Methodenartikel

Hoge Resolutie Elektronenmicroscopie van de Helicobacter pylori Cag Type IV Afscheiding System Pili Geproduceerd in wisselende omstandigheden van Iron Beschikbaarheid

DOI:

10.3791/52122

⸱

21 november 2014

 ,  , 
1Department of Medicine - Division of Infectious Diseases, Vanderbilt University School of Medicine, 2Tennessee Valley Healthcare Systems, U. S. Dept. of Veterans Affairs

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hier beschrijven we een methode om het oncogene bacteriële orgaantje, bekend als het Cag Type IV Secretie Systeem (Cag-T4SS), te visualiseren. We ontdekken dat de Cag-T4SS differentieel wordt geproduceerd op het oppervlak van H. pylori als reactie op wisselende omstandigheden van ijzerbeschikbaarheid.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Helicobacter pylori is een spiraalvormig, gramnegatief bacterium dat de menselijke maag van de helft van de wereldbevolking koloniseert1,2. H. pylori is de primaire oorzaak van maagkanker, de op een na meest voorkomende oorzaak van kankergerelateerde sterfgevallen wereldwijd3. Een virulentiefactor die is geassocieerd met een verhoogd risico op maagaandoeningen, is het Cag-pathogeniciteits-eiland, een 40-kb gebied binnen het chromosoom van H. pylori dat codeert voor een type IV-secretiesysteem en de cognate effectormolecuul, CagA4,5. De Cag-T4SS is verantwoordelijk voor het transporteren van CagA en peptidoglycaan naar gasthercepitheelcellen5,6. De activiteit van de Cag-T4SS resulteert in talrijke veranderingen in de biologie van gasthercelten, waaronder upregulatie van cytokine-expressie, activering van pro-inflammatoire paden, cytoskeletaal hermodellering, en inductie van oncogeen celsignaleringsnetwerken5-8. De Cag-T4SS is een macromoleculair apparaat dat bestaat uit sub-assemblagecomponenten die de binnen- en buitenmembraan overspannen en zich naar buiten uitstrekken vanuit de cel in de extracellulaire ruimte. Het extracellulaire deel van de Cag-T4SS wordt de “pilus” genoemd5. Talrijke studies hebben aangetoond dat de Cag-T4SS-pilia worden gevormd op het gastheer-pathogeen-interface9,10. De omgevingskenmerken die de biogenese van dit belangrijke orgaan regelen, blijven echter grotendeels onduidelijk. Onlangs hebben we gerapporteerd dat omstandigheden van lage ijzerbeschikbaarheid de Cag-T4SS-activiteit en pilus-biogenese verhoogden. Hier presenteren we een geoptimaliseerd protocol om H. pylori te kweken onder verschillende omstandigheden van ijzerbeschikbaarheid voorafgaand aan co-cultuur met menselijke maagepitheelcellen. Verder presenteren we het uitgebreide protocol voor visualisatie van het hyper-piliated fenotype dat wordt vertoond onder ijzerbeperkte omstandigheden door middel van hoge resolutie scanning elektronenmicroscopie analyses.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

H. pylori-infectie is een belangrijk risicofactor voor maagkanker1. De ziekteverloop varieert echter en hangt af van talrijke factoren, zoals de genetische aanleg van de gastheer, de genetische diversiteit van H. pylori-stammen en omgevingselementen zoals het dieet van de gastheer11. Eerdere rapporten hebben aangetoond dat er een correlatie bestaat tussen H. pylori-infectie, ijzertekort (gemeten door verlaagde bloedferritine en hemoglobineconcentraties) en verhoogde productie van pro-inflammatoire cytokinen, inclusief IL-8-secretie, die uiteindelijk leidt tot verhoogde progressie van de maagaandoening12. Acute H. pylori-infectie is ook geassocieerd met hypochlorhydrie, wat de mogelijkheid van de gastheer om voedingsijzer te absorberen belemmert, en uiteindelijk leidt tot veranderingen in de ijzerhomeostase13. Deze klinische bevindingen suggereren dat de beschikbaarheid van ijzer binnen de maagsfeer een belangrijke factor kan zijn in het ziekteverloop. In feite hebben diermodellen van H. pylori-infectie aangetoond dat een lage consumptie van dieetijzer maagaandoeningen verergert14. De verlaagde ijzerniveaus bij deze dieren vereisen dat H. pylori een ijzer-acquisitiereactie induceert om het ijzer te verkrijgen dat nodig is voor bacteriële replicatie. H. pylori heeft de capaciteit om het ijzertransport binnen gastheercellen te verstoren om bacteriële replicatie op een CagA-afhankelijke manier te faciliteren15. Interessant is dat het cag-pathogeniciteits-eiland is aangetoond dat het wordt gereguleerd door het ijzer-responsieve transcriptiefactor Fur16,17. Verder worden Cag+-stammen geassocieerd met verhoogde ontsteking en maagaandoeningen zoals kanker1. Deze bevindingen ondersteunen een model waarbij H. pylori de expressie van Cag-T4SS verandert in een poging om ijzer te verkrijgen van gastheercellen die zich in een ijzer-arme omgeving bevinden, wat resulteert in verergerde ziekteverlopen.

Twee factoren die ontsteking en morbiditeit verhogen zijn Cag-expressie en een lage inname van dieetijzer. Deze feiten ondersteunen de hypothese dat verminderde ijzerbeschikbaarheid de productie van Cag-T4SS-pili op het gastheer-pathogeen-interface verhoogt, wat resulteert in ernstigere maagaandoeningen11-14. Het doel van de methode die in dit manuscript wordt gepresenteerd, is om de rol van het micronutriënt ijzer in de regulatie van de biogenesis van de Cag-T4SS-pilus te bepalen. In eerder werk hebben we twee benaderingen gebruikt om een ijzer-afhankelijke toename in Cag-T4SS-expressie waar te nemen. Ten eerste werden output-stammen van dieren die op een hoog en een laag ijzerdieet werden gehouden geanalyseerd en onthulden dat output-stammen met een laag ijzerdieet meer Cag-T4SS-pili produceerden dan stammen met een hoog ijzerdieet14. Ten tweede resulteerde het kweken van de H. pylori 7.13-stam in vitro in ijzerrijke omstandigheden in verminderde pilusvorming, terwijl cellen die in aanwezigheid van een ijzerchelator werden gekweekt significant meer pili produceerden.

We hebben doorgegaan met het onderzoeken van de ijzer-afhankelijke regulatie van het Cag-T4SS-pili-fenotype en bieden het volgende geoptimaliseerde protocol en representatieve resultaten aan die werden uitgevoerd met een extra Helicobacter pylori-stam, PMSS1. De grondgedachte achter de ontwikkeling van deze techniek was om verhoogde Cag-T4SS-activiteit onder omstandigheden van ijzerbeperking te correleren met verhoogde Cag-T4SS-pilusvorming. De bredere implicatie en toepassing van deze techniek zullen geoptimaliseerde kweekcondities opleveren die resulteren in verhoogde productie van de Cag-T4SS-pili. Deze assay zal nuttig zijn voor onderzoekers die de samenstelling en architectuur van de Cag-T4SS willen bepalen door verrijking voor dit belangrijke bacteriële oppervlaktekenmerk. De monstervoorbereiding en visualisatie door veld-emissiekan elektronenmicroscopie heeft talrijke voordelen ten opzichte van alternatieve technieken zoals lichtmicroscopiemethoden om de Cag-T4SS te visualiseren en zal geschikt zijn voor onderzoekers die geïnteresseerd zijn in het bestuderen van de regulatie van dit orgaan10.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. H. pylori Groei in diverse omstandigheden van de beschikbaarheid van ijzer en co-cultuur met Human maagepitheelcellen

  1. Selecteer H. pylori stam PMSS1 voor deze studies aangezien het een intact cag pathogeniteit eiland en drukt een soort werking IV secretiesysteem. Ook gebruik maken van een isogene kooi mutant (PMSSI Δ kooi) als negatieve controle. Groeien bacteriën op TSA-platen aangevuld met 5% schapenbloed (agarplaten) gedurende 24 uur bij 37 ° C in aanwezigheid van 5% CO2.
    OPMERKING: Bereid reagentia en assembleren materialen zoals beschreven in de materialen en apparatuur Table. Eindconcentraties voor elk reagens wordt tussen haakjes weergegeven.
  2. Schraap bacteriën uit de plaat met behulp van een steriel wattenstaafje en te enten in gewijzigde Brucella bouillon bereid uit componenten (zie materialen en apparatuur tabel) en aangevuld met cholesterol. Incubeer culturen overnacht bij 37° C in kamerlucht aangevuld met 5% CO2 met schudden bij 200 omwentelingen per minuut (rpm).
    OPMERKING: Cholesterol wordt gebruikt in plaats van foetaal runderserum omdat dat serum complex; met talrijke bronnen van voedingsstoffen ijzer zoals heem die variabiliteit in resultaten veroorzaakt.
  3. Op de dag van bacteriële kweken, zaad AGS menselijke maagepitheelcellen (ATCC CRL-1739) op met poly-D-lysine behandelde dekglaasjes in platen met 12 putjes (ongeveer 1 x 10 5 cellen per putje).
  4. De volgende dag, verdund bacterieculturen tot een OD600 van 0,3 in gewijzigde Brucella bouillon alleen of gesupplementeerd met 100 pM FeCl3, 200 uM dipyridyl (een synthetisch ijzercheleringsmiddel), of 200 uM dipyridyl plus 250 pM FeCl3. Incubeer deze kweken gedurende 4 uur bij 37 ° C in kamerlucht aangevuld met 5% CO2 met schudden bij 200 rpm.
  5. Centrifuge bacteriën op 1000 xg om cellen te verzamelen en bovenstaande vloeistoffen te verwijderen voordat resuspenderen in een gelijk volume verse gemodificeerde Brucella-bouillon aangevuld met cholesterol. Meet OD600 van de cultuur (OD600 = 1,0 = 5,5 x 10 8 cellen / ml) en bacteriën aan de epitheelcellen in een multipliciteit van infectie (MOI) van 20: 1. Voer seriële verdunningen en plaat bacteriële cellen op bloed agar platen om bacteriële levensvatbaarheid van de cellen te bepalen.
  6. Incubeer H. pylori en AGS menselijke maagepitheelcellen co-kweken gedurende 4 uur bij 37 ° C in aanwezigheid van 5% CO2 in rusttoestand voor het uitvoeren scanning elektronenmicroscopie (SEM) monstervoorbereiding.

2. SEM Monstervoorbereiding naar Visualiseer H. pylori Cag-T4SS Pili

  1. Verwijder H. pylori en AGS co-culturen uit de incubator en decanteren kweeksupernatans (sparen voor IL-8 ELISA). Voorzichtig driemaal met 0,05 M natriumcacodylaat (pH 7,4). Fix monsters gedurende 2-4 uur bij kamertemperatuur in een oplossing van 2,0% paraformaldehyde, 2,5% Glutaaraldehyde en 0,05 M natriumcacodylaat buffer. Na primaire fixatie, wassen monsters driemaal met 0,05 M natriumcacodylaat buffer.
  2. Voer secundaire fixatie met behulp van 0,1% osmiumtetroxide in 0,05 M natriumcacodylaat buffer in twee opeenvolgende 10 min fixatie stappen. Na de middelbare fixatie, wassen monsters drie keer met 0,05 M natriumcacodylaat buffer.
  3. Na primaire en secundaire fixatie, gedehydreerd monsters door opeenvolgende wassen met toenemende concentraties ethanol volgens tabel 1.
  4. Na ethanol uitdroging, voeren drie opeenvolgende wasbeurten van vloeibare kooldioxide. Dan droge monsters op een kritiek punt met behulp van een kritisch punt droger bij een temperatuur van 31,1 ° C en een druk van 1073 psi.
  5. Mount coverslips op aluminium SEM monster stubs en schilderen met een dunne lijn van colloïdaal zilver op het monster rand om passende aarding te realiseren en te voorkomen dat het opladen tijdens SEM beeldvorming.
  6. Coat monsters met 5 nm vangoud-palladium met een sputter jas machine monster secundaire elektron signaal en edge-effect te vergroten.

3. Imaging Parameters voor hoge resolutie SEM Analyses

  1. Bekijk monsters met een Field-Emission Gun Scanning Electron Microscope (FEG-SEM).
  2. Beeld in een hoog vacuüm modus bij een werkafstand van 5-10 mm.
  3. Stel de versnellingsspanning 5 kV.
  4. Stel spotgrootte naar 2-2,5.
  5. Kantel het monster tussen de 15-25 graden om een ​​beter beeld van de gastheer-pathogeen-interface te bereiken.
  6. Prioriteit afbeelden bacteriën aanhanger van de randen van de epitheelcellen voor sterk vergrotende bekijken, aangezien deze gebieden van gastheer-pathogeen interactie aanrijking-pili bacteriën.

4. Statistische analyses te evalueren Pili Quantificaties

  1. Analyseer H. pylori Cag-T4SS pili behulp ImageJ software om aantal pili / cel evenals procent van de cellen te kwantificeren tentoonstellen van de piliated phenotype per onderstaande instructies.
  2. Open microfoto bestanden ImageJ software. Identificeer pili als structuren gevormd tussen de bacteriële cel en gastheercel met uniforme breedte (10-13 nm) en lengte (60-150 nm).
    OPMERKING: De pilus structuur aanwezig WT bacteriestammen, maar afwezig isogene stammen zoals Δ kooi mutante stammen, die een inactivering in het gen coderend voor het ATPase belangrijkste krachten die type IV secretie pilusassemblage haven is.
  3. Kalibreer het meetinstrument door een lijn te trekken met de rechte lijn gereedschap en vervolgens te klikken op de tab "Analyseren". Selecteer "Set Schaal" uit het dropdown menu en voer de vergroting bar waarde in het vakje "bekende afstand" en stel de lengte-eenheid om de juiste instelling (nm). Klik op "OK".
  4. Meet Cag-T4SS pili volgens de lineaire tool om te tekenen over de lengte of de breedte van de pilus en druk op "Ctrl-M" aan elke pilus meten. Houd u een dialoogvenster met de gemeten waarden. Noteer deze waarden of kopiëren en plakken in een spreadsheet programma.
  5. Gebruik de lengte en breedte parameters eerder 24, veronachtzaming kenmerken die niet in het profiel passen CAG-T4SS opgericht. Kwantificeren dan het aantal pili gebaseerd op waarden die binnen de 10-13 nm breedte en 60-150 nm lengte afgrenzingsprocedures.
  6. Analyseer de kwantificering van pili statistisch door tweezijdige Student t-test met behulp van GraphPad Prism software.

5. Optioneel: Evaluatie van IL-8 secretie te correleren met Pilus Production

  1. Middels supernatanten van Stap 2.1 Voer een IL-8 ELISA instructies van de fabrikant met de kit (zie Materialen en uitrusting tabel).
  2. Analyseer de IL-8 uitgescheiden door gastheercellen en bereken het percentage IL-8-inductie ten opzichte van WT PMSS1 alleen in medium gekweekt. Uitvoeren van statistische analyse met behulp van een tweezijdige Student t-test met behulp van GraphPad Prism zoftware.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In dit rapport hebben we aangetoond dat de voorwaarden van wisselende beschikbaarheid van ijzer hebben de capaciteit om te moduleren H. pylori Cag-T4SS pilus biogenese bij de gastheer-pathogeen-interface. Wanneer gekweekt in medium alleen, H. pylori vormt een gemiddelde van 3 pili / cel. Toen H. pylori wordt gekweekt in ijzer afbrekende omstandigheden (de synthetische chelator dipyridyl) die sub-remmend bacteriegroei (figuur 1), de bacteriën talrijke Cag-T4SS pili (~ 7 pili / ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

IJzer is een essentieel micronutriënt voor de meeste levensvormen, waaronder bacteriële pathogenen. In een poging om de levensvatbaarheid van binnendringende micro-organismen te beperken, gewervelde gastheren afzonderen voedingsstof ijzer in een proces dat bekend staat als "nutritionele immuniteit" 18. In reactie daarop bacteriële pathogenen ontwikkeld ijzer gebruiken als een globale signaalmolecule hun omgeving waarnemen en regelen de uitwerking van virulentie functies zoals ijzer acquisitie system...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit onderzoek werd ondersteund door de Department of Veterans Affairs Career Development Award 1IK2BX001701 en de CTSA award UL1TR000445 van het National Center for Advancing Translational Sciences. De inhoud ervan is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijkerwijs de officiële standpunten van het National Center for Advancing Translational Sciences of de National Institutes of Health. Scanning electron microscopy experimenten werden deels uitgevoerd met behulp van de VUMC Cell Imaging Shared Resource, ondersteund door NIH-grants CA68485, DK20593, DK58404, DK59637 en EY08126.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Gemodificeerde brucella bouillon
Pepton van caseïne (10 g/L)Sigma70172
Peptische digestie van dierlijk weefsel (10 g/L)Sigma70174
Gistextract (2 g/L)Sigma92144
Dextrose (1 g/L)SigmaD9434
Natriumchloride (5 g/L)Thermo FisherS271-10
Cholesterol (250X) (4 ml/L)Life Technologies12531018
Ferric chloride (100 of 250 uM)Sigma157740-100G
Dipyridyl (200 uM)SigmaD216305-100G
Gemodificeerde RPMI
RPMI+HEPES (1X)Life Technologies22400-121
Foetaal bovien serum (100 ml/L)Life Technologies10438-026
Bereiding voor elektronenmicroscopie
Paraformaldehyde (2,0% waterig)Electron Microscopy Sciences15713
Gluteraldehyde (2,5% waterig)Electron Microscopy Sciences16220
Natriumcacodylate (0,05 M)Electron Microscopy Sciences12300
Osmium tetroxide (0,1% waterig)Electron Microscopy Sciences19150
Ethanol (absoluut)SigmaE7023
Colloïdaal zilververfElectron Microscopy Sciences12630
SEM-steekproefstubsElectron Microscopy Sciences75220
DekvlakkenThermo Fisher08-774-383
Evaluatie van IL-8-secretie
Quantikine IL-8 ELISA-kitR&D SystemsD8000C

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cover, T. L., Blaser, M. J. Helicobacter pylori in health and disease. Gastroenterology. (6), 1863-1873 (2009).
  2. Sycuro, L. K., et al. Peptidoglycan crosslinking relaxation promotes Helicobacter pylori's helical shape and stomach colonization. Cell. 141 (5), 822-833 (2010).
  3. Kodaman, N., et al. Human and Helicobacter pylori coevolution shapes the risk of gastric disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (4), 1455-1460 (2014).
  4. Tegtmeyer, N., Wessler, S., Backert, S. Role of the cag-pathogenicity island encoded type IV secretion system in Helicobacter pylori pathogenesis. FEBS J. 278 (8), 1190-1202 (2011).
  5. Fischer, W. Assembly and molecular mode of action of the Helicobacter pylori Cag type IV secretion apparatus. FEBS J. 278 (8), 1203-1212 (2011).
  6. Odenbreit, S., Puls, J., Sedlmaier, B., Gerland, E., Fischer, W., Haas, R. Translocation of Helicobacter pylori CagA into gastric epithelial cells by type IV secretion. Science. 287 (5457), 1497-1500 (2000).
  7. Bourzac, K., Guillemin, K. Helicobacter pylori-host cell interactions mediated by type IV secretion. Cell Microbiol. 7 (7), 911-919 (2005).
  8. Bronte-Tinkew, D. M., et al. Helicobacter pylori cytoxin-associated gene A activates the signal transducer and activator of transcription 3 pathway in vitro and in vivo. Cancer Res. 69 (2), 632-639 (2009).
  9. Johnson, E. M., Gaddy, J. A., Cover, T. L. Alterations in Helicobacter pylori triggered by contact with gastric epithelial cells. Front. Cell. Infect. Microbiol. (2), 17(2012).
  10. Rohde, M., Puls, J., Buhrdorf, R., Fischer, W., Haas, R. A novel sheathed surface organelle of the Helicobacter pylori cag type IV secretion system. Mol. Microbiol. 49 (1), 219-234 (2003).
  11. Cover, T. L., Peek, R. M. Jr Diet, microbial virulence and Helicobacter pylori induced gastric cancer. Gut Microbes. 4 (6), 482-493 (2013).
  12. Queiroz, D. M., et al. Increased gastric IL-1β concentration and iron deficiency parameters in Helicobacter pylori infected children. PLoS One. 8 (2), 57420(2013).
  13. Harris, P. R., et al. Helicobacter pylori-associated hypochlorhydria and development of iron deficiency. J. Clin. Pathol. 66 (4), 343-347 (2013).
  14. Noto, J. M., et al. Iron deficiency accelerates Helicobacter pylori-induced carcinogenesis in rodents and humans. J. Clin. Invest. 123 (1), 479-492 (2013).
  15. Tan, S., Noto, J. M., Romero-Gallo, J., Peek, R. M. Jr, Amieva, M. R. Helicobacter pylori perturbs iron trafficking in the epithelium to grow on the cell surface. PLoS Pathog. 7 (5), (2011).
  16. Danielli, A., Roncarati, D., Delany, I., Chiarini, V., Rappouli, R., Scarlato, V. In vivo dissection of the Helicobacter pylori Fur regulatory circuit by genome-wide location analysis. J. Bacteriol. 188 (13), 4654-4662 (2006).
  17. Pich, O. Q., Carpenter, B. M., Gilbreath, J. J., Merrell, D. S. Detailed analysis of Helicobacter pylori Fur-regulated promoters reveals a Fur box core sequence and novel Fur-regulated genes. Mol. Microbiol. 84 (5), 921-941 (2012).
  18. Cassat, J. E., Skaar, E. P. Iron in infection and immunity. Cell Host Microbe. 13 (5), 509-519 (2013).
  19. Nielubowicz, G. R., Mobley, H. L. Host-pathogen interactions in urinary tract infection. Nat. Rev. Urol. 7 (8), 430-441 (2010).
  20. Brickman, T. J., Cummings, C. A., Liew, S. Y., Relman, D. A., Armstrong, S. K. Transcriptional profiling of the iron starvation response in Bordatella pertussis provides new insights into siderophore utilization and virulence gene expression. J. Bacteriol. 193 (18), 4798-4812 (2011).
  21. Mobley, H. L. Helicobacter pylori factors associated with disease development. Gastroenterology. 113 (6), 21-28 (1997).
  22. Testerman, T. L., Conn, P. B., Mobley, H. L., McGee, D. L. Nutritional requirements and antibiotic resistance patterns of Helicobacter species in chemically defined. J. Clin. Microbiol. 44 (5), 1650-1658 (2006).
  23. Senkovich, O., Ceaser, S., McGee, D. J., Testerman, T. L. Unique host iron utilization mechanisms of Helicobacter pylori revealed with iron-deficient chemically defined media. Infect. Immun. 78 (5), 1841-1849 (2010).
  24. Shaffer, C. L., et al. Helicobacter pylori exploits a unique repertoire of type IV secretion system components for pilus assembly at the bacteria-host cell interface. PLoS Pathog. 7 (9), (2011).
  25. Barrozo, R. M., et al. Functional plasticity in the type IV secretion system of Helicobacter pylori. PLoS Pathog. 9 (2), (2013).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Scanningelektronenmicroscopiegastheer pathogeen interfacevisualisatie van pilimaagepitheelcellenijzerrestrictiefield emission gunkritisch punt droogapparaat

Gerelateerde artikelen