Meten-Glutathion geïnduceerde Feeding Response in Hydra

Samenvatting

Hier beschrijven we een eenvoudige test voor de kwantificering van de voedingsrespons in hydra geïnduceerd door de gereduceerde vorm van glutathion. Deze test berust op het meten van de afstand tussen het apicale uiteinde van de tentakel en de mond van de hydra.

Samenvatting

Hydra behoort tot de meest primitieve organismen met een zenuwstelsel en chemosensatie voor het detecteren van gereduceerd glutathion (GSH) voor het vangen van prooien. De beweging van prooidieren veroorzaakt een mechanosensorische ontlading van de brandende cellen, nematocysten genaamd, van de hydra, die in het prooi worden ingebracht. De voedingsrespons bij hydra, die het krullen van de tentakels om de prooi naar de mond te brengen, het openen van de mond en het vervolgens inslikken van de prooi omvat, wordt geactiveerd door GSH dat aanwezig is in de vloeistof die vrijkomt van het gewonde prooi. Om het moleculaire mechanisme van de voedingsrespons bij hydra, dat tot op heden onbekend is, te kunnen identificeren, is het noodzakelijk een test op te zetten om de voedingsrespons te meten. Hier beschrijven we een eenvoudige methode voor de kwantificering van de voedingsrespons waarbij de afstand tussen het apicale uiteinde van de tentakel en de mond van de hydra wordt gemeten en de verhouding van die afstand vóór en na de toevoeging van GSH wordt bepaald. De verhouding, de relatieve tentakelspreiding genaamd, bleek een maatstaf voor de voedingsrespons te geven. Deze test werd gevalideerd met behulp van een hongermodel waarin uitgehongerde hydra een verbeterde voedingsrespons vertonen in vergelijking met dagelijks gevoede hydra.

Inleiding

Hydra is het meest primitieve organisme dat een zenuwstelsel en chemosensatie bezit om gereduceerd glutathion (GSH) te detecteren voor het vangen van de prooi¹. Het voedt zich met een verscheidenheid aan dieren zoals nematoden, schaaldieren, insectenlarven, kikkervisjes en pas uitgekomen vissen¹. De beweging van deze prooidieren veroorzaakt een mechanosensorische ontlading van de prikblaasjes, genaamd nematocysten, uit de hydra, die in de prooi worden geïnjecteerd². GSH dat aanwezig is in de vloeistof die vrijkomt uit de gewonde prooi activeert vervolgens de voedingsreactie in de hydra, die het krullen van de tentakels om de prooi naar....

Protocol

1. Hydra Cultuur en waardering van de Feeding Response

1. Handhaaf hydra poliepen in kweek door ze dagelijks met artemia en bewaar ze in een medium (1 mM Tris-HCl buffer, pH 7,6, 1 mM NaCl, 1 mM _CaCl2, 0,1 mM KCl en 0,1 mM _MgSO4) in een glazen schaal bij 18 ° C onder 12 uur licht 12 uur donker cycli zoals eerder ¹² beschreven.
2. Voor het meten van de voedingsreactie transfer een volwassen hydra poliep met 5-6 tentakels een enkel putje van een 24-wells plaat. Verwijder de resten van het medium uit de put door het kantelen van het, en dan meteen voeg 500 ul van vers medium.
3. Bereid 9 uM glutathion oplossing in h....

Resultaten

Glutathion veroorzaakt hydra tot krullen van de tentakels vertonen op de bek ten behoeve van overspoelt de prooi. Dergelijke curling tentakels brengt apicale uiteinden van de tentakels dichter bij de hypostoom. Dit resulteert in afname van de tentakel spread of de lineaire afstand tussen apicale uiteinde van de tentakel en hypostoom (figuur 1). De relatieve tentakel spread of de verhouding van gemiddelde tentakel voor verspreiden en na het toevoegen van glutathion, gemiddeld over meerdere poliepen vermi.......

Discussie

Voedingsgedrag in hydra is een van de meest voorouderlijke chemosensory systemen in de Metazoa. Hoewel de aanwezigheid van GSH in de schaaldieren vloeistof vrijgelaten na-nematocyst bijgestaan ​​hun prooi vangen werd lang geleden ontdekt ^1, hebben noch de GSHR eiwit, noch de vermeende coderende gen / s gekarakteriseerd van hydra-to-date. Weinig pogingen gedaan om karakteriseren GSH bindingseiwitten hydra ^{8, 14, 15.} De identiteit van deze vermeende receptor eiwitten blijft onduidelijk en weinig ande.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Gekoelde Incubator	Panasonic	MIR-254-PE
Microscoop	Leica	S8AP0
Camera voor de microscoop	Leica	EC3
Gereduceerd glutathion	Sigma	G4251	Bewaar op 4 °C. Breng de fles naar kamertemperatuur voor het openen om oxidatie te voorkomen
Beeldbewerkingsprogramma	GIMP	Versie 2.8