Een Zebrafish-faciliteit die geschikt is voor fokken en in vivo onderzoek wordt op een eenvoudige en betaalbare manier gebouwd. Onderhoud is minimaal. Deze faciliteit is ideaal voor betrokkenheid van studenten en onafhankelijk onderzoek.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Bouw van een betaalbare en makkelijk te bouwen zebravis Facility
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
In vivo biomedisch onderzoek is cruciaal om te vertalen in vitro bevindingen naar klinische vooruitgang. Kleine academische instellingen met beperkte middelen vinden het vrijwel onmogelijk om te bouwen en typische knaagdieren faciliteiten voor onderzoek te blijven. Zebravis onderzoek is aangetoond een waardevol alternatief voor in vivo onderzoek farmacologie, fysiologie, ontwikkeling en genetische studies. Dit artikel toont aan dat een functionele zebravis faciliteit kan worden gebouwd in een eenvoudige en betaalbare manier. We tonen aan dat een dergelijke voorziening kan worden gebouwd rond een werkdag met minimale hulpmiddelen en expertise. De kosten van de 27 1.8 L aquarium zebravis faciliteit gebouwd in deze studie was ongeveer $ 1500. We schatten dat het onderhoud van een eerste werkende 150 vis kolonie gedurende 3 maanden is $ 1.000. Dit project betrokken studenten, die werden ingevoerd om aquaculturing van zebravissen voor onderzoek voorstelt.
Inleiding
In vivo modellen zijn essentieel in het uitvoeren van uitgebreide biomedisch onderzoek, omdat zij toestaan dat in vitro onderzoek worden vertaald op het systeem en organismaal niveau. Bijvoorbeeld heeft onderzoek met kleine zoogdieren, namelijk knaagdieren, zijn noodzakelijk gebleken bij de ontwikkeling van geneesmiddelen en de verbetering van de beschikbare geneesmiddelen. Het is echter mogelijk de complexiteit (financieel en logistiek) maken het vrijwel onmogelijk om te bouwen en te onderhouden knaagdieren faciliteiten voor experimenten stelt bij kleine onderzoek academische instellingen. Toch kunnen in vivo onderzoek worden uitgevoerd op andere diersoorten die minder uitgebreid logistiek vereisen. Zebravis (Danio rerio) zijn met succes gebruikt als een in vivo model genetica, ontwikkeling, pathofysiologie en farmacologie 1,2,10,11,12 bestuderen. De voor zebravis experimenteren huis faciliteiten zijn relatief eenvoudig en aanzienlijk goedkoper in vergelijking met rOdent faciliteiten. Kim et al. 3 onlangs beschreven een 80 tank zebravis behuizing dat kan worden gebouwd voor ongeveer $ 1500, welke beide delen en arbeidskosten omvat. Dit staat in schril contrast met de bijna $ 8500 die nodig zou zijn om een kant en klare, 80 tanksysteem kopen bij een aantal commerciële leveranciers. Echter, de beschrijving door Kim et al. kan ingewikkeld en moeilijk te volgen voor beginners vis onderzoek. Wij geloven dat een zebravis faciliteit in vereenvoudigde manier kan worden geconstrueerd voor een investering van $ 1.500.
De oprichting van een in vivo faciliteit in kleine academische instellingen biedt hun faculteiten een extra instrument om krachtiger en grondig onderzoek te leveren. In vitro gegevens ondersteund door in vivo resultaten produceren in het algemeen uitgebreider biomedisch onderzoek dan gegevens die zijn verkregen met behulp van alleen in vitro benaderingen. Daarom is deuitvoering van een in vivo onderzoek faciliteit zal een aanzienlijke verbetering van de instelling succes in haar algemene onderzoek inspanningen (blootstelling student aan onderzoek, publicaties, communicatie, de uitoefening van externe financiering, enz.).
De bouw van een zebravis faciliteit zoals die in deze studie beschreven is ideaal voor onderzoek academische instellingen met beperkte faciliteiten (of instellingen zonder in vivo onderzoeksfaciliteiten) tijdens vernauwen financiële tijden.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
LET OP: Deze protocollen volgen de richtlijnen van IACUC van Presbyterian College.
1. Acquire Materialen Vermeld in tabel 1.
2. Zet de 5 Shelf Chrome Volgens instructies van de fabrikant. Dit wordt gebruikt om de faciliteit huis.
3. Construct het waterreservoir en de filtratie-systeem (de figuren 1A en 2).
- Met behulp van Figuur 1A als een gids, lay-out van de 18 liter emmer, pomp, filters en UV-lamp tot de uiteindelijke installatie locatie en grootte te bepalen.
- Zodra onderdelen worden aangelegd, meten en snijd de ¾ "PVC buis om de lengte die nodig is voor de montage. Variëren de lengtes van alle buizen volgens bepaalde ruimte behoeften en beperkingen.
- Monteer de buizen en hulpstukken zoals eerder aangelegd met behulp van de PVC-primer en cement, zie hieronder (3.3.2 en 3.3.3).
- Schuur de snijkanten van de pijp met schuurpapier totdat ze glad eend er geen puin.
- Prime de buitenkant van de buis en de binnenkant van de fitting met het gekochte PVC primer met de meegeleverde wattenstaafje uit de PVC primer.
- Cement de buis en fitting elkaar door toepassing van de PVC cement aan de buitenkant van de buis met de meegeleverde wattenstaafje. Herhaal dit voor alle stappen die PVC cementeren nodig.
- Plaats de 18 liter emmer aan een kant van de schapconstructie.
- Installeer een schutbordconnector in de zijkant van het reservoir.
- Bevestig een ¾ "PVC pijp aan het schutbord.
- Sluit het andere uiteinde van de ¾ "pijp aan de inlaat van de pomp met behulp van een ¾" schroefdraad maken fitting.
- Sluit de filters aan de pomp met behulp van twee 90 graden bochten en ¾ "PVC pijp.
- Gebruik een papieren filter gevolgd door een actieve koolfilter om filteren vuil en verminderen chloor en chemische niveaus in het water.
- Sluit de UV-lamp om de filters te according de instructies van de fabrikant.
- Bevestig de pomp en filtersysteem om de bovenkant van de eerste plank van het rek met behulp van draad banden. Variëren de volgorde van de montage en bevestiging volgens de grootte en de indeling van de plank / rek gekozen.
- Voeg 1 bioball per liter water aan het waterreservoir zodra de pomp en filtersysteem zijn gemonteerd en bevestigd aan de plank.
4. Construeer de belangrijkste toevoerleiding (figuren 1B en 2).
- Meten en snijd een stukje van ¾ "PVC pijp naar de UV-lamp aan te sluiten op de stroomvoorziening
- Gebruik een ¾ "PVC T-stuk op de stroomvoorziening lijn beginnen met het aansluiten van de tee tot de ¾" PVC uitlaatgassen afkomstig van de UV-filter. .
- Toevoegen aan-uit klep op de bodem van de PVC T-stuk om te dienen als een afvoer voor het onderhoud spoelen van het systeem.
- Start de belangrijkste toevoerleiding vanaf de top van de ¾ "PVC T-stuk door het meten en snijden ¾" PVCbuis op de gewenste lengte toevoerleidingen voor elk van de planken op het rek.
- Installeer ¾ "PVC-stukken voor de horizontale lijnen die elke plank van het rek zal treden.
- Optioneel (en voorgesteld), voeg een ¾ "aan-uit afsluiter voor elk schap toevoerleiding om voor isolatie van elk schap en een modulaire opbouw van het systeem.
- Gebruik een ¾ "PVC pijp als een drukverlagende lijn op de bovenste plank. Indien deze lijn loopt aan de achterzijde van de plank, deze plank voor opslag. Eindigen de drukverlagende lijn in de belangrijkste uitlaatlijn (Figuur 1B) met een ¾ "on-off ventiel.
- Zodra de bovenstaande stappen zijn voltooid, prime en cement de PVC pijp samen zoals eerder gedaan bij de bouw van het reservoir en filtersysteem.
5. Construeer de belangrijkste uitlaatlijn (figuren 1C en 2).
- Voer de verticale lengte van de belangrijkste uitlaatleiding aan de andere kant van het rooster FROM De belangrijkste toevoerleiding. Gebruik 2 "PVC pijp voor deze verticale lijn aan de hoofdtoevoerleiding ontvangt bovenaan afvoerleidingen van de aquaria van elk schap.
- Snijd de stukken van 2 "PVC pijp voor de verticale belangrijkste uitlaatlijn en gebruik 2" PVC-stukken aan het aquarium afvoerleidingen van elke plank te ontvangen. Beëindig de belangrijkste uitlaat lijn in de voorraad tank om het gerecycleerde water te verdrijven dan een spons filter.
- Snijd een één inch openen van de gehele lengte van de 2 "PVC pijp stukken en hechten aan verticale belangrijkste uitlaatlijn met PVC-stukken voor de horizontale afvoerleidingen van de aquaria.
- Cap de 2 "horizontale afvoerleidingen met een 2" PVC-cap.
- Prime en cement de stukken met behulp van de nodige hulpstukken (connectoren, tepels of ellebogen).
6. Construct kweekvijvers (figuur 3).
- Met de boor, snijd een 1 1/8 "opening aan de achterkant van het aquarium 1" onder de bovenkant met een gatenzaag.
- Schuif een ¾ "PVC male adapter (met een # 18 O-ring bevestigd) door het gat (vanaf de binnenzijde van de tank naar buiten).
- Beugel en draai een 90 graden 3/4 "schroefdraad PVC elleboog aan de mannelijke adapter aan het aquarium uitlaatpijp te creëren. Voeg een stuk fijn gaas voor vastschroeven van de deelneming moer aan zebravis gaan door het uitlaatsysteem voorkomen.
- Leg de vis tank met zijn uitlaatpijp einde in de open ruimte van de drooglegging lijn achter de tanks
7. Vanaf het watersysteem
- In verscheidene houders, zoals die waarmee het reservoir meten driemaal de hoeveelheid water aanwezig in het systeem. Laat dit water staan bij kamertemperatuur gedurende 48 uur conditioneren.
- Water toe te voegen aan het systeem en laat het circuleren voor een minimum van 3 dagen.
- Verander het water in het systeem krachtig gedurende de eerste 3 dagen na de mededeling om het stelsel van verontreinigingen ontdoen that wonen in de leidingen.
- Voeg starter zebravis en laat de stikstofcyclus te krijgen gevestigd. Normaliseren pH op een consistente 7. Houd zeven zebravis per 1,8 L, en voer ze twee keer per dag door de week en één keer per dag in het weekend, zoals voorgesteld door Linbo 4 en McNabb 6.
- Toezien op de nitraat (<75 mg / l), nitriet (<10 mg / l), en ammonium (0 mg / l) per dag gedurende de eerste week na het toevoegen van vis, en twee keer per week een keer gewenste niveaus zijn gehandhaafd met regelmatige waterverversingen .
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De bouw van de pomp en flters System
Zodra de tandheugel is gemonteerd en ingesteld als eerste stap de pomp en filter te bouwen. De filters zijn aangesloten op de pompinstallatie en bevinden zich boven het onderste niveau van de eerste plank, waarmee eenvoudig filter onderhoud en vervanging. Evenzo wordt de UV-lamp verbonden met PVC pijp aan het filter en plaats gehouden met plastic draad banden zorgen voor een gemakkelijke vervanging van de UV-lamp als nodig is (figuur 4A). Onmiddellijk...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het belangrijkste doel van dit artikel is om aan te tonen dat de bouw van een functionele zebravis faciliteit is niet ingewikkeld en kan worden gebouwd door beginnende vis onderzoekers met minimale constructie van kennis. Bovendien is dit artikel laat zien dat het materiaal voor dit functionele zebravis faciliteit gemakkelijk en betaalbaar kan worden verkregen van de plaatselijke huisdier aanbod winkels of bouwmarkten. Zodra alle materialen en gereedschappen zijn verworven met de bouw van het systeem en de vis tanks duu...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren geen belangenconflicten voor deze paper.
Dankbetuigingen
De auteurs willen graag naar het Bureau voor Onderzoek van de Presbyterian College School of Pharmacy bedanken voor de financiële ondersteuning van dit project via de Kleine Apotheek Awards for Research & Collaboration (SPARC) Award. De auteurs danken de heer John Smink, Manager van de Aquatic Animal Research Laboratory, Clemson University, Clemson, SC voor zijn technische bijstand manuscript revisie.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Item | Merk | Aantal | |
| 74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit | Style Selections | 1 | |
| 18-Gallon General Bucket/Tote | Centrex Plastics: LLC Rugged Tote | 1 | |
| 6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord | Master Electrician | 1 | |
| 9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp | Smartpond | 1 | |
| Whole House Water Replacement Filter | Whirlpool | 6 | |
| Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing | Whirlpool | 2 | |
| Thread Seal Tape | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC Cement | Oatey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing | Mister Landscaper | 1 | |
| 1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter | Mister Landscaper | 6 | |
| Drop-In Filter with House | Whirlpool | 6 | |
| 2-in Dia 90-Degree PVC Elbow | LASCO | 3 | |
| 2-in Dia 90-Degree Tee | LASCO | 3 | |
| 3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow | LASCO | 15 | |
| 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 7 | |
| 3/4-in Dia PVC Tee | LASCO | 12 | |
| 2-in Dia PVC Cap | LASCO | 3 | |
| 1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 2 | |
| 3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve | American Valve | 5 | |
| 1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | Lasco | 8 | |
| 3/4-in Dia PVC Cap | Lasco | 1 | |
| 2-In x 5-Ft Pvc Pipe | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft Pvc pipe | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 PVC ring | SXT | 10 | |
| ½” PVC male adapter | SXT | 1 | |
| ¾” PVC coupling | SXT | 1 | |
| ½” PVC female adapter | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾” PVC male adapter (w/ #18 O-ring) | SXT | 28 | |
| 90-degree ¾” threaded PVC elbow | SXT | 27 | |
| Fine Mesh | N/A | 1 yard | |
| Bulkhead Connector | N/A | 1 | |
| Hacksaw | N/A | 1 | |
| Drill | N/A | 1 | |
| Hole saw | N/A | 1 | |
| Adjustable Wrench | N/A | 1 | |
| Pliers | N/A | 1 | |
| Tape Measure | N/A | 1 | |
| Safety Glasses | N/A | 1 | |
| Work Gloves | N/A | 1 |
Referenties
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. Modular, easy-to-assemble, low-cost facility. Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196(2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
