De zoogdieren neus is een multi-functioneel orgaan met ingewikkelde interne structuren. De neusholte is bekleed met diverse epitheel zoals reuk, ademhalings-en geschubde epitheel sterk kunnen verschillen in anatomische locaties, morfologie en functies. In volwassen muizen, is de neus bedekt met verschillende schedelbeenderen, het beperken van experimentele toegang tot interne structuren, vooral die in het achterste, zoals de belangrijkste reukepithelium (MOE). Hier beschrijven we een effectieve methode voor het verkrijgen van nagenoeg de volledige en intacte nasale weefsels met bewaarde anatomische structuur. Met behulp van chirurgische instrumenten onder een dissectie microscoop, we achtereenvolgens verwijder de schedel botten rond de neus weefsel. Deze procedure kan worden uitgevoerd op zowel paraformaldehyde-vaste en vers ontleed, gevilde muis hoofden. De gehele uitbenen duurt ongeveer 20-30 min, die aanzienlijk korter is dan de experimentele tijd die conventionele chemische basis deverkalking. Daarnaast presenteren we een eenvoudige methode om luchtbellen gevangen tussen turbinates, die van cruciaal belang voor het verkrijgen van intacte dunne horizontale of coronale of sagittale secties van de nasale voorbereiding weefsel te verwijderen. Neusweefsel bereid met onze methode kan worden gebruikt voor de hele montage waarneming van het gehele epitheel, evenals morfologische, immunocytochemische en RNA in situ hybridisatie en fysiologische studies, vooral in studies waar regiospecifieke onderzoek en vergelijking van belang.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Een effectieve Manual Uitbenerij methode om Intact Mouse neusweefsel bereiden met Bewaarde Anatomische Organisatie
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Inleiding
De zoogdieren neusholte bevat verschillende types van weefsels en organen die verschillende functies dienen. De neusholte maakt het inlaatdeel van de bovenste luchtwegen, die luchtvaart kunnen in en uit de longen. Ingeademde lucht door de neusholte waar het ondergaat temperatuur en vochtigheid conditionering 1, alsmede reinigings-of filteren aan irriterende en giftige stoffen en besmettelijke micro-organismen te verwijderen 2. Beide behandelingen worden uitgevoerd door nasale epitheel en subepitheliale weefsels, waaronder klieren en vaten uitgevoerd en zijn van cruciaal belang voor de bescherming van de lagere luchtwegen en de longen. Naast zijn....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Muis Neus Voorbereiding
We gebruikten volwassen C57BL / 6 achtergrond muizen in deze studie. Alle dierlijke zorg en procedures zijn goedgekeurd door de Animal Care en gebruik Comites (IACUC) van de Universiteit van Maryland, Baltimore County.
1.1 Het verwerven van de neus van paraformaldahyde-vaste muizen
Figuur 1. Beenderen van een muis schedel A:. Dorsal weergave van de schedel
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Met deze methode kunnen we betrouwbaar krijgen bijna volledig intact neusweefsel. Figuur 2A toont een beeld van volwassen nasale specimen van een paraformaldehyde-vaste kop. In dit exemplaar, alle vier sub-olfactorische sensorische organen, waaronder de MOE, septum orgel, de Gruneberg ganglion, en VNO, intact zijn. Ook de respiratoire epithelia en subepitheliale weefsels, zoals klieren en vaten worden bewaard. We hebben met succes gebruik gemaakt van deze methode in een aantal studies waarin werd onderz.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Hier toonden we aan een stap-voor-stap procedure voor het isoleren van intacte olfactorische en respiratoire weefsel van de muis neus door het achtereenvolgens verwijderen van het omringende bot terwijl het sparen onder het weefsel. We tonen aan dat een zorgvuldige botverwijdering zelfs de meest delicate weefsels in hun geheel kunnen bewaren. We delen ook inzicht in mogelijke modificaties van deze techniek, waarbij isoleren we zowel de hersenen en neus weefsel samen om de zenuwverbinding behouden. Deze nieuwe werkwijze .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door subsidies voor onderzoek (NIH / NIDCD 009269, 012831 en ARRA administratieve supplement NIH subsidies) te Weihong Lin. We hebben vooral danken de heer Tim Ford bij UMBC voor zijn technische bijstand bij video-opnamen en verwerken. Wij willen ook dr. Daphne Blumberg, mevrouw Chere Petty bij UMBC en de heer Nicholas McCollum bedanken van Olympus America Inc voor hun uitrusting hulp bij video-opnamen.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Dissectie | |||
| Rongeur, 1,0 mm kaakbreedte | World Precision Instruments (WPI) | 501333 | |
| Fijne pincet, Dumont 3 | WPI | 503235 | |
| Fijne pincet, Dumont 55 | WPI | 14099 | |
| Fijne pincet, Dumont AA | Fine Science Tools (FST) | 11210-20 | |
| Specimenpincet, Gekarteld | VWR | 82027-440 | |
| Operatie schaar | WPI | 501753 | |
| Iris schaar, Recht | Miltex | V95-304 | |
| Dissectiemicroscoop | Olympus | SZ40 | |
| [header] | |||
| Weefsel inbedding | |||
| Optimum snijtemperatuur (OCT) compound | Sakura Finetek | 4583 | |
| Kunststof inbeddingsmal | VWR | 15160-215 | |
| Aspirator vacuümpomp | Fisher Scientific | 09-960-2 | |
| [header] | |||
| Sectie kleuring | |||
| Neutraal rood | ACROS Organic | CAS 553-24-2 | Kernenkeuring |
Referenties
- Naclerio, R. M., Pinto, J., Assanasen, P., Baroody, F. M. Observations on the ability of the nose to warm and humidify inspired air. Rhinology. 45, 102-111 (2007).
- Bjermer, L. The nose as an air conditioner for the lower airways. Allergy. 54, Suppl 57. 26-30 (1999).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
