Hier beschrijven we een eenvoudig en breed toegankelijk microscopie techniek om hoogwaardige digitale video van Drosophila volwassen en larvale mutante fenotype over te nemen van een zijdelingse perspectief.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Overname van hoge kwaliteit digitale video van Drosophila Larven en volwassen gedrag van een Lateral Perspectief
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Drosophila melanogaster is een krachtig experimenteel model voor het bestuderen van de functie van het zenuwstelsel. Gen mutaties die disfunctie van het zenuwstelsel vaak tot levensvatbare larven en volwassenen die voortbeweging defecte fenotypes die moeilijk te beschrijven met tekst of geheel vormen met een fotografisch beeld zijn hebben. Huidige vormen van wetenschappelijk publiceren, maar steunen het indienen van digitale video-media als aanvullend materiaal om een manuscript te begeleiden. Hier beschrijven we een eenvoudig en breed toegankelijk microscopie techniek voor het verwerven van een hoge kwaliteit digitale video van zowel Drosophila larven en volwassen fenotypes vanuit een zijdelingse perspectief. Video van larvale en volwassen motoriek van een side-view is voordelig omdat het mogelijk maakt de observatie en analyse van subtiele verschillen en variaties in afwijkende locomotief gedrag. We hebben met succes gebruik gemaakt van het visualiseren en kwantificeren aberrant kruipen gedrag in derde instar larven, in aanvulling op volwassen mutante fenotype en gedragingen waaronder verzorging.
Inleiding
De gemeenschappelijke fruitvlieg Drosophila melanogaster is een krachtig experimenteel model voor het bestuderen van de functie van het zenuwstelsel 1-3. Evolutionaire behoud van de structuur en functie van het zenuwstelsel bij de mens, maar ook het gemak van genetische manipulatie en een breed scala aan genetische gereedschap maakt Drosophila de première organisme te modelleren van de menselijke neurodegeneratieve ziekten 4. Gen mutaties die disfunctie van het zenuwstelsel vaak tot levensvatbare mutant larven en volwassen Drosophila met verminderde motoriek. Fenotypes waargenomen in het zenuwstelsel defecte mutanten o....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1 De Stereo Microscope System
Opmerking: Hoewel dit protocol is eenvoudig aan te passen aan vrijwel elke stereo-microscoop-systeem gekoppeld aan een digitale camera met de mogelijkheid van het verwerven van video worden bijzonderheden verstrekt over de gebruikte in ons lab (Table of Materials / Equipment)-systeem.
- Verwerven van digitale video met behulp van een trinoculaire stereomicroscoop gekoppeld aan een commerciële digitale camera.
- Om enkele van de commerciële digitale camera aan op de trinoculaire haven van de stereo-microscoop, verwijder de ½x C-mount van de fototubus haven van de stereo-microscoop en vervang d....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
We hebben met succes deze techniek te verwerven en kwantificeren larvale gedragsfenotype geassocieerd met functieverlies van de stathmin gen (figuur 2) 14. De stathmin gen codeert voor een microtubuli regulatie-eiwit dat tubulinedimeren partities van pools van oplosbare tubuline en bindt microtubuli en bevordert hun afbraak 15,16. Stathmin gewenst is om de integriteit van microtubuli in de axonen van perifere zenuwen 14 handhaven. Verstoring van stathmi.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Sterkte Drosophila melanogaster 's als een modelsysteem voor het bestuderen van functioneren van het zenuwstelsel vloeit grotendeels voort uit de convergentie van de krachtige genetische hulpmiddelen beschikbaar en het brede scala aan robuuste gedrags assays ontwikkeld. Hier presenteren we een eenvoudige en breed toegankelijk microscopie techniek voor het verwerven van een hoge kwaliteit digitale video van Drosophila volwassen en larvale locomotief fenotypes vanuit een zijdelingse perspectief. We h.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan.
Dankbetuigingen
De auteurs willen Alexandra Opie erkennen voor technische bijstand en ondersteuning, James Barton voor het leveren van video-vertelling, en Ramona Flatz en Joellen Sweeney voor het verschijnen in de begeleidende video. Dit werk werd ondersteund door de MJ Murdock Charitable Trust (Grant nummer 2012205 te JED).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Trinocular Stereozoom Microscope | Olympus Corporation | SZ6145TR | ½ C-mount werd verwijderd en vervangen door 1X C-mount |
| 1X C-mount | Leeds Precision Instruments | LSZ-1XCMT2 | |
| Digital Camera Coupler (43 mm thread) | Qioptiq Imaging Solutions | 25-70-10-02 | |
| 58 mm to 48 mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR5848 | |
| 48 mm to 43 mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR4843 | |
| Lensmate Adapter Kit for Canon G10 | LensMateOnline.com | ||
| Canon PowerShot G10 Digital Camera | Canon U.S.A., Inc. | ||
| 1.5 ml Spectroscopic Polysterene Cuvette | Denville Scientific | U8650-4 |
Referenties
- Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. Drosophila neurobiology: a laboratory manual. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2010).
- Frank, C. A., et al. New approaches for studying synaptic development, function, and plasticity using Drosophila as a model system. J Neurosci....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
Meer artikelen verkennen
Gedrag van Drosophila-larvenGedrag van volwassen DrosophilaVideo vanuit lateraal perspectiefStereomicroscoopopstellingKoppeling van digitale cameraBeeldvormingstechniek voor larvenInsluiting van volwassen vliegenProtocol voor videoacquisitieAnalyse van gedragsfenotypesMicroscopische videoregistratie
