Voorbereiding van een Bloed Cultuur Pellet voor snelle identificatie van bacteriën en antibiotica gevoeligheid testen

Samenvatting

Een snelle bacteriële pellet bereiding van een positieve bloedkweek kan worden gebruikt als een monster voor toepassingen zoals identificatie door MALDI-TOF, Gram-kleuring, antibiotica gevoeligheidstesten en PCR-gebaseerde test. De resultaten kunnen snel worden meegedeeld aan artsen om de uitkomst van patiënten die lijden aan infecties in het bloed te verbeteren.

Samenvatting

Bloedbaan infecties en sepsis zijn een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit. De succesvolle uitkomst van patiënten met bacteriëmie, hangt af van een snelle identificatie van de ziekteverwekker om een ​​optimale behandeling met antibiotica te begeleiden. De analyse van Gramkleuringen van positieve bloedkweek kan snel worden uitgevoerd en reeds een aanzienlijke invloed hebben op de antibiotica kuur. Echter, is de nauwkeurige identificatie van het infectueuze agens nog steeds vereist om de optimale gerichte behandeling stellen. We presenteren hier een eenvoudige en snelle bacteriële pellet bereiding van een positieve bloedkweek die kan worden gebruikt als een monster voor meerdere essentiële verdere toepassingen zoals identificatie door MALDI-TOF MS, antibiotica gevoeligheidstest (AST) door disc diffusie assay of geautomatiseerde systemen AST en geautomatiseerde PCR-gebaseerde diagnostische test. De uitvoering van deze verschillende identificatie en AST die rechtstreeks aangebracht op de bloedkweek bacteriële pellets zeer siMilar de prestaties gewoonlijk verkregen uit geïsoleerde kolonies gekweekt op agarplaten. Vergeleken met conventionele benaderingen, de snelle verwerving van een bacteriële pellet vermindert de tijd zowel identificatie en AST rapporteren. Zo kan na bloedkweek positiviteit, identificatie door MALDI-TOF worden gemeld binnen minder dan 1 uur, terwijl de resultaten van AST door geautomatiseerde AST systemen of disc diffusie testen binnen 8 tot 18 uur, respectievelijk. Evenzo kunnen de resultaten van een snelle PCR gebaseerde bepaling de clinici worden meegedeeld minder dan 2 uur na het verslag van een bacteremia. Samen tonen deze resultaten aan dat de snelle voorbereiding van een bloedkweek bacteriële pellet heeft een belangrijke invloed op de identificatie en de AST doorlooptijd en dus op de goede afloop van de patiënten die lijden aan infecties in het bloed.

Inleiding

Bloedbaan infecties en sepsis bij gehospitaliseerde patiënten een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit. Zo is de sterfte gerelateerd aan infecties bloedbaan waargenomen bij ongeveer 14% tot 37% van de gehospitaliseerde patiënt en kan op de intensive care-patiënten ^1-3 te verhogen tot 35%. De snelle identificatie van de ziekteverwekker is cruciaal voor een optimale antimicrobiële behandeling te begeleiden en om de goede afloop van de antimicrobiële therapie ^4,5 te verhogen. De snelle analyse van Gramkleuringen van positieve bloedkweek reeds een aanzienlijke invloed op de aanpassing van antimicrobiële therapie ^6,7 maar nau....

Protocol

Dit protocol is ontwikkeld en gevalideerd na het onderzoek en de ontwikkeling van processen en ethische regels van onze instelling voor een routine-instrument wordt geïmplementeerd.

1 Voorbereiding van een Blood Culture bacteriepellet door Ammonium Chloride Erythrocyte-lyseren Procedure

1. Bereiding van een positieve bloedkweek voor daaropvolgende centrifugatie.
   1. Steriliseer de bloedkweek dop. Voeg 70% ethanol op de dop van de fles en het branden.
      OPMERKING: Voer deze stap onder een laminaire stroming kap niet uitvoeren.
   2. Beweeg de fles om een ​​laminaire stroming kap. Verzamel 5 ml van de bloedkweek met ee....

Resultaten

In de studie van Prod'hom e.a.. ^15, werden bacteriële pellets verkregen door ammoniumchloride lysis centrifugering van 122 positieve bloedkweek van 78 patiënten geanalyseerd met MALDI-TOF MS. Van de 122 positieve bloedkweek, 95 (77,9%) werden correct geïdentificeerd op het niveau van soorten en een (0,8%) op het genus-niveau. De overige 26 (21,3%) bloedkweek pellets gaven geen betrouwbare identificatie door MALDI-TOF. Van deze 21 waren gram-positieve bacteriën, waaronder 13 streptokokken en 5 coa.......

Discussie

Vergeleken met conventionele positieve bloedkweek diagnostische benaderingen snelle verwerving van een bacteriële pellet met de ammoniumchloride lysis centrifugatie benadering verminderen de tijd tot identificatie rapporteren door 16 tot 24 uur en de tijd AST door 24 rapporteren aan 48 uur (Figuren 1 en 3).

Snelle invoering van geschikte antibiotica therapie is van cruciaal belang voor de uitkomst van patiënten die lijden aan infecties in het bloed te verbeteren. Aldus vroeg.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
20 G naald	Terumo, Leuven, België	NN-2038R
50 ml Falcon buis	BD, Franklin Lakes, NJ, VS	352070	50 ml centrifuge buizen
Ammonium chloride	Merck, Darmstadt, Duitsland	101145
Kaliumwaterstoffosfaat	Fluka, St. Louis, MO, VS	60340
Mierenzuur	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS	F0507	Ontvlambaar, corrosief
α-Cyaan-4-hydroxycininezuur	Fluka, St. Louis, MO, VS	70990	Acute toxiciteit
Acetonitril	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS	271004	Ontvlambaar, acute toxiciteit
Trifluorazijnzuur	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS	T6508	Corrosief, acute toxiciteit
Vitek 2 60 instrument	Biomérieux, Marcy-l'Etoile, Frankrijk	27202	geautomatiseerd microbieel systeem instrument
Vitek 2 Gram-positief (GP) kaart	Biomérieux, Marcy-l'Etoile, Frankrijk	21342	geautomatiseerde GP  identificatiekaart
Vitek 2 AST-P580 kaart	Biomérieux, Marcy-l'Etoile, Frankrijk	22233	geautomatiseerd microbieel AST systeem
Vitek 2 Gram-negatief (GN) kaart	Biomérieux, Marcy-l'Etoile, Frankrijk	21341	geautomatiseerde GN  identificatiekaart
Vitek 2 AST-N242 kaart	Biomérieux, Marcy-l'Etoile, Frankrijk	413391	geautomatiseerd microbieel AST systeem
Xpert MRSA	Cepheid, Sunnyvale, Ca, VS	GXMRSA-100N-10	nucleïnezuur-amplificatietechnologie MRSA
GeneXpert IV instrument	Cepheid, Sunnyvale, Ca, VS	GXIV-4-D	nucleïnezuur-amplificatietechnologie instrument
Microflex LT MALDI-TOF MS instrument	Bruker Daltonics, Bremen, Duitsland	BDAL microflex LT/SH
MSP 96 doel staal BC	Bruker Daltonics, Bremen, Duitsland	280799	MALDI doelplaat
Densitometer Densicheck instrument	Biomérieux, Marcy-l'Etoile, Frankrijk	27208
MALDI Sepsityper kit 50	Bruker Daltonics, Bremen, Duitsland	8270170
Mac Conkey agar	Biolife, Milano, Italië	4016702
Mueller-Hinton agar	Oxoid, Hampshire, Engeland	CM0337	Mueller-Hinton agar (MH)
MHF agar	Biomérieux, Marcy-l'Etoile, Frankrijk	43901	Mueller-Hinton agar-gefingeerde organismen agar (MHF)
BD columbia III agar	BD, Franklin Lakes, NJ, VS	254071	bloedagar
BD chocolate agar	BD, Franklin Lakes, NJ, VS	254089	chocolate agar
BD schaedler agar	BD, Franklin Lakes, NJ, VS	254084	Schaedler agar