Protocollen voor een efficiënte bereiding van homogene monsters van spintmijten, aantasting van experimentele installaties, en beoordeling van plantaardige schade, zoals vereist voor studies van planten-plaaginteractie werden ontwikkeld.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Toepassing van twee-gespot spintmijt
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De twee-spotted spint, Tetranychus urticae, is een alomtegenwoordige polyfage geleedpotige herbivoor die zich voedt met een opmerkelijk breed scala aan soorten, met meer dan 150 van de economische waarde. Het is een belangrijke plaag kas gewassen, vooral Solanaceae en Cucurbitaceae (bijvoorbeeld tomaten, aubergines, peper, komkommer, courgette) en kas sierplanten (bijvoorbeeld rozen, chrysanten, anjers), jaarlijkse veldgewassen (zoals maïs, katoen, sojabonen en suikerbieten), en in eeuwige culturen (alfalfa, aardbeien, druiven, citrusvruchten, en pruimen) 1,2. Naast de extreme polyphagy dat het een belangrijke landbouwongedierteinsect, T. maakt urticae heeft de neiging om resistent te worden tegen een breed scala van insecticiden en acariciden die worden gebruikt voor de controle 3-7.
T. urticae is een uitstekend experimenteel organisme, aangezien het een snelle levenscyclus (7 dagen bij 27 ° C)en kan gemakkelijk worden gehandhaafd op een hoge dichtheid in het laboratorium. Methoden om genexpressie (met inbegrip van in situ hybridisatie en antilichaamkleuring) assay en expressie van spint endogene genen met behulp van RNA-interferentie te inactiveren zijn ontwikkeld 8-10. Onlangs heeft de gehele genoomsequentie van T. urticae is gemeld, het creëren van een mogelijkheid om deze plaag herbivoor ontwikkelen als modelorganisme met gelijkwaardige genomische hulpbronnen die al bestaan in sommige van haar waardplanten (Arabidopsis thaliana en de tomaat Solanum lycopersicum) 11. Samen zouden deze modelorganismen inzichten in moleculaire grondslagen van planten-plaag-interacties te bieden.
Hier, een efficiënte methode voor snelle en eenvoudige verzameling van een groot aantal volwassen vrouwelijke mijten, de toepassing ervan op een experimentele waardplant, en de beoordeling van de plant schade door spint voeding worden beschreven. De gepresenteerde protocol enables snelle en efficiënte inning van honderden mensen op elk ontwikkelingsstadium (eitjes, larven, nimfen, volwassen mannetjes en vrouwtjes) die kunnen worden gebruikt voor de volgende experimentele toepassing.
Inleiding
Plant-plaaginteractie is een onderwerp van groot wetenschappelijk en economisch belang. Het werd historisch bestudeerd met behulp van zowel gewassen (zoals tomaat) en het model plant, A. thaliana. In beide gevallen kan de gevoeligheid van de installaties aan herbivoor ofwel rechtstreeks worden gemeten door middel van beoordeling van plantenfenotype na herbivoor aanval of indirect via de beoordeling van de plaag prestaties.
Directe metingen van plantaardige gevoeligheid werden eerder gebruikt voor een aantal schadelijke insect species met behulp van diverse methoden. Zo wordt herbivorie lepidopterale larven gemeten als een schatti....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Onderhoud van de populatie spintmijten
OPMERKING: Spint worden gefokt op California rode kidneybonen (Phaseolus vulgaris).
- Groeien boon planten uit zaden voor 2-3 weken voor besmetting.
- Intermix deze planten met besmette planten; volwassen mijten zal snel koloniseren vers plantmateriaal.
- Verwijder oude besmette bonen planten om de 7-10 dagen, te vervangen door verse planten.
2. Verzamelen Volwassen Vrouwelijke Mijten
- Mite Collection met de wasmethode
- Om mijten verzamelen, plaats een verse bonen plant in contact met besmette planten 1-2 dagen ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Met behulp van 20 tot 30 besmette bonen planten, kan men rond 2000 volwassen vrouwelijke mijten te verzamelen met behulp van zeven. De tijd die nodig is om 10 planten besmetten met 20 mijten per plant is ongeveer 15 minuten bij gebruik van een borstel om mijten te dragen. Combinaties van inzameling en toepassingsmethoden worden getoond in Figuur 2.
Dit protocol genereert reproduceerbare resultaten van de fabriek schade, waaruit blijkt dat verzamelde mijten zijn met gelijksoo.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Deze video toont protocollen gebruikt voor het isoleren en planten besmetten met grote aantallen volwassen vrouwelijke mijten. Hoewel we presenteerde dit protocol met behulp van A. thaliana, kan het worden gebruikt voor alle planten-spint interactie systeem en wordt momenteel met succes ook toegepast op tomaten en wijnstok (Vitis vinifera) planten. Het protocol levert reproduceerbare resultaten te geven dat verzamelde mijten van vergelijkbare fysiologische toestand (figuur 3).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit project werd gefinancierd door de regering van Canada via Genome Canada en het Ontario Genomics Institute (OGI-046), en Ontario Research Fund–Global Leadership in Genomics and Life Sciences GL2-01-035 (voor M.G. en V.G.). T.V.L. is een postdoctoraal onderzoeker van het Fonds voor Wetenschappelijk Onderzoek Vlaanderen (FWO).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Plant materiaal: | |||
| California rode kidneyboon | Stokes, Thorold, ON, Canada | 2 weken oud, goed besmet met spintmijten 2 of 3 dagen voor gebruik. Andere cultivars van Phaseolus vulgaris kunnen worden gebruikt. | |
| Chemicaliën: | |||
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P9416 | 1% stockoplossing wordt bereid om het doseren te vereenvoudigen |
| Kraanwater | Bij kamertemperatuur beïnvloeden hitte- en koudeschok de overlevingssnelheid en prestaties van de mijten | ||
| Ander materiaal en apparatuur: | |||
| Kunststof bak | |||
| Set schaar | |||
| 2 L bekers | |||
| Papierhanddoeken | |||
| Sets van zeefjes | In huis vervaardigd | Gedetailleerde instructies zijn beschikbaar | |
| Dunne borstel | |||
| Pipetten | |||
| Pipetpunten | 0,2 en 1 ml | ||
| 1,5 ml centrifugebuisjes | |||
| Luchtpomp | Aquarium type pomp met omgekeerde luchtstroom. Vacuümlijn kan worden gebruikt. Vereiste drukverschil is ongeveer 2-4 psi | ||
| Stereoscoop | |||
| Scanner | Epson | V30 | Elke flatbed scanner die de nodige mate van controle over de scankwaliteit toelaat. We gebruiken Epson V30 voor onze experimenten. |
| Computer | Windows of OS X pc die compatibel is met de scannerhardware en Adobe Photoshop software. | ||
| Adobe Photoshop software | Adobe Systems Inc., San Jose, CA, USA | diversen | Elke versie met Histogram tool inbegrepen. |
Referenties
- Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. Mites injurious to economic plants. , University of California Press. (1975).
- Migeon, A., Dorkeld, F. Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae. http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).
- Croft, B. A., Van....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
