Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Toxicologische Testen voor Testing Effecten van een epigenetische Drug ontwikkelingssamenwerking, Vruchtbaarheid en Survivorship van malariamuggen

8.1K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/52041

⸱

16 januari 2015

 ,  , 
1Department of Entomology, Virginia Tech

In dit artikel

Samenvatting

Een protocol wordt ontwikkeld om de effecten van een epigenetisch medicijn DZNep op de ontwikkeling, vruchtbaarheid en overlevingskansen van muggen te onderzoeken. Hier beschrijven we procedures voor de aqueuze blootstelling van DZNep aan onvolwassen muggen en een op bloed gebaseerde blootstelling van DZNep aan volwassen muggen, naast het meten van SAH hydrolase remming.

Samenvatting

Insecticide resistentie vormt een groot probleem voor malaria controleprogramma's. Muggen aan te passen aan een breed scala van veranderingen in de omgeving snel, waardoor malaria controle een alomtegenwoordig probleem in tropische landen. De opkomst van insecticide resistente populatie staat in voor de exploratie van nieuwe drug target paden en verbindingen voor vector mugcontrole. Epigenetische drugs zijn goed ingeburgerd in het onderzoek naar kanker, echter niet veel bekend is over de effecten ervan op insecten. Deze studie geeft een eenvoudig protocol voor de behandeling van de toxicologische effecten van 3-Deazaneplanocin A (DZNep), een experimentele epigenetische medicijn voor de behandeling van kanker, op de malaria vector, Anopheles gambiae. Een concentratie-afhankelijke toename in mortaliteit en afname in grootte werd waargenomen bij onvolwassen muggen blootgesteld DZNep, terwijl de verbinding verminderde de vruchtbaarheid van volwassen muskieten opzichte behandelingen controleren. Daarnaast was er een drug-afhankelijke afname in S -adenosylhomocysteïne (SAH) hydrolase activiteit muggen na blootstelling aan DZNep opzichte behandelingen controleren. Deze protocollen bieden de onderzoeker een eenvoudige stap-voor-stap procedure om meerdere toxicologische eindpunten beoordelen met een experimenteel geneesmiddel en, op zijn beurt, tonen een unieke multi-prong benadering voor het verkennen van de toxicologische effecten van in water oplosbare epigenetische geneesmiddelen of verbindingen van rente tegen vector muggen en andere insecten.

Inleiding

Malaria is verantwoordelijk voor het hoogste aantal insecten sterfgevallen in de wereld. Naar schatting 219 miljoen gevallen per jaar wereldwijd, resulterend in ongeveer 660.000 doden, voornamelijk in Afrika 1. Ondanks de gezamenlijke inspanningen, malaria programma's voor tal van uitdagingen. Terwijl insecticide behandelde muskietennetten en spuiten van insecticiden binnenshuis vorm belangrijke onderdelen van het programma, weerstand tegen insecticiden in de lokale bevolking belemmeren deze inspanningen 2. De snelle toename insecticide resistente muggen populaties is grotendeels toegeschreven aan het vermogen van de malariamuggen snel aanpassen aan veranderingen in hun omgeving en exploiteren verschillende niches 3,4,5. Om de bestaande mechanismen van resistentie tegen insecticiden te overwinnen, is de exploratie van nieuwe insecticide targets en de volgende generatie verbindingen gerechtvaardigd. Een eenvoudige stap-voor-stap protocol voor het bepalen van de werkzaamheid van experimentele insecticiden op de verschillende levensstadia van malaria mosquitoes aanzienlijk zou verbeteren deze inspanningen.

Farmacologisch onderzoek van de effecten van geneesmiddelen op cellijnen en diermodellen hebben het gebruik van epigenetische drugs als een nuttig instrument voor het moduleren van de genetica en fysiologie van cellen en organismen vastgesteld. DNA-methylatie en histon-eiwitten zijn twee epigenetische mechanismen die genexpressie in meercellige organismen beïnvloeden zonder dat de onderliggende DNA-sequentie 6. Posttranslationele modificaties zoals methylering speelt een cruciale rol bij het ​​handhaven van cellulaire integriteit en genexpressie en invloed kunnen verscheidene fundamentele processen 7,8,9. Onderzoek in een aantal insectensoorten hebben het belang van epigenetica gemarkeerd in processen waarbij oögenese en stamcel onderhoud 10, evenals de dosering compensatie 11. Dergelijke aspecten ziektevectoren nog worden onderzocht. Met behulp van een verbinding om dit systeem in muggen moduleren kan ons voorzien inbezienswaardigheden in de roman insecticide doel paden. 3-Deazaneplanocin A (DZNep) is een bekend histon-methylatie-remmer, die van invloed zijn op de verschillende vormen van kanker zijn bestudeerd 12,13,14,15,16. DZNep is een stabiele in water oplosbare epigenetische geneesmiddel dat indirect remt histon lysine N-methyltransferase (EZH2), een component van de Polycomb repressieve complex 2 (PRC2) in zoogdiercellen. PRC2 speelt een belangrijke rol in het reguleren van de groei van stamcellen in meercellige organismen en histon methylatie is een belangrijk aspect van de PRC2 gemedieerde silencing. Bij immuungecompromitteerde muizen werden cellen voorbehandeld met DZNep aangetoond minder tumorigene 17 zijn. Dit geneesmiddel wordt steeds gebruikt voor het bestuderen van andere ziekten, zoals niet-alcoholische vette leverziekte, waarin EZH2 betrokken is 18. DZNep is een gevestigde S -adenosylhomocysteine ​​(SAH) hydrolase remmer 19, 20. De remming van SAH hydrolase resulteert in eenaccumulatie van SAH en op zijn beurt leidt tot de inhibitie van methyltransferase activiteit door beperking beschikbaar methyldonor groepen. SAH een aminozuurderivaat gebruikt door vele organismen, waaronder insecten in hun metabole routes. Een recente studie heeft aangetoond dat DZNep in lage doses kunnen diapause beïnvloeden en vertragen de ontwikkeling van insecten 21.

Hier, een robuust protocol om de effecten van een in water oplosbare verbinding van verschillende levensstadia muggen onderzoeken ontwikkeld. De drie delen van dit protocol instructies omvatten voor het onderzoeken van de effecten van een in water oplosbare verbinding onvolwassen muggen, volwassen bloed voedende vrouwen en enzymactiviteit van volwassen mannelijke en vrouwelijke muggen. Eerste, DZNep wordt opgelost in water om onvolwassen mosquito ontwikkeling en overleving te bestuderen. Dit wordt uitgevoerd bij twee concentraties eventuele verschillen door 10-voudige toename in drug blootstelling vergelijken. Om het effect van het geneesmiddel op volwassen vrouwelijke muggen, DZNep verkennenwordt toegevoegd aan gedefibrilleerd schapen bloed en gevoed het bloed kunstmatig om vrouwtjes. Vervolgens wordt de uitkomst van het geneesmiddel op vruchtbaarheid onderzocht. Tenslotte wordt een enzymactiviteitsanalyse uitgevoerd met 5,5'-dithiobis- (2-nitrobenzoëzuur) (DTNB) als een indicator van het effect van DZNep op SAH hydrolase inhibitoren op volwassen mannelijke en vrouwelijke muggen bepalen. Hoewel dit protocol is ontwikkeld met een malariamug, Anopheles gambiae kan gemakkelijk worden aangepast aan het bestuderen van de effecten van verbindingen van belang op een soort van muggen of andere insecten. De technieken die in dit protocol kan niet doeltreffend worden toegepast op een geneesmiddel met weinig of geen oplosbaarheid in water of waterige media.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

OPMERKING: De drie delen van het protocol beschrijven waterige blootstelling van de DZNep geneesmiddel larvale muggen, een bloed gebaseerde blootstelling van DZNep volwassen vrouwtjes om het effect van vruchtbaarheid te bestuderen en SAH hydrolase remming door DZNep gemeten met een eenvoudige colorimetrische techniek. Een schematische weergave van deze testen wordt in figuur 1.

1. Onvolwassen Mosquito Ontwikkeling en Survivorship Testen

OPMERKING: Dit gedeelte legt het gebruik van een in water oplosbaar geneesmiddel dat muggenlarven ontwikkeling en overleving beïnvloedt.

  1. Hatch A. gambiae eieren bij 28 ° C in gedestilleerd water (dH 2 O) en larven achter hen 2e instar.
  2. Neem een zes-goed DNAse, RNAse vrij celkweekplaat en giet 10 ml dH 2 O aan elk putje.
  3. Selecteer muggenlarven op 2e larvestadium en voeg 15 larven per well. Voor het toevoegen van larven 2 e instar tot het bord, put ze op een papieren handdoek voor 2-3 seconden om het overtollige water te verwijderen.
  4. Label putten met kleurcode tapes aan experiment willekeurig. Label 2 waterputten per testconcentratie op elk bord (figuur 2).
  5. Bereid een 1 mM DZNep hydrochloride (MW = 298,73) stock-oplossing door het oplossen van 0,3 mg DZNep in 1 ml dH 2 O. Voeg voorraadoplossing van DZNep.HCl gelabelde putjes tot een eindconcentratie van 0,5 uM en 5,0 uM.
    OPMERKING: De voorraad oplossing kan op 4 worden opgeslagen ° C voor de korte termijn (1 dag tot een maand) of -20 ° C voor lange termijn (langer dan een maand).
    OPMERKING: Toevoeging van de voorraadoplossing van bovengenoemde concentraties de hoeveelheid water niet veranderen in de putjes significant. Echter bij veel hogere concentraties, is het raadzaam om de verbinding oplossen in het larvale medium om onnodige verdunning van de verbinding te voorkomen.
  6. Voeg gelijke hoeveelheid vlok visvoer aan elk putje. Bedek de plaats en incubeer ze op 28 ° C in een incubator.
  7. Noteer de sterfte voor de DZNep-behandelde en onbehandelde larvale muggen na een 24-uur blootstelling periode. Verwijderen en eventuele dode larven weggooien. Herhaal deze opname elke dag tot alle larven sterven of verpoppen en naar voren als volwassenen. Noteer de grootte van larven om de dag, dat wil zeggen dag 0, 2, 4, 6, 8, totdat ze verpoppen.
  8. Analyseer de larvale ontwikkeling en sterfte gegevens met behulp van een adequate statistische analyse software.
    OPMERKING: Een grafiek kan worden gebruikt om de sterfte in Microsoft Excel vertegenwoordigen. Multivariate Analysis of Variance (MANOVA) uitgevoerd met een software zoals JMP of SPSS zal onthullen indien verschillende doses van het geneesmiddel aanzienlijke verschillen in de overleving van muggenlarven.

2. Vruchtbaarheid Assay door het toedienen van drugs door middel van kunstmatige Feeder aan vrouwelijke muggen

OPMERKING: Dit hoofdstuk beschrijft de toevoeging van het geneesmiddel aan het bloed van eennd dit naar volwassen vrouwelijke muggen met een kunstmatig voedingssysteem.

  1. Opgezet volwassen mug kooien met een gelijk aantal mannelijke en vrouwelijke muggen voor controle en testen kooi. Zorg voor 10% suikeroplossing gedrenkt in katoen ballen om zowel de kooien tot de vrouwtjes zijn klaar voor het voeden (3-5 dagen is optimaal voor Anopheles gambiae).
  2. 2 uur voorafgaand aan het bloed te voeden, verwijder de katoenen ballen om ervoor te zorgen vrouwtjes hebben honger.
  3. Monteer twee kunstmatig bloed feeders die bestaan ​​uit een omgekeerde brede onderzijde glazen trechter (diameter = 50 mm, lengte = 70 mm) en een omringende kunststof verzegeld met industriële lijm. Bevestig plastic buizen (diameter = 7 mm) tot twee uitgangen feeders '(diameter = 10 mm) via aansluitingen voor in- en uitstroom van water. Label de twee feeders als "Control" en "5 uM DZNep."
  4. Met behulp van een in de handel verkrijgbaar verwarmingselement, het opzetten van het programma voor het voeden. In "Menu" ga naar "Instellingen"en selecteer "streefwaarden"; voorgeladen programma's zal verschijnen. Selecteer "SP1" en stel de temperatuur voor 37 ° C.
    OPMERKING: Het verwarmingselement zorgt ervoor dat het bloed toegediend wordt op een constante temperatuur. Aanvullend programma instellingen kunnen worden gebruikt voor verschillende muggen of insecten.
  5. Vul een emmer met water en dompel het verwarmingselement in het water.
  6. Knip een vierkant stuk Parafilm (50 mm x 50 mm) en rek het om een ​​dunne vliezige film te maken. Bedek de bodem van de kunstmatige feeders met Parafilm. Snijd een ander stuk van Parafilm (50 mm x 10 mm), strek het en sluit de randen van de feeders.
  7. Monteer het systeem, waarop de feeders en verwarmingselement door de buizen. Eenmaal voltooid, schakelt het systeem in en selecteer "SP1". Druk op "Enter" om het systeem te starten.
    OPMERKING: Het water wordt verwarmd naar 37 ° C en op die temperatuur gehouden.
  8. Monitor the temperatuur van het water met behulp van een thermometer in het water emmer.
    OPMERKING: De aansluitingen en buizen helpen handhaven van een constante circulatie van het water door het systeem, zodat de temperatuur van het bloed bij 37 blijft ° C.
  9. Vul een vlakke bodem dienblad met 10% bleekwater oplossing die zal worden gebruikt om geen bloed morsen te ontsmetten.
  10. Voeg 2 ml bloed gedefibrilleerd schapen om een ​​microcentrifugebuis. Bestempelen dit als "Control". Herhaal dit proces voor de experimentele buis gelabeld als "5 uM DZNep" .Add 6 pi DZNep stockoplossing (zie stap 1.5) naar de experimentele buis met het label "5 uM DZNep" voorzichtig het bloed en drugs meng door het meerdere malen. Incubeer het buisje 10 minuten bij kamertemperatuur.
  11. Met behulp van een pipet, voeg 2 ml van de controle en testen van bloed naar de top van navenant gelabeld feeders. Gooi de pipet in de bleekwater oplossing. Bedek de kooi met een donkere zak en ademen lucht op kooi regelmatig om f te moedigenemales voor het voeden.
  12. Laat de muggen voeden gedurende ongeveer 30 minuten. Zodra voeding is voltooid, schakelt het verwarmingselement, neem de feeders buiten en strip de Parafilm. Week de feeder in bleekwater oplossing voor ongeveer 5 minuten en spoel het goed in gedemineraliseerd water.
  13. Verwijder de feeders en zet katoenen ballen met suiker water op de kooien voor 48 uur. Een ei schaaltje met water en filter papier in de kooi 's nachts naar de eileg te vergemakkelijken. Label elke ei gerecht met de betreffende toets of de controle concentratie.
  14. Verwijder het ei gerecht volgende dag en onderzoeken het aantal en de structuur van de eieren onder een stereo-microscoop. Verkrijgen van beelden met behulp van de Q-colors5 software. Tel het aantal eieren. Analyseer verschil in het aantal eieren verkregen uit testen en controle kooien.
    Opmerking: Een ongepaarde t-test kan worden gebruikt om te bepalen of het aantal eieren zijn significant verschillend (p ≤0.05).

3. Biochemische Assay van Mosquito enzymremmingdoor Drug

OPMERKING: In dit gedeelte wordt enzymactiviteitsanalyse behulp DTNB als een indicator voor het effect van DZNep op SAH hydrolase remming bij volwassen mannelijke en vrouwelijke muggen te bepalen.

  1. Bereid een 0,1 M Na 2 HPO 4 (dibasisch natriumfosfaat) door toevoeging van 14,19 g Na 2 HPO 4 tot 1 liter dH 2 O. Bereid vervolgens een 0,1 M NaH 2PO 4 (monobasisch natriumfosfaat) door toevoeging van 13,79 g NaH 2 PO 4 tot 1 liter dH 2 O.
  2. Titreer 0,1 M Na 2 HPO 4 oplossing van 0,1 M NaH 2PO 4 tot pH 8,5.
    LET OP: Dit zal de werkvoorraad oplossing van 0,1 M Na 2 HPO 4 (pH 8,5) zijn.
  3. Bereid een homogenisering oplossing van 0,1 M Na 2 HPO 4 (pH 8,5) door toevoeging van 0,3% Triton X-100.
    OPMERKING: De homogenisering oplossing kan bij 4 ° C worden bewaard
  4. Prepare 1,6 mM SAH (MW = 384,4) oplossing door het oplossen van 6,15 mg SAB in 10 ml 0,1 M Na 2 HPO 4 (pH 8,5).
  5. Bereid een 1,6 mM DTNB (MW = 396,4) oplossing door het oplossen van 6,3 mg DTNB in 10 ml 0,1 M Na 2 HPO 4 (pH 8,5). Houd de verse DTNB oplossing op ijs tot gebruik.
  6. Bereid een 1 mM DZNep.HCl (MW = 298,73) oplossing door het oplossen van 0,3 mg DZNep in 1 ml dH 2 O. Vervolgens verdunnen 1 mM DZNep oplossing in een reeks concentraties van 1,000 uM tot 0,002 uM in dH 2 O.
  7. Om de SAH hydrolase remming door DZNep meten, bereiden een ruwe enzym extract van muggen: Meng 10 niet-bloed-gevoede volwassen muggen in 1 ml ijskoude 0,1 M NaH 2 PO 4 (pH 8,5), die 0,3% Triton X- 100, met een glazen weefselhomogenisator. Breng de homogenaat om een ​​1,5 ml microcentrifugebuis.
  8. Centrifugeer het homogenaat gedurende 5 min bij 10.000 xg bij 4 ° C. Breng het supernatans een schone1,5 ml microcentrifugebuis. Gebruik de supernatant als enzymbron voor de SAH biochemische assay.
  9. Voor de blanco behandelingen (dwz zonder DZNep, geen enzym), voeg 50 ul 1,6 mM SAH, 50 gl 1.6 mM DTNB en 100 gl 0,1 M Na 2 HPO 4 (pH 8,5) aan de afzonderlijke putjes van een 96-well, vlakke bodem microplate.
  10. Voor de controle (dat wil zeggen, geen DZNep), voeg 50 ul 1,6 mM SAH, 50 gl 1.6 mM DTNB, 50 pl 0,1 M Na 2 HPO 4 (pH 8,5) en 50 pi enzym (SAH hydrolase verkregen uit ruw extract) de persoon putten.
  11. Voor DZNep behandelingen, voeg 50 ul 1,6 mM SAH, 50 gl 1.6 mM DTNB, 50 pi enzym en 50 gl geselecteerde DZNep concentratie afzonderlijke putjes. Bereid 4 herhalingen per behandeling en controle.
  12. Lees de optische dichtheid (OD) van de SAB enzym monsters bij 405 nm gedurende 5 min bij 20 seconden interval met een 96 putjes microplaat reader.
  13. Trek de lege OD van controle eennd behandeling OD verkregen van elk putje. Bereken het percentage resterende SAH hydrolaseactiviteit met behulp van de volgende vergelijking:% Resterend Activity = (Behandeling OD / Controle OD) x 100.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Figuur 1 is een schematische weergave van de assays; het beschrijft de verschillende stappen van de in dit artikel genoemde procedure. Aangezien het protocol is gebaseerd op verschillende levensstadia van muggen, is er geen bepaalde volgorde te volgen voor de experimenten die hier worden beschreven. De gebruiker kan voor een of meerdere assays voeren tegelijk, afhankelijk van beschikbaarheid monster.

Figuur 2 toont de set-up voor de onrijpe mug ontwik...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Er zijn verschillende stappen van vitaal belang voor de succesvolle toepassing van dit protocol. Voor het larvale assay, moet ervoor worden gezorgd dat de juiste labels en repliceren elke testconcentratie. Randomizing testmonsters en toevoegen van de aangegeven hoeveelheid geneesmiddel respectieve proefputjes is een belangrijk onderdeel van deze experimentele opstelling. Voor het toevoegen 2e mug instar larven een 96-well microplaat, kan elke larve op keukenpapier worden gezet gedurende 2-3 seconden om overto...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

We danken Victor Marquez voor het leveren van DZNep.HCl en Scotty Bolling voor het vervaardigen van de bloodfeeders. De Mopti en SUA2La stammen van An. gambiae werden verkregen van het Malaria Research and Reference Reagent Resource Center (MR4). Dit werk werd ondersteund door het Fralin Life Science Institute en de subsidie van National Institutes of Health 1R21AI094289 aan Igor V. Sharakhov.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
96-well microplateFisher Scientific12565561
Cell culture plateCytoOneCC7682-7506
CentrifugeSorvall Fresco76003758Een andere centrifuge kan worden gebruikt
Colored tape rollsFisherS68134
Dissection microscopeOlympusSZ
DTNBSigma AldrichD8130
DZNep.HClSigma AldrichSMLO305
Egg dish cups
Filter papersFisher09-795E
Glass feedersVirginia Tech
Glass tissue homogenizer
Heating elementFisher ScientificNC0520091
IncubatorPercival scientificI36VLC8Een andere incubator kan worden gebruikt
Microcentrifuge tube, 2 mlAxygen22-283
Microcentrifuge tube, 1.5 mlAxygenMCT-150-C
MicropipetteEppendorf4910 000.069
Na2HPO4Fisher ScientificM-3154
NaH2PO4Fisher ScientificM-8643
pH meter Mettler Toledo 7easyS20
Plate readerSpectramaxM2
SAHSigma AldrichA9384bewaar bij -20 °C
Triton X-100Sigma AldrichT8787

Referenties

  1. CDC Report. , Available from: http://www.cdc.gov/malaria (2010).
  2. Gatton, M. L., et al. The importance of mosquito behavioural adaptations to malaria control in Africa. Evolution; International Journal of Organic Evolution. 67, 1218-1230 (2013).
  3. Sternberg, E. D., Thomas, M. B. Local adaptation to temperature and the implications for vector-borne diseases. Trends in Parasitology. , (2014).
  4. Rocca, K. A., Gray, E. M., Costantini, C., Besansky, N. J. 2La chromosomal inversion enhances thermal tolerance of Anopheles gambiae larvae. Malaria Journal. 8, 147(2009).
  5. Coluzzi, M., Sabatini, A., Petrarca, V., Di Deco, M. A. Chromosomal differentiation and adaptation to human environments in the Anopheles gambiae complex. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 73, 483-497 (1979).
  6. Donepudi, S., Mattison, R. J., Kihslinger, J. E., Godley, L. A. Update on Cancer Therapeutics. Science Direct. 2 (4), 157-206 (2007).
  7. Greer, E. L., Shi, Y. Histone methylation: a dynamic mark in health, disease and inheritance. Nature Reviews. Genetics. 13, 343-357 (2012).
  8. Kouzarides, T. Chromatin modifications and their function. Cell. 128, 693-705 (2007).
  9. Dawson, M. A., Kouzarides, T. Cancer epigenetics: from mechanism to therapy. Cell. 150, 12-27 (2012).
  10. Clough, E., Tedeschi, T., Hazelrigg, T. Epigenetic regulation of oogenesis and germ stem cell maintenance by the Drosophila histone methyltransferase Eggless/dSetDB1. Developmental Biology. 388, 181-191 (2014).
  11. Conrad, T., Akhtar, A. Dosage compensation in Drosophila melanogaster: epigenetic fine-tuning of chromosome-wide transcription. Nature Reviews. Genetics. 13, 123-134 (2011).
  12. Miranda, T. B., et al. DZNep is a global histone methylation inhibitor that reactivates developmental genes not silenced by DNA methylation. Molecular Cancer Therapeutics. 8, 1579-1588 (2009).
  13. Cui, B., et al. PRIMA-1, a Mutant p53 Reactivator, Restores the Sensitivity of TP53 Mutant-type Thyroid Cancer Cells to the Histone Methylation Inhibitor 3-Deazaneplanocin A (DZNep). J. Clin. Endocrinol. Metab. 99 (11), E962(2014).
  14. Fujiwara, T., et al. 3-Deazaneplanocin A (DZNep), an inhibitor of S-adenosyl-methionine-dependent methyltransferase, promotes erythroid differentiation. The Journal of Biological Chemistry. , (2014).
  15. Li, Z., et al. The polycomb group protein EZH2 is a novel therapeutic target in tongue cancer. Oncotarget. 4, 2532-2549 (2013).
  16. Nakagawa, S., et al. Epigenetic therapy with the histone methyltransferase EZH2 inhibitor 3-deazaneplanocin A inhibits the growth of cholangiocarcinoma cells. Oncology Reports. 31, 983-988 (2014).
  17. Crea, F., et al. Pharmacologic disruption of Polycomb Repressive Complex 2 inhibits tumorigenicity and tumor progression in prostate cancer. Molecular Cancer. 10, 40(2011).
  18. Vella, S., et al. EZH2 down-regulation exacerbates lipid accumulation and inflammation in in vitro and in vivo NAFLD. International Journal of Molecular Sciences. 14, 24154-24168 (2013).
  19. Tan, J., et al. Pharmacologic disruption of Polycomb-repressive complex 2-mediated gene repression selectively induces apoptosis in cancer cells. Genes & Development. 21, 1050-1063 (2007).
  20. Chiang, P. K., Cantoni, G. L. Perturbation of biochemical transmethylations by 3-deazaadenosine in vivo. Biochemical Pharmacology. 28, 1897-1902 (1979).
  21. Lu, Y. X., Denlinger, D. L., Xu, W. H. Polycomb repressive complex 2 (PRC2) protein ESC regulates insect developmental timing by mediating H3K27me3 and activating prothoracicotropic hormone gene expression. The Journal of Biological Chemistry. 288, 23554-23564 (2013).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

MalariamugDZNep behandelinglarvale mortaliteitfecunditeitsassaySAH hydrolaseenzymactiviteitbloedvoedingoverleving van muggen
Toxicologische Testen voor Testing Effecten van een epigenetische Drug ontwikkelingssamenwerking, Vruchtbaarheid en Survivorship van malariamuggen
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.