Circulerende tumorcellen (CTC's) hebben aangetoond een belangrijke rol te spelen bij tumormetastase. Hier wordt een methode beschreven voor het isoleren en vermenigvuldigen van CTC's uit het volledige bloed van een syngene model van muistumoren met leverkanker (HCC) metastase.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Isolatie en Voortplanting van circulerende tumorcellen uit een muis Cancer
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Kankermetastase is de belangrijkste oorzaak van sterfgevallen geassocieerd met kanker. Recente studies hebben aangetoond dat circulerende tumorcellen (CTC's) belangrijk zijn voor kankermetastase. Inderdaad, het aantal CTC's correleert met de tumorgrootte. Hier wordt een gedetailleerde beschrijving gegeven van een methodologie voor het isoleren en vermeerderen van CTC's uit een syngeneïsch muismodel van hepatocellulair carcinoom (HCC) die downstream-analyse van potentieel belangrijke moleculaire mechanismen van solide orgaantumormetastase mogelijk maakt. Deze methode is efficiënt en reproduceerbaar. Het is een niet-invasieve techniek en heeft daarom het potentieel om de invasieve biopsie van weefsels van mensen te vervangen, wat geassocieerd kan zijn met complicaties. Daarom staat de hier besproken methode de isolatie en vermeerdering van CTC's uit volbloedmonsters toe, zodat ze kunnen worden onderzocht en gekarakteriseerd. Dit heeft potentieel voor toekomstige aanpassing voor klinische toepassingen zoals diagnose en gepersonaliseerde gerichte therapie.
Inleiding
De kankeronderzoeksgemeenschap is al bekend met het bestaan van circulerende tumorcellen (CTC's) sinds ze voor het eerst werden waargenomen door Thomas Ashworth in 18691. Sindsdien is aangetoond dat CTC's belangrijk zijn voor tumormetastase en ziekteprogressie2-5. Tegenwoordig zijn solide tumoren een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit wereldwijd. CTC's zijn zeldzame cellen die afkomstig zijn van primaire tumoren en door de bloedbaan naar verschillende organen reizen, waarvan slechts een klein deel uiteindelijk uitgroeit tot metastasen2-5. Opmerkelijk is dat er een positieve correlatie bestaat tussen tumorgrootte en het ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Ethiek Verklaring: Alle dierproeven werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) van Hunter College van de City University van New York.
1. Pre-experiment Procedures
- Bij aankomst in het dierverblijf aanvankelijk huis 3 BALB / c muizen een kooi met een gefilterde top en houtsnippers beddengoed. Zorg ervoor dat de muizen hebben gratis toegang tot voedsel, Purina knaagdieren voer en water. Beddengoed en voedsel moet tweemaal per week worden gewijzigd terwijl kooien keer per week worden schoongemaakt.
- Induceren algemene anesthesie bij muizen met behulp van een isofluraan vaporizer samen m....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De hier beschreven methode heeft aangetoond dat CTCs worden geïsoleerd. Muizen werden op humane wijze gedood bij experimentele eindpunt. Het proces betrokken kooldioxide stikken, intra-cardiale leegbloeden en cervicale dislocatie. Een schema van de belangrijkste stappen van de procedure zijn weergegeven in figuur 2. Volbloedmonsters door intra-cardiale leegbloeden verzameld werden verwerkt volgens de hierboven beschreven protocol. Daarna werd centrifugeren toegepast om de buffy coat laag die werd onderw.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In deze studie is beschreven hoe CTC's geïsoleerd en gepropageerd kunnen worden uit het gehele bloed van een syngene muis met HCC. Het doel van dit werk is om de lopende studies naar de mechanismen van kankermetastase te verbeteren.
Een factor die bijdraagt aan de slechte prognose van veel kankers is het ontbreken van tijdige detectie en de daaruit voortvloeiende wijdverspreide verspreiding van de maligniteit3. CTC's komen voort uit primaire kankers en verspreiden zich via de bloedb.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.
Dankbetuigingen
Het werk in het laboratorium van Dr. Ogunwobi wordt ondersteund door een Research Centers in Minority Institutions Program-subsidie van het National Institute on Minority Health and Health Disparities (MD007599) van de National Institutes of Health. De inhoud van dit manuscript valt uitsluitend onder de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijk de officiële opvattingen van de NIMHD of de NIH.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Heparin Sodium Salt 1 g | VWR | 89508-852 | |
| BTX Tube Micro 1.5 ml Clear NS | VWR | 89511-254 | 1.5 ml pyrogen-vrije eppendorf buizen |
| Needle Sterile Disp BD 25 G x 1 in | VWR | BD305125 | 25 G naald |
| Slp Tip SRNG 1 ml 200 each per pack | VWR | BD309659 | 1 ml spuittip |
| Syringe 1 ml leur lok Pk 100 | VWR | BD309628 | 1 ml spuit |
| VWR Forceps Tissue 6 | VWR | 82027-446 | Forceps |
| Cyromold intrm 15 x 15 x 5 mm PK 100 | VWR | 25608-924 | Cyromold |
| Cryo-oct compund 4 oz | VWR | 25608-930 | Oct compound |
| VWR Slide sprfrst 25 x 75 mm PK72 | VWR | 48311-703 | Glijbanen |
| VWR Cover Glass #2 22 x 50 mm | VWR | 48-382-128 | Dekglas |
| VWR Slide Box True North Fm Pu | VWR | 89140-278 | Glijbanenbox |
| Super HT PAP Pen | VWR | 89427-058 | PAP pen |
| Water RNASe and DNAse free 2 L | VWR | 101454-204 | Nuclease Vrij Water |
| Buffer Tris Ultra Pure Grade 500 g | VWR | 97061-796 | Tris Buffer |
| Ammonium Chloride ACS Grade 2, 5 Kg | VWR | 97062-048 | Ammonium Chloride Buffer |
| Falcon Tissue Culture Dish 60 x 15 mm Style polystyrene | VWR | 353002 | Weefselkwekerij Schaal |
| Clorox Germicidal Bleach, Regular | VWR | 89501-620 | Clorox Bleekmiddel |
| PBS, 1x (Phosphate-Buffered Saline) without calcium & magnesium (500 ml) | Thermo Fischer Scientific | 21-040-CV | PBS, 1x |
| DMEM, 1x with 4.5 g/L glucose & L-glutamine without sodium pyruvate | Thermo Fischer Scientific | 10-017-CV | DMEM 1x media voor BNL 1ME A.7R.1 cellen |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fischer Scientific | 35-010-CV | FBS |
| Penicillin Streptomycin Solution, 100x | Thermo Fischer Scientific | 30-002-Cl | Penicilline Streptomycine |
| Sorvall Biofuge pico | Thermo Fischer Scientific | 75002411 | 13.000 rpm Centrifuge |
Referenties
- Ashworth, T. R. A case of cancer in which cells similar to those in the tumors were seen in the blood after death. Australian Medical Journal. 1869, 146-147 (14).
- van de Stolpe, A., den Toonder, J. Circulating Tumor Cells: W....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
