrathymische T-celontwikkeling doorlopen. Het begrijpen van de functionele rol van individuele stromale compartimenten in de thymus is essentieel om te bepalen hoe de thymus onderscheid maakt tussen eigen en niet-eigen weefsels. Hier beschrijven we een techniek waarbij we de plasticiteit van foetale weefsels benutten om deze in vitro opnieuw te associëren tot intacte driedimensionale structuren, na hun enzymatische disaggregatie. De dissociatie van foetale thymuslobuli tot heterogene cellulaire mengsels, gevolgd door de scheiding ervan in individuele cellulaire componenten, wordt vervolgens gecombineerd met de in vitro re-associatie van deze gewenste celtypen tot driedimensionale re-aggregaatstructuren in gedefinieerde verhoudingen, waardoor de mogelijkheid ontstaat om specifieke aspecten van de T-celontwikkeling onder gedefinieerde cellulaire condities te onderzoeken. (Dit artikel is gebaseerd op werk dat voor het eerst is beschreven in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pagina's 185-196).

van

In de thymus ondergaan onrijpe CD4+8+ thymocyten, die willekeurig gerearrangeerde T-celreceptor α- en β-ketengenen tot expressie brengen, positieve en negatieve selectiegebeurtenissen op basis van hun vermogen om zelfpeptide/major histocompatibility complex (MHC)-moleculen te herkennen die worden tot expressie gebracht door thymische stromale cellen. In vivo-analyse van de rol van thymische stromale cellen tijdens intrathymische selectie wordt bemoeilijkt door de cellulaire complexiteit van de thymische micro-omgeving in de steady-state volwassen thymus, en door het gebrek aan geschikte targetingstrategieën om de genexpressie in specifieke thymische stromale compartimenten te manipuleren. Wij hebben aangetoond dat de thymische micro-omgeving in vitro gemakkelijk gemanipuleerd kan worden door gebruik te maken van reaggregaat thymus-organculturen, waarmee driedimensionale thymuslobuli kunnen worden geprepareerd uit gedefinieerde stromale en lymfoïde cellen. Hoewel andere in vitro-systemen bepaalde aspecten van de T-celontwikkeling ondersteunen, blijft de reaggregaat thymus-organcultuur het enige in vitro-systeem dat in staat is om efficiënte MHC klasse I- en II-gemedieerde thymocytselectiegebeurtenissen te ondersteunen, en kan het daarom worden gebruikt als een effectief instrument om de cellulaire en moleculaire regulatie van positieve en negatieve selectie in de thymus te bestuderen.