Het doel is om een arterioveneuze fistel die is eenvoudig en reproduceerbaar te produceren. Deze methode maakt geen gebruik van hechtingen of lijm lijm. Derhalve kunnen de monsters worden met de minste hoeveelheid vreemde materialen voor analyse.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Technische aspecten van de muis Aortocaval Fistula
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Technische aspecten van het creëren van een arterioveneuze fistel in de muis worden besproken. Onder algehele anesthesie, wordt een abdominale incisie gemaakt en de aorta en inferior vena cava (IVC) blootgesteld. De proximale infrarenale aorta en de distale aorta worden ontleed voor klem plaatsing en naald punctie, respectievelijk. Speciale aandacht wordt besteed aan dissectie tussen de aorta en de IVC te voorkomen. Na het klemmen van de aorta, is een 25 G naald gebruikt voor het doorprikken beide wanden van de aorta in de IVC. De omringende bindweefsel wordt gebruikt voor hemostatische compressie. Succes bij de oprichting van de AVF zal pulserende arteriële bloedstroom in de IVC tonen. Verdere bevestiging van succesvolle AVF kan door postoperatieve Doppler ultrasound.
Inleiding
De meest voorkomende optie gekozen voor nierfunctievervangende therapie bij patiënten met eindstadium nierziekte is hemodialyse. Toegang voor hemodialyse wordt uitgevoerd door arterioveneuze fistel (AVF), arterioveneuze graft, of tijdelijke plaatsing van de katheter. Hoewel AVF zijn de gewenste wijze van toegang, AVF zijn nog verre van perfect. Eenjarige primaire AVF doorgankelijkheid zijn slechts 60-65%, met veel mislukkingen te wijten aan neointimale hyperplasie. De moleculaire biologie en fysiologie van de normale AVF vorming en onaangepaste vorming blijft slecht gekarakteriseerd. Als zodanig, veel is te winnen in het verbeteren van AVF resultaten met de bijbehorende winst in begrip van de regulatie van fistelvorming. 1-3
Blootstelling van een ader arteriële stroming wordt vaak bestudeerd in de context van vaatprothesen die direct modellen van chirurgische bypass. 4, 5 Hoewel vaatprothesen en AVF eveneens een ader bloot aan een arteriële omgeving, zijn er een aantal kritische differences daartussen. Ten eerste, de weerstand van het distale afvoer bed veel geringer in AVF, zoals de AVF afgevoerd naar het rechter atrium terwijl de bypass waterafvoeren vaak zieke distale kleine slagaders, resulterend in verhoogde bloedstroom en schuifspanning in de AVF. Ten tweede kan het bloed in de veneuze tak van de AVF een mengsel van veneus en arterieel bloed leidt tot lagere oxygenatie vergeleken met de zuiver arteriële in de bypass zijn. Ten derde wordt de ader in de AVF niet uit het bed, wat leidt tot behoud van het vaso venorum en nerveus innervatie, vergeleken met de volledige omzetting van de bypass in de slagaderlijke bed. Tenslotte het aantal anastomosen gewoonlijk twee in vaatprothesen terwijl een AVF heeft gewoonlijk slechts een. In deze studie introduceren we een muismodel van aortocaval fistel die kan worden gebruikt voor de studie van AVF.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Anesthesie en Pre-operatieve procedures
- Inductie van algemene anesthesie
Goedkeuring door de juiste Institutional Animal Care en gebruik Comite wordt verkregen. Man C57/black muizen, 10 weken oud, zijn verdoofd. Leveren 4% isofluraan met 0,8 L / min zuurstof aan een plexiglas doos via een isofluraan vaporizer en plaats de muis binnen. Alternatief, indien gewenst door de chirurg, intraperitoneale anesthesie worden gebruikt. - Behoud van anesthesie
Na bevestiging van de anesthesie door een gebrek aan reactie op teen knijpen, wordt de muis op de operatie tafel in een liggende positie met een siliconen masker. Isofluraan wordt verlaagd tot 2% passende anesthesie te handhaven. - Ontharen
Ventrale haren wordt verwijderd uit de hals naar onderbuik behulp van een haar remover. Haarvlekkenmiddel de voorkeur omdat het haar dat overblijft met een scheerapparaat kan interfereren met de Doppler ultrageluid.
2. Preoperatieve Ultrasound
- Doelstellingen van de ultrasone
Doppler ultrasound onderzoek wordt uitgevoerd voorafgaand aan AVF operatie teneinde het niveau bevindingen basis die kan worden vergeleken met postoperatieve bevindingen anatomische en fysiologische veranderingen zien opnemen. - Punten van observatie
De halsader, supra-en infra-renale vena cava inferior (IVC), en abdominale aorta worden onderzocht met behulp van zowel puls Doppler-en B-modus. - Metingen
Gebruik van de B-modus diameter van elke vasculatuur gemeten. Daarnaast zijn maximale snelheid (piek systolische snelheid in slagaders) en golfvormen die in elk van de meetpunten hierboven beschreven.
3. Operatieve procedures
- Muis Voorbereiding
Bereid de incisie site met een actueel antiseptische en blijven goede aseptische techniek tijdens de operatie, waaronder het gebruik van een chirurgische doek, steriele handschoenen en instrumenten, etc. - Laparotomie
Middellijn incisie in de buik wordt gemaakt from onderrand van de lever tot net boven de pubis. - Blootstelling van de aorta en IVC.
Een retractor is geplaatst en alle darmen getrokken uit de buikholte naar rechts en hield verpakt in gaas doordrenkt met zoutoplossing. Ontleden het membraan dat de retroperitoneum en onderste dikke darm wordt aangesloten op het volle zicht van de aorta en IVC krijgen. Breng druk op de blaas als het verwijde en komt in de weg. - Blootstelling van de prikplaats
Prikplaats zal worden tussen de helft tot driekwart van de afstand van de linker nier-ader aan aortabifurcatie. (Figuur 1) Prepareer de linkermarge van de aorta, zodat het kan worden doorboord. Houd in gedachten dat de aorta is gepositioneerd ongeveer 45 graden achter de IVC en het moet posteriorly worden ontleed in aanvulling op de linkerkant. (Figuur 2) Het belangrijkste punt van deze operatie is niet te ontleden tussen de aorta en IVC. Ver weg van hen te houden. - Blootstelling van de klem site van de aorta
Ontleden de infrarenale aorta uit de omliggende weefsels. Wees voorzichtig de IVC niet te verwonden aan de linker en rechter nieraders met haar zijrivieren aan de rechterkant. - Klemmen van de aorta
Klem de proximale aorta door het toepassen van microchirurgie clips. - Rotatie van de aorta
Grijpen door het bindweefsel van de aorta, draai de aorta, zodat de punctie kan worden gemaakt van enigszins dorsale zijde van de aorta (figuur 2). - Punctie van de aorta tot IVC
Het houden van de aorta in een gedraaide positie, doorboren de aorta door naar IVC met een 25 G naald. (Figuur 2) Als dat lukt, kan de naald worden gezien door de dunne IVC muur. - Hemostase
Door aan de retroperitoneale weefsels, waaronder de spieren, wikkel de prikplaats van de aorta. Niet comprimeren de aorta tegen de IVC, als het kan stollen de AVF (figuur 3). - De-klemmen van de aorta
Na bevestigingvan de primaire hemostase, de-klem de aorta. Aanvullende bloedingen kan veroorzaken, maar het kan worden gestopt met verdere compressie hierboven beschreven. Bij de-klemmen, kan arteriële bloed te zien stromen in het IVC in plaats van donkere veneuze bloedstroom. - Sluiting van de buik
Terug de darmen in zijn natuurlijke positie en sluit de buik.
4. Post-operatieve procedures
- Postoperatieve zorg
Na sluiting van het abdomen wordt isofluraan gestopt. Postoperatieve zorg, waaronder analgesie en wondverzorging wordt toegepast in overeenstemming met de instructies aanbevolen door de Institutional Animal Care en gebruik Comite. Analgesie gebruiken we buprenorfine bij 0,1 mg / kg intrasmuscularly elke 12 uur gedurende 24 uur na de chirurgische procedures. - Post-operatieve echografie
Op de eerste dag na de operatie, is Doppler-echografie uitgevoerd om de AVF bevestigen. Daarnaast worden andere gemeten variabelen de veranderingen van pre-operatieve checkwaarden.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Na praktijk overleven op de eerste dag na de operatie is normaal meer dan 95%, bij post-operatieve dagen 7, overleving was 91.3% Figuren 1 en 2 tonen het ideale punctieplaats in coronale en dwarsdoorsneden,. Plaatsing van de punctie site is van cruciaal belang voor het verkrijgen van goede overlevingskansen zonder overmatige bloeding. Intra-operatieve sterfte en vroege post-operatieve sterfgevallen zijn meestal te wijten aan bloeding. Dit neigt te ontstaan met overmatige dissectie tussen de aorta en d...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Er zijn verschillende rapporten die AVF zijn beschreven in ratten, zoals femorale AVF, 6, 7 halsslagader te AVF 8 en aorto-caval AVF halsader. 9, 10 De rat is vele malen groter dan de muis, wat een eenvoudigere chirurgie in de rat vergeleken de muis. Niettemin, om te profiteren van de muis genetische stammen en varianten neemt de procedure moet worden uitgebreid naar muismodellen omvatten. Verschillende eerder gepubliceerde rapporten leidt de AVF model in muizen, maar deze rapporten ware...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dankbetuigingen
Dit werk werd mede ondersteund door het National Institute of Health subsidie R01-HL095498, alsook met de middelen en het gebruik van de faciliteiten van de VA Connecticut Healthcare System, West Haven, CT.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Vevo 770 echografieapparaat | Visualsonics | 20-60 Mhz scankop; RMV-704 | |
| Vasculaire klem | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5424 | |
| Klemappliceertang | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 | |
| 25 Gauge naald | Becton Dickinson | BD PrecisionGlide naald 25G x 7/8 #305124 |
Referenties
- Allon, M. Current management of vascular access. Clinical Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 786-800 (2007).
- Dixon, B. S. Why don't fistulas mature? Kidney International. 70 (8), 1413-1422 (2006).
- Roy-Chaudhury, P., Spergel, L. M., Besarab, A., Asif, A., Ravani, P. Biology of arteriovenous fistula failure. Journal of Nephrology. 20 (2), 150-163 (2007).
- Kudo, F. A., Muto, A., et al. Venous identity is lost but arterial identity is not gained during vein graft adaptation. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 27 (7), 1562-1571 (2007).
- Muto, A., Yi, T., et al. Eph-B4 prevents venous adaptive remodeling in the adult arterial environment. The Journal of Experimental Medicine. 208 (3), 561-575 (2011).
- Croatt, A. J., Grande, J. P., et al. Characterization of a model of an arteriovenous fistula in the rat: the effect of L-NAME. The American Journal of Pathology. 176 (5), 2530-2541 (2010).
- Misra, S., Fu, A. A., et al. The rat femoral arteriovenous fistula model: increased expression of matrix metalloproteinase-2 and -9 at the venous stenosis. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 19 (4), 587-594 (2008).
- Kojima, T., Miyachi, S., et al. The relationship between venous hypertension and expression of vascular endothelial growth factor: hemodynamic and immunohistochemical examinations in a rat venous hypertension model. Surgical Neurology. 68 (3), 277-284 (2007).
- Caplice, N. M., Wang, S., et al. Neoangiogenesis and the presence of progenitor cells in the venous limb of an arteriovenous fistula in the rat. American Journal of Physiology Renal Physiology. 293 (2), F470-F475 (2007).
- Nath, K. A., Kanakiriya, S. K., Grande, J. P., Croatt, A. J., Katusic, Z. S. Increased venous proinflammatory gene expression and intimal hyperplasia in an aorto-caval fistula model in the rat. The American Journal of Pathology. 162 (6), 2079-2090 (2003).
- Karram, T., Hoffman, A., et al. Induction of cardiac hypertrophy by a controlled reproducible sutureless aortocaval shunt in the mouse. Journal of Investigative Surgery. 18 (6), 325-334 (2005).
- Perry, G. J., Mori, T., et al. Genetic variation in angiotensin-converting enzyme does not prevent development of cardiac hypertrophy or upregulation of angiotensin II in response to aortocaval fistula. Circulation. 103 (7), 1012-1016 (2001).
- Guzman, R. J., Krystkowiak, A., Zarins, C. K. Early and sustained medial cell activation after aortocaval fistula creation in mice. The Journal of Surgical Research. 108 (1), 112-121 (2002).
- Castier, Y., Lehoux, S., et al. Characterization of neointima lesions associated with arteriovenous fistulas in a mouse model. Kidney International. 70 (2), 315-320 (2006).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
