Spot de juiste Tissue Every Time in Multi-weefsel Blocks

Summary

Het doel van het Specimen Orientation Tag (spot) is gefunctioneerd als leidraad ter te helpen bij individuele identificatie weefsel in meerdere weefsels paraffineblokken. Deze protocollen laten zien hoe dit is opgebouwd uit zachte, low-cost histologie materiaal en dient als een betrouwbare visuele marker in paraffineblokken en secties.

Abstract

Multi-tissue paraffineblokken een hoge doorvoer analyse van doelmatigheid experimentele uniformiteit en verminderde tijd en kosten. Weefsel microarrays vormen de meerderheid van de multi-weefsel paraffine blokken, maar in toenemende mate, zijn de onderzoekers met behulp van niet-array blokken met grotere weefsels uit meerdere personen, die veel van de voordelen van het weefsel microarrays kan verschaffen zonder aanzienlijke investeringen in de planning en uitrusting. Een essentieel onderdeel van een multi-weefsel analyse is de oriëntatie methode voor elke afzonderlijke weefsel identificeren. Hoewel methoden bestaan ​​om de juiste oriëntatie en het identificeren van weefsels in multi-weefselblokken handhaven meeste zijn niet goed geschikt voor niet-array blokken, kan waardevolle ruimte consumeren in een matrix en / of moeilijk te produceren in de standaard histologische laboratoria. Het Specimen Orientation Tag (spot) is een eenvoudige, goedkope oriëntatie instrument dat is duidelijk zichtbaar in paraffine blokken en alle weefselcoupes for betrouwbaar specimen identificatie in arrayed en non-array layouts. De spot verschaft voordelen boven bestaande oriëntatiemethoden voor niet array blokken als er geen directe wijziging van het weefsel vereisen en maakt flexibiliteit in de regeling van stukken weefsel.

Introduction

De mogelijkheid om weefselmonsters van verschillende individuen te bedden in een paraffineblok het eenvoudig side-by-side vergelijking tussen behandelingen en individuen, elimineert variabiliteit tussen dia en vermindert de kosten en de werkbelasting van snijden en vlekken specimens. Deze multi-weefselblokken worden typisch bereid als hetzij tissue microarray (TMA) of paraffineblokken die weefsel van meerdere personen in een niet array layout. Onderhoud monster identiteit is cruciaal voor het succes van een multi-weefselanalyse. De onderzoekers zijn met behulp van TMA's, omdat hun ontwikkeling om de efficiëntie van de analyse te verbeteren, variatie te vermindere....

Protocol

1. De bouw van The Spot

1. Voeg 50 mg van runderserumalbumine (BSA) tot 1 ml weefsel markeerinrichting kleurstof in een 15 ml conische buis of 2 ml microcentrifugebuis en vortex gedurende 1 minuut of totdat het volledig opgelost.
   Opmerking: Voor dit protocol, gebruiken biochemische Grade BSA. Terwijl andere kwaliteiten en zuiverheid zijn niet getest, wordt verwacht dat de kwaliteit en zuiverheid van een significante invloed op het succes van de locatie, niet zou hebben.
2. Verwarm 9 ml hydroxyethyl agarose gel verwerking in een 15 ml conische buis in een magnetron bij 30% vermogen gedurende 10 seconden stappen totdat de gel volledig gesmolten. <....

Results

De plek verschijnt als een ronde, helder gekleurde stip in het paraffine blok (figuur 1A en 2D), in alle paraffine secties, en blijft op het glaasje door de H & E en IHC kleuring procedure (figuren 1B - 1D en 2D). Deze duidelijke visuele hint hulpmiddelen zowel histotechnician en onderzoeker om elke afzonderlijke stuk weefsel en vergemakkelijkt de communicatie histotechnician kan deze visueel waarschuwingssignaal de opstelling van d.......

Discussion

Succesvolle voorbereiding en het gebruik van de vlekken vereist een zorgvuldige naleving van enkele technische stappen. Het smelten van de hydroxyethyl agarose moet langzaam en op een laag vuur worden gedaan. Snel smelten bij hoge temperatuur kan leiden tot enige afbraak van de agarose minder dan optimale resultaten. Bij het snijden van de kleurstof beladen pluggen in stukken verwerkt, opdat de dikte van elk stuk groter is dan 4,5 mm en niet meer dan 7 mm. De afgeronde einden verwijderd als afval zij niet uniform 5 mm d.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Histogel Specimen Processing Gel	Thermo Scientific	HG-4000-012	http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html
Tissue Marking Dye	Triangle Biomedical Sciences, Inc.	TMD-5	Any tissue marking dye would most likely be sufficient.
Arraymold Kit A 2 mm (60 core)	Arraymold	20015A	Any manual tissue arrayer would work similarly.