Menselijke tumorxenotransplantaten in immunodeficiënte muizen zijn waardevolle instrumenten om kanker biologie studeren. Specifieke protocollen voor subcutane en intrahepatische xenograften uit menselijke hepatocellulair carcinoom cellen of tumorfragmenten genereren worden beschreven. Leverregeneratie geïnduceerd door gedeeltelijke hepatectomie in ontvangende muizen wordt gepresenteerd als een strategie om intrahepatische engraftment vergemakkelijken.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Generatie van subcutane en Intrahepatic Human Hepatocellular carcinoom Xenografts in immunodeficiënte muizen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
In vivo experimentele modellen van hepatocellulair carcinoom (HCC) dat de menselijke ziekte recapituleren een waardevol platform voor onderzoek naar de ziekte van pathofysiologie en voor de preklinische evaluatie van nieuwe therapieën. We presenteren verschillende methoden voor subcutane of orthotopisch menselijke HCC xenograften in immuundeficiënte muizen die kunnen worden gebruikt in diverse onderzoekstoepassingen genereren. Met een focus op het gebruik van primaire tumorweefsel van patiënten die chirurgische resectie als uitgangspunt beschrijven we de bereiding van celsuspensies of tumorfragmenten voor xenografting. We beschrijven specifieke technieken om deze weefsels i) subcutane xenograft, of ii) intrahepatisch, hetzij door directe implantatie van tumorcellen of fragmenten in de lever, of indirect door injectie van de cellen in de muis milt. We hebben het gebruik van partiële resectie van de natieve muizenlever beschrijven ook bij de xenografting als strategie ominduceren een staat van actieve lever regeneratie in de ontvanger muis die de intrahepatische innesteling van primaire menselijke tumorcellen kan vergemakkelijken. De verwachte resultaten van deze technieken worden geïllustreerd. De beschreven protocollen zijn gevalideerd met primaire menselijke HCC monsters en xenografts, die typisch minder krachtig dan de gevestigde humane HCC cellijnen die verspreid zijn en vaak aangehaald in de literatuur voeren. In vergelijking met cellijnen, bespreken we de factoren die kunnen bijdragen tot de relatief lage kans op primaire HCC innesteling in xenotransplantatie modellen en commentaar op technische problemen die de kinetiek van xeno-groei kan beïnvloeden. We stellen ook voor methoden die moeten worden toegepast om ervoor te zorgen dat xenograften verkregen nauwkeurig lijken ouder HCC weefsels.
Inleiding
Hepatocellulair carcinoom (HCC) is de vijfde meest voorkomende kanker wereldwijd en de snelst toenemende oorzaak van overlijden door kanker in Noord-Amerika. De meest voorkomende risicofactor voor HCC is levercirrose, meest voorkomende door chronische virale hepatitis, alcoholmisbruik, auto-immuunziekte, of erfelijke metabole stoornissen 1.
Ondanks de zware lasten van ziekte HCC op populaties wereldwijd, is de pathofysiologie van HCC relatief slecht begrepen in vergelijking met andere gemeenschappelijke kanker, zoals colorectale, borst-of prostaatkanker. Bijvoorbeeld, specifieke moleculaire en cellulaire gebeurtenissen rijden t....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Een schematisch overzicht van het protocol is weergegeven in figuur 1.
1. Verwerking van Human HCC Monsters
Verkrijgen primaire exemplaren menselijke HCC met schriftelijke toestemming van de patiënt en met de goedkeuring van het institutioneel onderzoek ethiek boord. Deze protocollen zijn aangebracht in onze instelling verricht met toestemming van de University Health Network Research Ethics Board in overeenstemming met alle institutionele, nationale en internationale richtlijnen voor het menselijk welzijn.
Verzamel verse exemplaren HCC zo spoedig mogelijk na de chir....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Figuur 3 toont het typische uiterlijk van een subcutane menselijke HCC xenograft en de overeenkomstige histopathologische verschijnen van de tumor. De ontwikkeling en groei van subcutane xenografts kan gemakkelijk gevolgd worden door dagelijkse behandeling van ontvangende muizen. Het tijdsinterval tussen xenografting en ontwikkeling van een tumor kan sterk variëren afhankelijk van het type weefsel (tumor fragment versus celsuspensie), bron van weefsel (primaire bloedmonster, passage xenograft of cellijn.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
We hebben verschillende technieken beschreven subcutane en intrahepatische menselijke HCC xenograften vaststellen immunodeficiënte muizen die kan worden toegepast op een grote verscheidenheid van experimentele vragen en assays. Terwijl subcutane xenotransplantaten zijn op grote schaal gebruikt om verschillende aspecten van HCC studie biologie worden intrahepatische xenotransplantaten zelden in de literatuur beschreven. Verder is de meeste studies die het gebruik van xenotransplantaten zijn gegenereerd uit deze gevestigd.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door een Canadese Institutes of Health Research Fase 1 Werker-Scientist Award (AG) en een exploitatiesubsidie van de Research Society Cancer (AG). De auteurs zijn dank aan dr. John Dick voor zijn ondersteuning van dit project.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Dulbecco’s Mod. Eagle Medium/Ham’s F12 50/50 Mix x1(DMEM-F12) | WISENT Bioproducts | 319-075-CL | |
| Collagenase TypeIV | Sigma-Aldrich | C5138 | |
| Dispase II | Stemcell Technologies | 7923 | |
| Matrigel Matrix | Becton-Dickinson Biosciences | 354234 | |
| 10 % Buffered Formalin solution | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| 0.9 % Saline Solution (NaCl), steriel | House Brand | 1011-L8001 | |
| Betadine chirurgisch scrub | Purdue Pharma | NPN 00158313 | |
| Buprenorfine (Temegesic) NR 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser | ||
| Isofluraan USP, 99,9 %, inhalatieanestheticum | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | M60302 | |
| Tear-Gel | Novartis Pharmaceuticals | ||
| Frozen section compound | VWR | 95057-838 | |
| Cryomold, Tissue -Tek | Sakura Finetek | 4566 | |
| Precision Glide Naald 18G 1 ½ | Becton-Dickinson Biosciences | 305196 | |
| Precision Glide Naald 27G ½ | Becton-Dickinson Biosciences | 305109 | |
| Insuline spuit, 3/10 cc U-100, 29G½ | Becton-Dickinson Biosciences | 309301 | |
| Chirurgisch mesje Nr.10 | Feather Safety Razor Co. | 08-916-5A | |
| #5-0 Zachte zijde chirurgische hechtdraad, 3/8" taps toelopende naald | Syneture | VS-880 | |
| Transpore chirurgisch tape | 3M Health care | 1577-1 | |
| Katoenen applicator | Medpro | 018-425 | |
| Surgicel, geoxideerde geregenereerde cellulose | Ethicon | 1951 | |
| Celzeven 100 μm nylon | Becton-Dickinson Biosciences | 352360 | |
| Vergrootlicht met mobiele basis | Benson medical Industries Inc. | model: RLM-CLT-120V | |
| Petrischaal sterieel 100x20 mm | Sarstedt | 821474 | |
| Weefseltang, 1x2 tanden, 4-1/2" | Almedic | A10-302 | |
| Adson dressingtang 4-3/4" | Almedic | A10-220 | |
| Oogdressingtang, gekarteld, recht, 4" | Almedic | A19-560 | |
| Hartman Hemostatische forceps, gebogen, 3-1/2" | Almedic | A12-142 | |
| Iris schaar, gebogen, 4-1/4" | Almedic | A8-690 | |
| Iris schaar, recht, 4-1/2" | Almedic | A8-684 | |
| Olsen-Hegan naaldhouder, 5-1/2" | Almedic | A17-228 |
Referenties
- El-Serag, H. B. Hepatocellular carcinoma. N. Engl. J. Med. 365, 1118-1127 (2011).
- Li, Y., Tang, Z. Y., Hou, J. X. Hepatocellular carcinoma: insight from animal models. Nat. Rev. Gastroenterol Hepatol. 9, 32-43 (2012).
- Tateishi, R., Omata, M.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
