Erratum: Bereiding van met 2-dGuo behandelde thymus-organculturen

Samenvatting

Er is een correctie aangebracht in: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Vanwege een fout van de uitgever is er een herziene samenvatting opnieuw gepubliceerd.

Samenvatting

Er is een correctie aangebracht in: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Vanwege een fout van de uitgever is een herziene samenvatting opnieuw gepubliceerd. De samenvatting is als volgt gecorrigeerd:

In de thymus is bekend dat interacties tussen ontwikkelende T-celprecursoren en stromale cellen, waaronder corticale en medullaire epitheelcellen, een sleutelrol spelen bij de ontwikkeling van een functioneel competente T-celpool. De complexiteit van de T-celontwikkeling in de thymus in vivo kan echter de analyse van individuele cellulaire componenten en specifieke ontwikkelingsstadia beperken. In vitro kweeksystemen bieden een gemakkelijk toegankelijke manier om meerdere complexe cellulaire processen te bestuderen. Thymus-organkweeksystemen vormen een veelgebruikte benadering om de intrathymische ontwikkeling van T-cellen onder gedefinieerde condities in vitro te bestuderen. Hier beschrijven we een systeem waarin embryonale thymuslobben van muizen kunnen worden ontdaan van endogene hematopoëtische elementen door voorafgaande organkweek in 2-deoxyguanosine, een verbinding die selectief toxisch is voor hematopoëtische cellen. Naast het bieden van een gemakkelijk toegankelijke bron van thymische stromale cellen om de rol van thymische micro-omgevingen bij de ontwikkeling en selectie van T-cellen te onderzoeken, vormt deze techniek ook de basis voor verdere experimentele benaderingen. Deze omvatten de in vitro reconstitutie van alymphoïde thymuslobben met gedefinieerde hematopoëtische elementen, de transplantatie van alymphoïde thymussen in recipientmuizen en de vorming van reaggregaat-thymus organkweken. (Dit artikel is gebaseerd op werk dat voor het eerst werd gerapporteerd in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pagina's 185-196).

van

In de thymus ondergaan onrijpe CD4+8+ thymocyten, die willekeurig gerearrangeerde T-celreceptor α- en β-kettingenen tot expressie brengen, positieve en negatieve selectieprocessen op basis van hun vermogen om zelf-peptide/major histocompatibility complex (MHC)-moleculen te herkennen die worden tot expressie gebracht door thymische stromale cellen. In vivo-analyse van de rol van thymische stromale cellen tijdens intrathymische selectie wordt bemoeilijkt door de cellulaire complexiteit van de thymische micro-omgeving in de volwassen thymus in rusttoestand, en door het gebrek aan passende targetingstrategieën om de genexpressie in specifieke thymische stromale compartimenten te manipuleren. We hebben aangetoond dat de thymische micro-omgeving in vitro eenvoudig gemanipuleerd kan worden door gebruik te maken van reaggregeerde thymus-orgaanculturen, waarmee driedimensionale thymuslobuli kunnen worden geprepareerd uit gedefinieerde stromale en lymfoïde cellen. Hoewel andere in vitro-systemen bepaalde aspecten van de T-celontwikkeling ondersteunen, blijft de reaggregeerde thymus-orgaancultuur het enige in vitro-systeem dat in staat is om efficiënte MHC-klasse I- en II-gemedieerde thymocytselectieprocessen te ondersteunen, en kan daarom worden gebruikt als een effectief instrument om de cellulaire en moleculaire regulatie van positieve en negatieve selectie in de thymus te bestuderen.

Protocol

Er is een correctie aangebracht in: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Vanwege een fout van de uitgever is een herziene samenvatting opnieuw gepubliceerd. De samenvatting is als volgt gecorrigeerd:

In de thymus is bekend dat interacties tussen ontwikkelende T-celprecursoren en stromale cellen, waaronder corticale en medullaire epitheelcellen, een sleutelrol spelen bij de ontwikkeling van een functioneel competente T-celpool. De complexiteit van de T-celontwikkeling in de thymus in vivo kan echter de analyse van individuele cellulaire componenten en specifieke ontwikkelingsstadia beperken. In vitro culturesystemen bieden een gemakkelijk toegankelijke manier om meerdere complexe cellulaire processen te bestuderen. Thymus-orgaankultuursystemen vormen een veelgebruikte benadering om de intrathymische ontwikkeling van T-cellen onder gedefinieerde condities in vitro te bestuderen. Hier beschrijven we een systeem waarin embryonale thymuslobben van muizen kunnen worden ontdaan van endogene hematopoëtische elementen door voorafgaande orgaankweek in 2-deoxyguanosine, een verbinding die selectief toxisch is voor hematopoëtische cellen. Naast het bieden van een gemakkelijk toegankelijke bron van thymische stromale cellen om de rol van thymische micro-omgevingen bij de ontwikkeling en selectie van T-cellen te onderzoeken, vormt deze techniek ook de basis voor verdere experimentele benaderingen, waaronder de reconstitutie van lymfoïde thymuslobben in vitro met gedefinieerde hematopoëtische elementen, de transplantatie van lymfoïde thymussen in recipientmuizen en de vorming van re-geaggregeerde thymus-orgaankulturen. (Dit artikel is gebaseerd op werk dat voor het eerst is beschreven in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pagina's 185-196).

van

In de thymus ondergaan onrijpe CD4+8+ thymocyten, die willekeurig gerearrangeerde T-celreceptor α- en β-ketengenen tot expressie brengen, positieve en negatieve selectieprocessen op basis van hun vermogen om zelfpeptide/major histocompatibility complex (MHC)-moleculen te herkennen die worden tot expressie gebracht door thymische stromale cellen. In vivo analyse van de rol van thymische stromale cellen tijdens intrathymische selectie wordt bemoeilijkt door de cellulaire complexiteit van de thymische micro-omgeving in de volwassen thymus in rusttoestand, en door het gebrek aan geschikte targetingstrategieën om de genexpressie in specifieke thymische stromale compartimenten te manipuleren. Wij hebben aangetoond dat de thymische micro-omgeving in vitro gemakkelijk kan worden gemanipuleerd door gebruik te maken van reaggregeerde thymus-organculturen, waarmee driedimensionale thymuskwabben kunnen worden geprepareerd uit gedefinieerde stromale en lymfoïde cellen. Hoewel andere in vitro systemen sommige aspecten van de T-celontwikkeling ondersteunen, blijft de reaggregeerde thymus-organcultuur het enige in vitro systeem dat in staat is om efficiënte MHC klasse I- en II-gemedieerde thymocytselectieprocessen te ondersteunen, en kan het daarom worden gebruikt als een effectief instrument om de cellulaire en moleculaire regulatie van positieve en negatieve selectie in de thymus te bestuderen.