Evaluatie van de zebravis Kidney Functie Met behulp van een TL-Ontruiming Assay

Summary

De zebravis is een populaire tool voor het modelleren chronische nierziekte (CKD). Echter, hun kleine formaat maakt het onmogelijk om de nierfunctie te evalueren met behulp van traditionele methoden. We beschrijven een fluorescerende kleurstof nier speling assay ¹ dat kwantitatieve analyse van de zebravis nierfunctie bij CKD maakt.

Abstract

De zebravis embryo biedt een soepel model in organogenese bestuderen en modelleren van de menselijke genetische ziekte. Ondanks zijn relatieve eenvoud, de zebravis nier ontwikkelt en functioneert nagenoeg dezelfde wijze als mensen. Een belangrijk verschil in de constructie van de menselijke nier is de aanwezigheid van miljoenen nefronen opzichte van de zebravis dat slechts twee heeft. Echter, het vereenvoudigen van een dergelijk complex systeem in de elementaire functionele eenheden heeft ons begrip van hoe de nier ontwikkelt en exploiteert geholpen. In de zebravis, de middellijn gelegen glomerulus is verantwoordelijk voor de initiële bloedfiltratie in twee pronephric tubuli die afwijken bilateraal run down de embryonale as vóór het fuseren met elkaar op de cloaca. De pronephric tubuli zijn sterk bevolkt door bewegende cilia dat de beweging van filtraat vergemakkelijken langs de gesegmenteerde tubulus, waardoor de uitwisseling van verschillende opgeloste stoffen voordat ze uiteindelijk verlaten via de cloaca ^2-4. Vele genen die verantwoordelijk zijn voor CKD, incLuding die verband houden ciliogenese, zijn onderzocht in zebravis ^5. Echter, een belangrijk nadeel moeilijk in cijfers zebravis nierfunctie na genetische manipulatie is. Traditionele assays tot nierstoornissen meten bij mensen niet translationeel te zebravis hebben bewezen, met name als gevolg van hun aquatisch milieu en kleine omvang. Zo is het fysiek onmogelijk om bloed onttrekken embryonale opgevoerd vis voor analyse van ureum en creatinine gehalte, omdat ze te klein. Bovendien sluiten zebravis genoeg produceren urine te testen op een eenvoudige proteïnurie "dipstick", die vaak wordt uitgevoerd tijdens de eerste patiënt onderzoeken. We beschrijven een fluorescentie dat de optische transparantie van de zebravis gebruikt om kwantitatief monitoren de goedkeuring van een fluorescente kleurstof, in de tijd, van de vasculatuur en via de nieren, een read geven nierfunctie ^1,6-9.

Introduction

De menselijke nier speelt een cruciale rol in het filteren van metabole afvalstoffen uit het bloed en herstellende nodig opgeloste stoffen om cellulaire homeostase in stand te houden. Er zijn verschillende humane genetische ziekten die nierstoornissen veroorzaken. De meest voorkomende erfelijke nierziekte autosomaal dominante polycystische nierziekte (ADPKD) gekenmerkt door de ontwikkeling van vloeistof gevulde blaasjes in pochechnykh tubuli; schade door cystogenesis schaadt nierfunctie ^10. ADPKD heeft een voorkomen van 1: 800-1: 1000 en vertegenwoordigt 8-10% van de patiënten in het eindstadium nierfalen (ESRF) ^11. Verschillende genen zijn betr....

Protocol

Ethiek Verklaring: Animal onderhoud, houderij en procedures worden vastgelegd en gecontroleerd door de Dieren (wetenschappelijke procedures) Act 1986. Alle dierproeven is op grond van certificaten door de minister van Binnenlandse Zaken (PIL No. 70/7892) verleende vergunning in overeenstemming met de biologische uitgevoerd Services Management Group en het Ethisch Comité Biological Services, SGUL, Londen, UK. Alle inspanningen werden gedaan om het aantal gebruikte dieren te verminderen en om beide procedures en veeteelt te verfijnen om het lijden welzijn te minimaliseren en te verbeteren.

1. Voorbereiding van de instrumenten, verdoving, en f....

Results

Bardet-Biedl syndroom (BBS) is een zeldzame heterogene ciliopathie dat ongeveer 1 beïnvloedt: 160.000 mensen wereldwijd ^16. Patiënten presenteren zich met een aantal bijbehorende problemen, waaronder polycystische nieren, vervolgens patiënten vaak nodig nierdialyse of transplantatie ^24. ESRF is de meest voorkomende doodsoorzaak bij BBS, met ongeveer 30% van de patiënten ontwikkelen van CKD ^16. Momenteel zijn 20 niet-verwante genen geïmpliceerd in BBS zonder gepubliceerde genotype-fenotyp.......

Discussion

Zebravis een kwaliteit in de modellering van menselijke genetische ziekten, hun gebruik als een wetenschappelijk instrument voor in vivo onderzoek gedetailleerde studies van de genetische analyse van vele biologische systemen, waaronder de nieren ingeschakeld. Veel wordt nu begrepen over hoe de zebravis nier ontwikkelt en functies. De opvallende gelijkenissen voor de menselijke nefrogenese en homologie met ziektegenen ²¹ is duidelijk geworden dat de zebravis zijn fundamentele geworden in het begrijpe.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
P-97 SUTTER Flaming/Brown type micropipette puller	Intracel	P-97
borosilicate standard wall capillaries	Harvard Apparatus	30-0017
Glass microscope slides	VWR International	631-0109
Epoxy Resin Glue	Evo-Stik
Rhodamine B 10,000 MW labeled Dextran	Life technologies	D-1824
N-Phenylthiourea	Sigma-Aldrich	P7629
Methylene blue	Sigma-Aldrich	M9140
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt	Sigma-Aldrich	A5040
methylcellulose	Sigma-Aldrich	M0512
air compressor	Jun-Air	OF302-15
Picospritzer III	Parker Instruments	051-0500-900
compact 3-axis control micromanipulator	Marzhauser	MM33
Dissecting stereo microscope	Nikon	SMZ1000
microloader tips	Eppendorf	5242956003
Dumont #5 forceps	Sigma-Aldrich	F6521
stage micrometer	Pyser- SGI	02A00404