Methodenartikel

In vitro functionele karakterisering van de Muis Colorectale Afferent Endings

DOI:

10.3791/52310

⸱

21 januari 2015

 , 
1Center for Pain Research, Department of Anesthesiology, University of Pittsburgh

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze video toont een protocol voor het uitvoeren van elektrofysiologische opnames van enkele vezels op een in vitro muis colorectum-zenuwpreparaat.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze video toont in detail een in vitro single-fiber elektrofysiologische opname protocol met behulp van een muis colorectum-zenuw voorbereiding. De aanpak maakt het mogelijk onpartijdige identificatie en functionele karakterisatie van individuele colorectale afferenten. Extracellulaire opnames van gekweekte actiepotentialen (AP's) die afkomstig zijn van één of enkele afferente (dwz één vezel) receptieve velden (RFs) in de dikke darm zijn gemaakt van geplaagd zenuwvezel bundels. De dikke darm is verwijderd met ofwel het bekken (PN) of lumbale splanchnisch (LSN) zenuw bevestigd en lengterichting geopend. Het weefsel wordt in een opname kamer, vastgemaakt vlak en geperfuseerd met geoxygeneerde Krebs oplossing. Focal elektrische stimulatie wordt gebruikt om de colorectale afferente uitgangen, die verder worden getest door drie verschillende mechanische stimuli lokaliseren (blunt sonderen, mucosale strelen en omtrek rek) functioneel categoriseren afferente in vijf mechanosensitieve klassen. Endings reageren op geen van deze mechanische stimuli zijn gecategoriseerd als mechanisch-ongevoelige afferentia (MIA). Zowel mechanosensitieve en MIA kan worden beoordeeld sensibilisatie (bijv verbeterde respons, verminderde drempel en / of verwerving van mechanische gevoeligheid) van plaatselijke blootstelling van RFs voor chemicaliën (bijvoorbeeld inflammatoire soep (IS), capsaïcine, adenosine trifosfaat (ATP)). We beschrijven de apparatuur en de dikke darm-zenuw opname voorbereiding, de oogst van colorectum met aangehechte PN of LSN, identificatie van RFs in de dikke darm, single-fiber opname van zenuw bundels, en gelokaliseerde toepassing van chemicaliën om de RF. Bovendien worden problemen van het preparaat en gestandaardiseerde mechanische stimulatie besproken.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pijn en overgevoeligheid zijn de belangrijkste klachten van patiënten met functionele gastro-intestinale aandoeningen, waaronder prikkelbare darmsyndroom (IBS), die bestaan ​​geen zichtbare pathobiological oorzaak of weefselschade. Bijvoorbeeld, IBS-patiënten vertonen overgevoeligheid, waaronder verhoogde respons op rectale ballondilatatie en verhoogde gevoeligheid tijdens normale darmfunctie, evenals overgevoeligheid somatische verwijzing (dwz tederheid palpatie van de buik) 1. Omdat targeting colorectale afferentia heeft bewezen effectief bij het ​​verlichten van pijn en overgevoeligheid bij IBS-patiënten (bijvoorbeeld intra-rectale instillatie van lokale anesthetica 2,3; orale inname van de guanylaatcyclase-C-agonist linaclotide 4-6) te zijn, een beter begrip van de afferente innervatie van de dikke darm is belangrijk.

Visceraal afferente zenuwbanen, met inbegrip van colorectale afferenten, Kunnen reageren op chemische / voedselrijke en thermische modaliteiten (bijvoorbeeld 7-9). Echter, visceraal afferente zenuwbanen reageren op mechanische stimuli (dwz mechanosensitieve afferentia) zijn de meest grondig bestudeerd omdat mechanische stimuli (bv luminaal buik, stretch) zijn degenen die in het algemeen leiden tot bewuste sensaties, met inbegrip van ongemak en pijn 10-16. Daarnaast worden de ingewanden ook geïnnerveerd door het mechanisch ongevoelig afferenten (MIA), algemeen bekend als stille of slapen nociceptoren 17. Onder normale fysiologische omstandigheden, hoeft MIA niet reageren op mechanische stimulatie of hebben een zeer hoge respons drempels 18, maar kan actief worden en het verwerven van mechanische gevoeligheid in pathofysiologische omstandigheden en bij te dragen tot overgevoeligheid.

Met behulp van de in vitro voorbereiding en de hier beschreven protocol, we ontwikkeld en gebruikt een elektrische prikkel strategie naar zee RCH voor receptieve eindes, waardoor onpartijdige identificatie van zowel mechanosensitieve en MIA eindes in de dikke darm 19. De colorectale innervatie is afgeleid van lumbale splanchnisch (LSN) en bekkenzenuwstimulatie (PN) paden, en omvat colorectale afferentia die kunnen worden onderverdeeld in vijf mechanosensitieve klassen (serosal, mucosale, gespierd, gespierde-mucosale, mesenteriale) en een MIA klasse 20. Gebruik van deze in vitro bereiding, vonden we dat colorectale MIA verkregen mechanische gevoeligheid (gevoelig) na korte blootstelling hun receptieve velden een inflammatoire soep (IS), die 71% van MIA in de PN route en 23% van MIA in het LSN route gesensibiliseerde 19. We hebben ook gedocumenteerd langdurige sensibilisatie (tot 28 dagen) van MIA in de context van langdurige gedrags- viscerale hypersensitiviteit (dwz bij muizen die intracolonische behandelingen met zymosan 21 of 2,4,6-trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS) 22) .

jove_content "> Onder mechanosensitieve afferenten, gespierd en gespierd-mucosale afferentia zijn de enige klassen die tonisch coderen omtrek stuk van de dikke darm (dat wil zeggen, zijn stretch-gevoelig) en bevordelijk de codering van schadelijke colorectale uitzetting 23,24. Met behulp van een computer-gestuurde krachtactuator, pasten wij een standaard, homogene en reproduceerbare opgevoerd rek in de omtreksrichting van de afgeplatte colorectaal weefsel en verder onderverdeeld stretch-gevoelige afferente een lage drempel en hoge drempel 23. Bovendien, het tijdsverloop van sensibilisatie van stretch -gevoelige afferentia na intracolonische zymosan 21 of 22 TNBS behandeling is het begin, persistentie en / of herstel van gedrags- viscerale hypersensitiviteit, suggereert een rol van stretch-gevoelige colorectale afferenten in viscerale pijn en overgevoeligheid.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

OPMERKING: Dit protocol werd beoordeeld en door de Universiteit van Pittsburgh Institutional Animal Care en gebruik goedgekeurd.

1. Voorbereiding van de Modified Krebs Solution en Test van de Drug Hoeveelheden

  1. Voeg 6 l gemodificeerde Krebs oplossing die bevat (in mM): NaCl 117,9, KCl 4,7, 25 NaHCO3 1.3 NaH 2PO 4, 1,2 MgSO4, 2,5 CaCl2, 11,1 D-glucose, 2 natrium butyraat, 20 natriumacetaat , 0,004 nifedipine (spontane spiersamentrekkingen te blokkeren), en 0,003 indomethacine (tot synthese van endogene prostaglandines te blokkeren). Gebruik ijskoud en warm Krebs oplossingen voor weefsel dissectie en single-fiber-opname, respectievelijk.
  2. Bereid elke chemische oplossingen (bv, IS, capsaïcine, ATP) in porties op de gewenste concentraties.

2. Dissectie van de dikke darm-zenuwweefsel

  1. Verdoven en euthanize mannelijke muizen (6-8 weken oud, 20 - 30 g) inCO 2 kamer bij een stroomsnelheid die 10 verplaatst - 30% van het kamervolume per minuut totdat muizen stoppen met ademen volledig zoals aangegeven door het ontbreken van beweging van de borstkas.
  2. Onmiddellijk na euthanasie, exsanguinate door opensnijden de thoracale kamer, perforeren het rechter atrium, en onderdompelen van de muis karkas in een ruime volume (-500 ml) ijskoude Krebs (4 ° C) oplossing geborreld met carbogeen (95% O 2 , 5% CO2).
  3. Verwijder voorzichtig alle ingewanden, maar de dikke darm en de bekkenorganen. Doorsnijden van de muis in de helft over de T12 spinale segment iets boven de thoracale middenrif en de overdracht van de caudale helft tot een dissectie kamer met ijskoud, geborreld Krebs oplossing.
  4. Onder een stereomicroscoop, verwijder de blaas en de voortplantingsorganen door doorsnijden op hun kruispunten om de plasbuis, en verwijder de afdalende / abdominale aorta totdat het splitst in bekkenslagaders. Bevrijd de PN of de LSN uit hun surrounding weefsels door stompe dissectie en volg de zenuwen van buiten het bekken tot de ventrale instappunt in de L6 en S1 wervelkolom (voor PN) of T13 en L1 wervelkolom (voor LSN).
  5. Snijd de symfyse en rechts en links acetabular gewrichten, en verwijder de iliacale bot. Zorgvuldig gratis ofwel de PN of LSN op de bijgevoegde spieren en bindweefsel van dicht bij de dikke darm tot waar de zenuw komt in de wervelkolom.
  6. Reseceren zorgvuldig de iliacale bot aan de distale colorectum bloot. Ontleden de distale dikke darm met de bijgevoegde PN of LSN in continuüm.
  7. Breng de dikke darm met de zenuw verbonden aan het bad compartiment van het weefsel kamer. Verwijder overmatig bindweefsel door verdere dissectie, en open de dikke darm lengterichting langs de anti-mesenteriale grens.
  8. Met mucosale zijde omhoog, speld de mesenteriale rand van de dikke darm grenzend aan de opname compartiment in de siliconen basis van de chamber en bevestig de antimesenteric lengte van de dikke darm een hark haken verbonden met een kracht actuator (in figuur 1 en gefotografeerd in figuur 2A).
  9. Verleng de PN of LSN in de opname compartiment dat is verbonden met het bad compartiment door een muizenhol en poort. Leg de zenuwbaan naar een klein glazen spiegel in de opname-compartiment, die een hydrofiel oppervlak voor het lef om zich te houden aan geeft. Superfuse het bad compartiment met warm (30-32 ° C), geoxygeneerde Krebs oplossing en vul de opname compartiment met minerale olie.

3. Single-fiber Opname en lokalisatie van de Receptief veld

  1. Schuif nu voorzichtig de epineurium (zenuwschede) uit de PN of LSN onder de stereomicroscoop bij een sterke vergroting (50 - 60X). Met behulp van fijne tang, plagen de zenuwbaan naar 5-8 zenuwbanen van ~ 100 micrometer dik.
  2. Plaats de platina-iridium verwijzingelektrode in contact met de Krebs oplossing in het weefsel kamer. Opeenvolgend plaats de afzonderlijke zenuwbanen naar de registratie-elektrode gemaakt van hetzelfde materiaal.
  3. Gebruik een zachte kwast om AP's uit de colorectale afferentia roepen door zachtjes strelen op en neer de colorectale oppervlak. Zoek de zenuw bundel (s) die de dikke darm innerveren door detecteerbare AP (actiepotentiaal) opnames.
    OPMERKING: De PN en LSN ook innerveren de urineblaas en andere organen in het bekken.
  4. Gebruik een paar van 30 G naald tips om verder te splitsen van de zenuwbaan in fijne fascicle filamenten van ~ 10 micrometer dikte en plaats een individueel filament op de registratie-elektrode.
  5. Plaats de round-tip concentrische elektrode loodrecht op het slijmvliesoppervlak elektrisch exciteren afferente uiteinden op suprathreshold stimulusintensiteit (10 mA magnitude 0,5 msec @ 0,3 Hz), die een mm radius van stroomspreiding ~ 2 produceert. Beweeg de elektrode systematisch (~ 1,5 mm stappen) Langs de lengte en breedte van de afgeplatte colorectum receptieve eindes lokaliseren.
  6. Wanneer een afferente einde is enthousiast, stel de elektrode positie naar de site van de activering (receptieve veld, RF) dat minimaal stimulusintensiteit (prikkeldrempel) vereist lokaliseren. Gooi eindes met een stimulus drempel> 3 mA 19.
  7. Bereken de geleidingssnelheid (CV) van 1) de afstand tussen de stimulerende elektrode in het receptieve veld (RF) en de opname onderzocht en 2) de geleidingsvertraging (bijvoorbeeld figuur 2B) tussen het stimulus artefact en het begin van de actiepotentiaal .
    CV (m / sec) = afstand (mm) / geleiding vertraging (msec).

4. Functionele indeling van mechanosensitieve Colorectale afferenten

  1. Na het lokaliseren van een RF door elektrische stimulatie, gelden de volgende drie mechanische stimuli aan de RF:
    1. Het gedrag van de indringende prikkel door op de punt van een Calibrated von Frey-achtige nylon monofilament (0,4 en 1 g kracht) loodrecht naar de RF op de afgeplatte colorectum.
    2. Het gedrag van de streelde stimulans door zachtjes strelen de colorectale slijmvlies met een fijne nylon filament streng (10 mg kracht) om een ​​klein oppervlak shear stress op de RF te genereren.
    3. Voer de omtreksrichting uitrekken met een computergestuurde krachtactuatorstelsel, waarbij een hellend stuk kracht levert (0-170 mN bij 5 mN / sec) in omtreksrichting langs de anti-mesenteriale rand van de dikke darm door de hark haken in stap 2.8 beschreven .
  2. Classificeren afferentia als serosal (alleen reageren op stomp indringende), mucosale (reageren op mucosale strelen en stomp indringende), gespierd (reageren op de omtrek stretch en stomp indringende) gespierd / mucosale (reageren op de omtrek stretch, mucosale strelen en stomp indringende), of MIA (niet reageert op elk van de drie mechanische stimuli).
  3. Voor mesenteriale afferentia (alleen inLSN innervatie) die moeilijk om selectief geactiveerd door elektrische stimulatie, vinden hun open einde mechanisch strelen / sonderen van het mesenterium.
  4. Voor stretch-gevoelige afferenten (spier en spier-mucosale genoemd) de drempelwaarde, die wordt gedefinieerd als de kracht die de eerste AP oproept in oplopende rek.
  5. Voor serosal afferenten, registreren hun reacties op oplopende niveaus van punctata sonderen van het receptieve veld aangedreven door de computergestuurde krachtactuator.

5. Chemische Toepassing / Modulatie van receptieve Endings

  1. Het opnemen van een basislijn reactie op een mechanische stimulus (dwz, als reactie op oplopende stretch, punctate sonderen, of mucosale strelen).
  2. De vacht van de onderste rand van een stuk slang (messing of roestvrij staal, 10 mm hoog en 4 x 4 mm 2 vierkante of 4 - 5 mm diameter) met vaseline en plaats deze op de receptieve veld op de dikke darm.
  3. Verwijderende Krebs oplossing in de buis en het blootstellen ontvankelijk uitgang 3 - 5 min naar 170 pl van de oplossing die de te testen chemische stof (fen).
  4. Bewaken van de respons van de afferente tijdens chemische toepassing (sommige afferentia zijn chemotherapie gevoelig).
  5. Verwijder de chemische oplossing en slang aan de werking van de chemische beëindigen. Binnen 4-6 minuten, test de afferente reactie op dezelfde mechanische stimulus in de basislijnreactie.
  6. Opnieuw de mechanische stimulus opnieuw na voldoende lange wash-out (> 15 min).

6. Opnemen en Discriminerende AP spikes

  1. Digitaliseren van de elektrische signalen opgenomen van axonen bij 20 kHz en de gegevens opslaan op een computer. Bekijk het signaal on-line door een audio-monitor.
  2. Analyseer de AP spikes off-line en discrimineren afzonderlijke eenheden op basis van hoofdsom analyse van individuele spike golfvormen 25 component.
    OPMERKING: Een plaat mag niet meer th bevatteneen twee gemakkelijk onderscheidbare actieve eenheden.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De opstelling wordt in figuur 1. Het omvat een op maat gemaakte weefsel kamer die de dikke darm in een siliconen beklede bad compartiment en de bijgevoegde zenuw in een aangrenzende minerale olie gevulde compartiment herbergt. De twee compartimenten kamer werd gefreesd uit een massief blok van acrylaat met een CNC machine; de onderkant van beide compartimenten werd vervolgens bekleed met stevige siliconen om eenvoudig pin naar beneden van het colorectaal weefsel mogelijk te maken. Extracellulaire AP'...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De in vitro colorectum zenuw bereiding beschreven blijkt een krachtige aanpak om neurale codering functies van individuele colorectale afferenten, die mooi aanvulling andere niet-functionele benaderingen (bijvoorbeeld cellulaire, moleculaire en histologische studies) op viscerale sensorische neuronen (bestuderen zie beoordeling 27 voor details). Neuronale mechanismen die bijdragen aan nociceptie en langdurige colorectale overgevoeligheid zijn geopenbaard en farmacologische manipulaties zijn ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ondersteund door NIH-subsidie R01 DK093525 (GFG). We waarderen de wetenschappelijke beoordeling en grammaticale bewerking van het manuscript door Dr. Amber Shaffer (University of Pittsburgh) zeer en danken Michael Burcham voor de hulp bij het voorbereiden van de figuren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Leica MZ16 stereomicroscoopLeica Microsystems Inc.
Leica IC D cameraLeica Microsystems Inc.
VersterkerWorld Precision instruments, Inc.SYS-DAM80Low-noise differentiële versterker
Weefselkamer met twee compartimentenOp maat gemaakt
Power1401Cambridge Electronic Design LimitedPower1401Data-acquisitie, analoog signaal invoer/uitvoer
Spike2 v5.02Cambridge Electronic Design LimitedSoftwarepakket dat werkt met de Power1401
Audio monitorNatusAm 8
Vierkante pulsstimulatorNatusS48Voor het afgeven van elektrische stimuli
Foto-elektrische isolatie-eenheidNatusPSIU6Stimulusisolatie om ruis te verminderen
Concentrische bipolaire micro-elektrodeFHC Inc.CBFFG75Voor het afgeven van elektrische stimuli
Dual-mode hefboomsysteemAurora Scientific Inc.Serie 300CVoor het afgeven van mechanische stimuli
PincetFine Science Tools11252-00Pincet met fijne uiteinden

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Naliboff, B. D., et al. Evidence for two distinct perceptual alterations in irritable bowel syndrome. Gut. 41, 505-512 (1997).
  2. Verne, G. N., Robinson, M. E., Vase, L., Price, D. D. Reversal of visceral and cutaneous hyperalgesia by local rectal anesthesia in irritable bowel syndrome (IBS) patients. Pain. 105, 223-230 (2003).
  3. Verne, G. N., Sen, A., Price, D. D. Intrarectal lidocaine is an effective treatment for abdominal pain associated with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome. Journal of Pain. 6, 493-496 (2005).
  4. Chey, W. D., et al. Linaclotide for irritable bowel syndrome with constipation: a 26-week, randomized, double-blind, placebo-controlled trial to evaluate efficacy and safety. Am J Gastroenterol. 107, 1702-1712 (2012).
  5. Rao, S., et al. A 12-week, randomized, controlled trial with a 4-week randomized withdrawal period to evaluate the efficacy and safety of linaclotide in irritable bowel syndrome with constipation. Am J Gastroenterol. 107, 1714-1724 (2012).
  6. Busby, R. W., et al. Pharmacologic properties, metabolism, and disposition of linaclotide, a novel therapeutic peptide approved for the treatment of irritable bowel syndrome with constipation and chronic idiopathic constipation. J Pharmacol Exp Ther. 344, 196-206 (2013).
  7. Mei, N. Intestinal chemosensitivity. Physiol Rev. 65, 211-237 (1985).
  8. Mei, N., Lucchini, S. Current data and ideas on digestive sensitivity. J Auton Nerv Syst. 41, 15-18 (1992).
  9. Su, X., Gebhart, G. F. Mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat are polymodal in character. J Neurophysiol. 80, 2632-2644 (1998).
  10. McMahon, S. B., Morrison, J. F. Spinal neurones with long projections activated from the abdominal viscera of the cat. J Physiol. 322, 1-20 (1982).
  11. Cervero, F., Sann, H. Mechanically evoked responses of afferent fibres innervating the guinea-pig's ureter: an in vitro study. J Physiol. 412, 245-266 (1989).
  12. Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. Mechanosensitive properties of pelvic nerve afferent fibers innervating the urinary bladder of the rat. J Neurophysiol. 72, 2420-2430 (1994).
  13. Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. Characterization of mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat. J Neurophysiol. 71, 2046-2060 (1994).
  14. Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. Activation of unmyelinated afferent fibres by mechanical stimuli and inflammation of the urinary bladder in the cat. J Physiol. 425, 545-562 (1990).
  15. Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. A novel type of unmyelinated chemosensitive nociceptor in the acutely inflamed urinary bladder. Agents Actions. 25, 219-221 (1988).
  16. Brierley, S. M., Jones, R. C. 3rd, Gebhart, G. F., Blackshaw, L. A. Splanchnic and pelvic mechanosensory afferents signal different qualities of colonic stimuli in mice. Gastroenterology. 127, 166-178 (2004).
  17. Meyer, R. A., Davis, K. D., Cohen, R. H., Treede, R. D., Campbell, J. N. Mechanically insensitive afferents (MIAs) in cutaneous nerves of monkey. Brain Res. 561, 252-261 (1991).
  18. Handwerker, H. O., Kilo, S., Reeh, P. W. Unresponsive afferent nerve fibres in the sural nerve of the rat. J Physiol. 435, 229-242 (1991).
  19. Feng, B., Gebhart, G. F. Characterization of silent afferents in the pelvic and splanchnic innervations of the mouse colorectum. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G170-G180 (2011).
  20. Feng, B., La, J. H., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. Irritable bowel syndrome: methods, mechanisms, and pathophysiology. Neural and neuro-immune mechanisms of visceral hypersensitivity in irritable bowel syndrome. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G1085-G1098 (2012).
  21. Feng, B., et al. Long-term sensitization of mechanosensitive and -insensitive afferents in mice with persistent colorectal hypersensitivity. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G676-G683 (2012).
  22. Feng, B., et al. Altered colorectal afferent function associated with TNBS-induced visceral hypersensitivity in mice. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G817-G824 (2012).
  23. Feng, B., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. Differential roles of stretch-sensitive pelvic nerve afferents innervating mouse distal colon and rectum. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 298, G402-G409 (2010).
  24. Feng, B., et al. Activation of guanylate cyclase-C attenuates stretch responses and sensitization of mouse colorectal afferents. J Neurosci. 33, 9831-9839 (2013).
  25. Jolliffe, I. T. Principal component analysis. , 2nd, Springer. New York, NY. (2002).
  26. La, J. H., Feng, B., Schwartz, E. S., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. Luminal hypertonicity and acidity modulate colorectal afferents and induce persistent visceral hypersensitivity. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G802-G809 (2012).
  27. Christianson, J. A., et al. plasticity and modulation of visceral afferents. Brain Research Reviews. 60, 171-186 (2009).
  28. Kiyatkin, M. E., Feng, B., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. Combined genetic and pharmacological inhibition of TRPV1 and P2X3 attenuates colorectal hypersensitivity and afferent sensitization. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 305, G638-G648 (2013).
  29. Brumovsky, P. R., Feng, B., Xu, L., McCarthy, C. J., Gebhart, G. F. Cystitis increases colorectal afferent sensitivity in the mouse. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 297, G1250-G1258 (2009).
  30. Shinoda, M., Feng, B., Gebhart, G. F. Peripheral and central P2X receptor contributions to colon mechanosensitivity and hypersensitivity in the mouse. Gastroenterology. 137, 2096-2104 (2009).
  31. Tanaka, T., Shinoda, M., Feng, B., Albers, K. M., Gebhart, G. F. Modulation of visceral hypersensitivity by glial cell line-derived neurotrophic factor family receptor α-3 in colorectal afferents. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G418-G424 (2011).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Elektrofysiologie van individuele vezelsmechanische stimulatietestsbeoordeling van chemische sensitiviteitidentificatie van het receptieve velddissectie van zenuwvezelsperfusie met Krebs oplossingregistratie van actiepotentialenmechanosensitieve classificatieapplicatie van inflammatoire soep

Gerelateerde artikelen