Metingen van veranderingen in tactiele gevoeligheid in de achterpoot van muizen met behulp van een elektronisch von Frey-apparaat

Samenvatting

Elektronische von Frey metingen zijn een effectieve en verbeterde alternatief voor klassieke von Frey filamenten, omdat ze snelle en nauwkeurige meting van veranderingen in mechanische onttrekkingsdrempels bij knaagdieren mogelijk maken naar continu toegepaste drukstimulering vóór en na een ontstekingsgebeurtenis.

Samenvatting

Het meten van door ontsteking geïnduceerde veranderingen in drempels van achterpoot terugtrekking door mechanische druk is een nuttige techniek om veranderingen in pijnperceptie bij knaagdieren te beoordelen. De terugtrekkingsdrempels kunnen eerst op basislijnniveau worden gemeten en vervolgens na door geneesmiddel, gif, verwonding, allergeen of anderszins uitgelokte ontsteking door het toepassen van een nauwkeurige kracht op zeer specifieke gebieden van de huid. Een elektronisch von Frey-apparaat maakt nauwkeurige beoordeling van de drempels voor terugtrekking van de achterpoot van muizen mogelijk die niet worden beperkt door de beschikbare draaddiktes in tegenstelling tot klassieke von Frey-metingen. De gemakkelijke en snelle metingen maken het mogelijk om beoordelingen van tactiele gevoeligheidsuitkomsten in verschillende modellen van snel optredende ontstekings- en neuropathische pijn te integreren, aangezien er binnen een korte tijdsperiode meerdere metingen kunnen worden gedaan. Experimentele metingen voor individuele knaagdieronderwerpen kunnen intern worden gecontroleerd tegen individuele basislijnreacties en uitsluitingscriteria kunnen eenvoudig worden vastgesteld om basislijnreacties binnen en tussen experimentele groepen te standaardiseren. Dus, metingen met behulp van een elektronisch von Frey-apparaat vertegenwoordigen een nuttige aanpassing van de goed gevestigde klassieke von Frey-draadgebaseerde assays voor mechanische allodynie bij knaagdieren die ook kunnen worden toegepast op andere niet-menselijke zoogdiermodellen.

Inleiding

Chronische niet-overdraagbare ziekten zijn verantwoordelijk voor een onevenredig groot deel van de menselijke last van sterfte en morbiditeit¹. Chronische pijn wordt steeds meer erkend als een belangrijk onderdeel van de wereldwijde ziektelast². Dit heeft een grote stimulans gegeven aan innovaties in de preventie, behandeling en het beheer van pijn. Tegelijkertijd is er overvloedig bewijs dat de onderliggende biologie van pijn complex is³. De mechanismen die ten grondslag liggen aan beschermende, evenals maladapieve en chronische pijn wijzen op een ingewikkelde interactie tussen het immuun- en zenuwstelsel^3,4. De verklaring van deze mechanismen vereist nauwkeurige, reproduceerbare experimentele benaderingen, van moleculaire dissectie tot gedragsanalyse.

Rodentenmodellen zijn van onschatbare waarde geweest bij de karakterisering van moleculaire spelers van inflammatoire en neuropatische pijn⁵. Vermindering van tijd en intensiteit van eerder gespecificeerde reacties op schadelijke stimuli worden gebruikt om pijntoestanden bij deze dieren te meten, aangezien knaagdieren anders niet in staat zijn om een pijnsensatie te rapporteren⁶. Veranderde reacties op temperatuur en druk worden vaak gebruikt als meetstaven voor weefselgevoeligheid in rodentenmodellen van inflammatoire nociceptie die kan worden veroorzaakt door infectie^7,8, chemische blootstelling^{6, 9,10}, chirurgische incisie¹¹, evenals neuropatische pijn veroorzaakt door zenuwligatie¹².

Mechanische gevoeligheid, of reactie op drukstimulering, wordt vaak gemeten met behulp van klassieke von Frey-filamenten (CvF) - een reeks (bijv. 0,4-15 g¹³) van gewogen uiteinden die handmatig worden toegepast om testweefsel in seriële incrementen te testen totdat pijngedrag wordt geïnduceerd bij controles versus experimentele proefpersonen. Er zijn verschillende methoden om deze uiteinden of haren te gebruiken om mechanische gevoeligheid te beoordelen^6,13; de meest gebruikte methode is als volgt. Een uiteinde met een bepaalde druk (binnen de reeks; bijv. 2 g¹³) wordt geselecteerd als startpunt en de 50% terugtrekdrempel van een rat of muis (de stimulusintensiteit die vereist is om een respons te produceren 50% van de keren dat het uiteinde op het weefsel wordt aangebracht) wordt bepaald door omhoog en omlaag te bewegen in uiteindegewicht op basis van het vertonen van eerder gespecificeerde responsgedrag¹³. Absolute 50% terugtrekdrempels voor behandelingsgroepen worden vervolgens vergeleken tussen baseline- en post-behandelingstijdstippen. Deze handmatige techniek is behoorlijk tijdrovend. Naast de verhoogde tijd die elk proefpersoon doorbrengt in een von Frey-kamer, verhoogt dit ook het aantal keren dat testuiteinden van verschillende gewichten op ontstoken weefsel worden aangebracht, wat grotere ongemakken voor de knaagdieren in de studie veroorzaakt. Bovendien worden 50% terugtrekdrempels berekend en vergeleken tussen groepen knaagdieren; de individuele reacties van experimentele proefpersonen worden doorgaans niet genormaliseerd naar hun individuele onbehandelde baselinereacties met, voor zover ons bekend, één uitzondering⁶. Als gevolg hiervan worden knaagdieren meestal niet gerapporteerd als toegewezen aan behandelingsgroepen op basis van consistente baselinereacties binnen een eerder bepaald bereik en noch worden individuele proefpersonen geëvalueerd op basis van een consistent toegepaste reeks uitsluitingscriteria die toelaten dat baselinereacties worden gestandaardiseerd voor elke specifieke reeks studies en assays.

Hier presenteren we een alternatieve methode voor het meten van de tactiele gevoeligheid van de achterpoot van muizen na blootstelling aan Bothrops jararaca-gif met behulp van een elektronisch von Frey-apparaat (EvF). Cunha en collega's⁶ hebben het pionierswerk verricht in het gebruik van EvF-technieken bij knaagdieren en hebben CvF en EvF-effectiviteit systematisch vergeleken om aan te tonen dat EvF 'een gevoeliger, objectief en kwantitatief' meet van tactiele gevoeligheid in rodentenmodellen van inflammatoire pijn. Kort gezegd, bij EvF-metingen wordt een niet-hygroscopische polypropyleen von Frey-tip van uniforme diameter (0,8 mm) met geschikte stijfheid voor het te testen weefsel bevestigd aan een elektronische sonde en uitlezing die de kracht/gewicht weergeeft waarop de knaagdier zich terugtrekt van de tip. Er zijn verschillende belangrijke verschillen tussen CvF en EvF-metingen. Ten eerste is het proces van het meten van zowel baseline als experimentele reacties met behulp van EvF sterk gestroomlijnd omdat druk op de achterpoot met toenemende kracht kan worden toegepast tot er een reactie is en er is geen noodzaak om tips te veranderen zoals bij CvF; dieren brengen minder tijd door in de assaykamers en zijn daarom minder gestrest en comfortabeler tijdens een experiment. Ten tweede maakt EvF een relatieve gemakkelijke implementatie mogelijk van rationele uitsluitingscriteria voor studieproefpersonen in de vorm van bereiken van acceptabele baselinedrempels. Dit maakt standaardisatie van baselinereacties binnen en tussen behandelingsgroepen mogelijk. Ten derde wordt de reactie van een proefpersoon na een experimentele behandeling altijd vergeleken met zijn eigen individuele baselinereactie waardoor belangrijke interne controles voor metingen worden gecreëerd. Ten vierde wordt de nauwkeurigheid van de terugtrekdrempels op een hoger niveau van resolutie geregistreerd, aangezien druk continu kan worden toegepast in plaats van in incrementen beschikbaar in de vorm van gewichten van handmatige filamenten. Net als bij goed ontworpen CvF-assays, worden EvF-gebaseerde experimenten ook uitgevoerd met dezelfde onderzoeker (blind voor behandeling) die de kracht toepast en de responsgedragingen registreert. Het is belangrijk op te merken dat deze techniek tijd en inspanning vereist van de onderzoekers om interne consistentie van metingen te vestigen en vereist dat experimenten worden gepland zodat er geschikte toelagen worden gemaakt voor muizen die mogelijk moeten worden uitgesloten vanwege inconsistente baselinereacties.

Protocol

Het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van Macalester College keurde alle protocollen goed. Voor deze experimenten werden 8-12 weken oude mannelijke ND4 Zwitserse muizen gebruikt.

1. Bothrops jararaca Venombereiding en injectie

1. VOORZICHT: B. jararaca gif is giftig. Draag handschoenen, een masker en oogbescherming bij het hanteren van het poeder en het bereiden van oplossingen.
2. Toedienen van 45 µg/kg B. jararaca gif (regime bepaald door eerdere dosis-respons experimenten) of 0,9% saline voertuig (10 µl) via intraplantaire injectie in beide achterpoten met behulp van 3/10 ml insulinespuiten met 29 G x 1/2 inch naalden. Opmerking: Afhankelijk van het experimentele ontwerp, kunnen behandelings- en controleoplossing apart in elke achterpoot worden geïnjecteerd om interne controles binnen elke proefpersoon te bieden.

2. Elektronische von Frey Apparaat Setup en bediening

1. Plaats de elektronische von Frey eenheid op de sondestandaard. Zorg ervoor dat de sonde en kabel op de juiste manier zijn aangesloten op de weergave-eenheid en zet het instrument aan. Stel de uitlezing in op nul (0,00 g) in de instelmodus en plaats voorzichtig het meegeleverde testgewicht (5,00 g) op de kegel van de von Frey sonde.
2. Noteer de uitlezing in een laboratorium notitieboek en herhaal deze procedure na het afronden van de test sessie. Als er een discrepantie groter is dan 0,20 g is tussen uw uitlezingen van het testgewicht vóór en na de test sessie, of als de uitlezing fluctueert zodra het testgewicht wordt toegepast, kan herkalibratie van het apparaat (door de fabrikant) nodig zijn.
3. Om de onttrekkingsdrempel van de achterpoot van de muis te beoordelen, gebruik de juiste polypropyleen tip uit de set tips die bij de sonde wordt geleverd. De keuze van de tip hangt af van het weefsel dat wordt onderzocht. Stijve tips werken goed voor het minder gevoelige, taaie weefsel van de achterpoot, terwijl semi-elastische tips een betere keuze kunnen zijn voor een meer gevoelig gebied zoals de ano-genitale rand (Chatterjea, ongepubliceerd). Monteer voorzichtig de stijve tip op de kegel van de sonde.
4. Om de maximaal toegepaste druk op te nemen, schakel de bedrijfsmodus van instelling naar bediening zodat de maximaal toegepaste druk op het display wordt opgeslagen. In deze modus wordt de uitlezing van de maximaal toegepaste druk op het display bewaard wanneer de sonde wordt teruggetrokken.

3. Algemene overwegingen voor de beoordeling van de onttrekkingsdrempel van de achterpoot

1. Idealiter zijn twee onderzoekers nodig om de drempel voor het terugtrekken van de achterpoot (mechanische gevoeligheid) te meten met behulp van een EvF apparaat - één om het apparaat te bedienen en de metingen uit te voeren, en een andere om de opgenomen metingen te transcriberen en muizen te hanteren.
2. Om vooringenomenheid te verminderen, moet de onderzoeker die het apparaat bedient blind zijn voor behandelingen en de opgenomen waarden voor de drempel voor het terugtrekken. Verder, om consistentie tussen metingen te waarborgen, moet dezelfde persoon alle baseline- en experimentele onttrekkingsdrempels beoordelen.
3. Voer alle metingen uit in een rustige, temperatuur-gecontroleerde ruimte en op hetzelfde tijdstip van de dag¹⁴.
4. De onderzoeker die de metingen opneemt, moet elke muis in individuele kamers van een multi-eenheidspolymethylmethacrylaat (PMMA) behuizing plaatsen die op een gaasvloerstandaard staat. Bedek de kamers met geperforeerde PMMA deksels en plaats een zwaar object erop, om te voorkomen dat muizen ontsnappen. Plaats absorberend materiaal onder de standaard om uitgescheiden afval op te vangen/verzamelen. Laat muizen 15 minuten acclimatiseren in de kamers voordat de baseline- of experimentele onttrekkingsdrempel wordt beoordeeld ^6,7,10.
5. De achterpoten van de muizen moeten gemakkelijk toegankelijk zijn door de openingen van de gaasvloer; plaats daarom de gaasvloerstandaard op een comfortabele hoogte op een kar met remmen of op een stabiel werkblad dat van alle kanten toegankelijk is.
6. Tijdens metingen kunnen muizen afgeleid moeten worden met een voedselpellet¹⁵ geplaatst net buiten de meetkamer of een zeer licht geluid geproduceerd door kloppen of een pen langs het draadgaas van de bodem van de kamer te laten lopen vóór, maar niet tijdens, de meting. Dit induceert de muis om stil te blijven staan, waardoor de onderzoeker gemakkelijker metingen kan beginnen te nemen.

4. Baseline Beoordeling van de drempel voor het terugtrekken van de achterpoot

1. De eerste set baseline metingen moet 48 uur vóór het toedienen van de behandeling worden uitgevoerd. Zet de sonde op nul bij het monteren van de stijve tip. Gebruik twee handen om de sonde langzaam te verhogen om het midden (voetzoolgebied) van de linker of rechterachterpoot te stimuleren (als beide poten dezelfde behandeling hebben ontvangen).
2. Verhoog de druk geleidelijk totdat er gedefinieerde nociceptieve responsgedragingen zoals het terugtrekken van de achterpoot, het likken van de achterpoot of het springen op vier poten^6,10 worden waargenomen. Instrueer de andere onderzoeker om de druk te noteren die het waargenomen gedrag heeft veroorzaakt.
3. Meet de drempel voor het terugtrekken van de muis in de aangrenzende kamer. Ga door totdat u de drempels voor het terugtrekken voor elke muis eenmaal heeft beoordeeld. Herhaal nog vier keer, zodat elke muis 5x wordt gemeten zoals eerder beschreven¹⁰.
4. Bereken voor elke muis de mediaan

Resultaten

Lokale B. jararaca gif-administratie veroorzaakt veranderingen in de tactiele gevoeligheid van de achterpoten en weefseloedeem bij ND4 Swiss mannetjes muizen.

1,5 uur na de toediening van 45 µg/kg B. jararaca gif, trokken ND4 Swiss mannetjes muizen hun achterpoten terug bij een druk die 3,0 g lager was dan de basislijn (Figuur 1A). Basislijn terugtrekking voor alle groepen vond plaats bij ~4,5 g aangewende druk; na gif-behandeling trokken experimentele muizen hun achterpoten terug bij 1-1,5 g aangewende druk (gegevens niet getoond). In zoutoplossing behandelde controle muizen vertoonden weinig tot geen reductie in reactie op druk vergeleken met de basislijn op alle geteste tijdstippen. Verlaagde responsdrempels bij behandelde muizen werden duidelijk gehandhaafd op 3 en 6 uur na het giftig maken (Figuur 1A) en waren niet te onderscheiden van controles na 24 uur (gegevens niet getoond). De achterpoten van giftig gemaakte muizen vertoonden weefseloedeem kenmerkend voor ontsteking. Op 1,5 uur na de gif-administratie waren behandelde achterpoten, gemeten zoals eerder beschreven¹⁰, 1,5 mm dikker dan op basislijn; oedeem werd gehandhaafd door 3 en 6 uur (Figuur 1B). Daartegenover vertoonden in zoutoplossing behandelde poten geen zwelling of verandering in dikte gedurende de experimentele periode. Voor het representatieve experiment hier getoond, werden in totaal 21 muizen gebruikt voor basislijnmetingen en 14 geselecteerd voor opname in het experiment. Deze werden toegewezen aan behandelingsgroepen zodat gemiddelde terugtrekkingsreacties op basislijn rond de 4,5 g waren voor elke groep als geheel.

B. jararaca gif-geïnduceerde veranderingen in de tactiele gevoeligheid gaan gepaard met mastcel degranulatie en neutrofielen influx in de achterpoten van ND4 Swiss mannetjes muizen.

Naast verhoogde tactiele gevoeligheid en weefseloedeem, beoordeelden we ook neutrofielen influx (Figuren 2A-B) en mastcel degranulatie (Figuren 2C-D) in de achterpoten van giftig gemaakte versus in zoutoplossing behandelde muizen. Neutrofielen zijn de eerste ontstekingscellen die worden gerekruteerd in een lesie uit de circulatie en zijn bekend om het mediëren van ontstekingsgerelateerde nociceptieve reacties^10,16,17. Mastcellen zijn weefsel-residente sentinel-cellen¹⁸ en mastcel degranulatie is geassocieerd met nociceptieve reacties in de achterpoot van muizen¹⁰ en de dura mater van ratten¹⁹.

Hier vonden we dat neutrofielen influx in de giftig gemaakte achterpoten bijna 1.000 keer hoger was in vergelijking met in zoutoplossing behandelde achterpoten (Figuur 3A) zoals beoordeeld door het tellen van hematoxyline-eosine gekleurde 4 µm paraffine ingebedde sagittale plantaire weefselsecties¹⁰ geoogst op 1,5 uur na de gif-administratie van geëuthanaseerd muizen.

In in zoutoplossing behandelde poten waren de plantaire mastcellen in het achterpootweefsel grotendeels intact of vertoonden milde degranulatie (Figuur 3B). Daartegenover vertoonden giftig gemaakte achterpoten 15-20% matige en uitgebreide degranulatie van mastcellen (Figuur 3B). De hierboven beschreven weefselsecties werden gekleurd met toluidineblauw en het aantal zichtbare korrels per mastcel werd geteld om de degranulatie status te bepalen zoals eerder beschreven¹⁰.

Figuur 1. Lokale B. jararaca gif-administratie veroorzaakt veranderingen in de mechanische gevoeligheid van de achterpoot en weefseloedeem bij ND4 Swiss mannetjes muizen. Basislijn terugtrekkingsdrempels en basislijn potbreedte werden beoordeeld op 48 en 24 uur vóór intra-plantaire B. jararaca gif (Bjv; 45 µg/kg) of vehikel (zoutoplossing) behandeling (10 µl). Terugtrekkingsdrempels werden beoordeeld op 1,5, 3, en 6 uur na de behandeling (A). Gemiddelde potbreedte (gemiddelde breedte van de linker- en rechterpoot van een muis) in het midden-plantaire gebied werd beoordeeld met digitale calipers op basislijn en vervolgens 1,5, 3, en 6 uur na de behandeling om weefseloedeem te bepalen zoals eerder beschreven¹⁰ (B). Significaties worden vergeleken met zoutoplossing behandelde muizen (* = p < 0,05, ** = p < 0,01, *** = p < 0,001 respectievelijk). n = 10-11 muizen per behandelingsgroep. Klik hier om groter afbeelding te bekijken.

Figuur 2. B. jararaca gif-geïnduceerde mechanische gevoeligheid gaat gepaard met mastcel degranulatie en neutrofielen influx in de achterpoten van ND4 Swiss mannetjes muizen. 3 muizen/behandeling werden

Discussie

De meting van veranderingen in onttrekkingsreacties is een belangrijk hulpmiddel dat wordt gebruikt om veranderingen in de tactiele gevoeligheid te beoordelen in knaagdiermodellen van pijn en ontsteking. Hier laten we de bruikbaarheid van een elektronische von Frey-apparatuur zien om deze beoordeling uit te voeren. Er zijn verschillende voordelen aan deze techniek: i) we kunnen snel de onttrekkingsreacties op toegepaste druk beoordelen voor meerdere muizen op meerdere tijdstippen die redelijk dicht bij elkaar liggen, ii) we kunnen een enkele punt gebruiken om continue en specifieke druk toe te passen op een klein gebied van weefsel, iii) we kunnen de precieze druk die wordt toegepast om een onttrekkingsreactie te verkrijgen, nauwkeurig meten, en iv) we kunnen gemakkelijk robuuste baseline-afsnijdingen, uitsluitingscriteria en interne controles implementeren om ervoor te zorgen dat gedragsbeoordelingen zo nauwkeurig en objectief mogelijk zijn.

De cruciale stappen om de beste resultaten voor een EvF-assay te garanderen, zijn voorafgaande kalibratie van het instrument en consistente meetpraktijken. Zoals beschreven in de protocolsectie, moet het instrument met zorg worden behandeld en moet voor en tijdens het gebruik een juiste kalibratie worden gewaarborgd. Voordat er metingen worden uitgevoerd, moeten de testgewichtsmetingen worden bevestigd om een optimale machinefunctie te garanderen. Als de metingen significant fluctueren of als de testgewichtsmetingen niet nauwkeurig zijn, moet de fabrikant onmiddellijk worden gecontacteerd om het apparaat te kalibreren. Met dit in gedachten is het raadzaam om, indien mogelijk, een reserve elektronische von Frey-apparatuur te hebben, zodat tijdgevoelige experimenten niet worden gecompromitteerd door een onverwachte behoefte aan kalibratie van het instrument. Verder moet een enkele, goed getrainde onderzoeker alle baseline- en experimentele metingen voor een bepaalde studie of serie experimenten uitvoeren, terwijl hij geblinddoekt blijft voor de behandelingsgroepen. Muizen moeten worden geëvalueerd in een rustige ruimte, gehouden op een constante temperatuur, geacclimatiseerd aan de EvF-kamers gedurende ten minste 15 minuten, maar niet langer dan noodzakelijk in de kamer worden vastgehouden (vooral als er binnen één dag meerdere metingen worden uitgevoerd) om stress en gedragsvariaties veroorzaakt door ongemak te minimaliseren.

EvF-metingen bieden aanzienlijke verbeteringen ten opzichte van de bestaande CvF-technieken. Onderzoekers kunnen continue druk toepassen en hoeven niet te schakelen tussen punten van verschillende gewichten zoals bij CvF-filamentexperimenten⁶. Dit leidt tot minder prikken op het weefsel, wat vooral relevant is in het geval van ontstoken of gewond weefsel. De precieze druk waarbij onttrekking optreedt, kan worden gemeten in plaats van de 50% onttrekkingsmetingen die ook worden beperkt door de beschikbare filamentgewichten die worden gebruikt in CvF-metingen¹³. Omdat rationele en uniforme uitsluitingscriteria kunnen worden geïmplementeerd (zoals hierboven besproken), kunnen muizen aan experimentele groepen worden toegewezen, zodat alle groepen aan het begin van het experiment vergelijkbare gemiddelde baselines hebben. EvF-metingen beoordelen de veranderingen in gedragsreactie op een bepaalde stimulus en niet de absolute reacties zelf. Daarom wordt de verandering in nociceptieve reactie van elke muis gemeten als het verschil tussen zijn individuele experimentele en baseline-onttrekkingen, waardoor interne controles worden geboden voor elke uitgevoerde meting.

Misschien is de belangrijkste beperking van EvF dat, net als bij zijn handmatige tegenhanger, dezelfde onderzoeker alle metingen voor een bepaalde serie baseline- en experimentele metingen moet uitvoeren. Dit maakt het opschalen van de techniek uitdagend vanuit het oogpunt van tijd, personeel en apparatuur. We vinden dat ongeveer 20 muizen tegelijk (afhankelijk van de configuratie van de assaykamers) kunnen worden gemeten in 30-45 minuten of minder op meerdere tijdstippen, op voorwaarde dat er minimaal 45 minuten tussen de metingen zijn. Een gerelateerde overweging in dit opzicht is de leercurve van individuele experimenteerders. Interne consistentie moet worden vastgesteld voordat een individuele onderzoeker een grootschalig experiment kan beginnen en dit vereist vele uren gewijde oefening met herhaalde baseline-responsmetingen totdat de gewenste consistentie is bereikt. Bovendien impliceert het gebruik van baseline-afsnijdingen dat niet alle muizen die voor een experiment zijn gebaselined, kunnen worden opgenomen; we constateren dat 25-30% van de muizen die per experiment zijn gebaselined, doorgaans worden uitgesloten.

Wat betreft aanpassingen en toekomstige toepassingen, voegen EvF-gedragsmetingen een krachtige dimensie toe aan een breed scala aan ontstekingsmodellen om gelijktijdige acute en/of chronische pijn te analyseren die onderliggende inflammatoire pathologieën kunnen zijn. Bij vergiftiging vonden we dat uitgesproken, snel optredende veranderingen in de tactiele gevoeligheid gepaard gingen met de verwachte uitkomsten van weefselzwelling, leukocytenrekrutering en mastceldegranulatie in de achterpoten van ND4-mannelijke muizen. Deze bevindingen bevestigen eerdere waarnemingen over de bijdragen van mastcelmediatoren aan thermische gevoeligheid bij ratten²⁰ en mechanische gevoeligheid geïnduceerd door B. jararaca-gif in ND4 Zwitserse muizen gemeten met behulp van CvF²¹. Het EvF-protocol kan gemakkelijk worden aangepast voor gebruik op andere weefsels dan de achterpoot bijv. buik⁷ en anogenitale rand⁸ waar CvF momenteel wordt gebruikt. Knaagdiermodellen van allergieën, wondgenezing, neuropathieën en andere pathologieën kunnen gemakkelijk worden aangepast om metingen van mechanische gevoeligheid in weefsels op te nemen, inclusief en buiten de achterpoot.

Kortom, EvF is een nuttige en effectieve techniek die een klassieke benadering van pijnmeting bij knaagdieren bijwerkt en een belangrijk nieuw hulpmiddel is bij het onderzoeken van de complexe onderliggende mechanismen van pijn in een breed scala aan ziektemodellen.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
ND4 Swiss male mice	Harlan	0-32	Muizen die hier werden gebruikt, waren 8-12 weken oud en werden gehuisvest en gebruikt volgens de IACUC-richtlijnen van Macaleter College.
3 ml/100 Insuline spuit met 29 G 1/2 inch naald	BD	BD309301	Na elk gebruik in de juiste container weggooien.
B. jararaca gif	Sigma	V5625	VOORZICHTIG: Giftige stof. Draag oog- en huidbescherming. Oplossen in steriele 0,9% zoutoplossing.
Elektronisch von Frey apparaat; sonde = 90 g bereik	IITC	2394	Verplaats voorzichtig en zorg ervoor dat het altijd horizontaal is. Om de sonde op nul te zetten, drukt u op "Program" en "Clear". Om van setup naar gebruiksmodus te schakelen, drukt u op "Function" (voor "MH" aflezing) of "MAX".
Gaasstandaard + PMMA kamers	IITC	410	Plaats op een stabiel tafelblad of een kar met vier wielen om toegang tot alle kanten te hebben.
Elektronische von Frey stijve tips alleen, 90 g bereik	IITC	2390	n/a