1. Groei systeem

Figuur 1. Microalgen groei systeem. (A) lucht rotometer, (B) CO 2 rotometer, (C) pH controller met elektromagnetische, (D) datalogger, (E) in-line luchtfilters, (F) luchtverdeling header, (G) TL-licht bank, (H) pH meter, (I) koelsysteem, (J) waterbad, (K) thermokoppeldraad, (L) lucht lift fotobioreactor, (M) verwarming, (N) walk-in fume afzuigkap, (O) vent, (P) lucht levering capillair, (Q) luchtfilters, (R) bemonstering buis, (S) PBR siliconen deksel, en (T)pH goed in siliconen deksel. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
- Bouw de volgende microalg experimentele groei (zie figuur 1).
- Verwerven twaalf luchtbrug PBRS uit glas buisreactoren 4,5 cm in diameter en 80 cm hoog met een kweek capaciteit van 1,1 l met silicone deksels. Acquire pre-cut glazen capillaire buizen (5 mm uitwendige diameter en 1 mm inwendige diameter) van 10 cm (3 per PBR) en 85 cm (1 per PBR) in lengte.
- Freeze silicone deksels in een -80 ° C vriezer. Smeer een boor met glycerol en terwijl deksels zijn bevroren boor 3 gaten om de vent, bemonstering en levering van gas capillaire buizen hosten en 1 gat van 17 mm diameter tot een pH-sonde hosten.
- Plaats de 3 capillaire buisjes vast met de langste zich uitstrekt 2 cm vanaf de bodem van de PBR. In de andere capillair voeg een siliconenslang with een capillaire buis verbonden met het andere einde zich uitstrekt tot een gewenst bemonsteringspunt. Bedek het gat voor de pH-meter met een silicone stopper grootte 21D.
- Bevochtigen omgevingslucht door borrelen het door het water en het leveren van de bevochtigde lucht op de luchtverdeling header. Ga het gas door een 0,2 um filter en leveren het aan de algen suspensie door de langste glazen levering capillair.
- Lever samengeperst CO 2 in de bevochtigde luchtstroom teneinde een neutrale pH van 7,0 ± 0,1 in de kweek suspensie te houden. Controle van de snelheid van de CO 2 levering met een geautomatiseerde CO 2 apotheek systeem (pH-controller), dat een magnetische solenoïde opent wanneer de algen cultuur bereikt pH 7,1 en sluit bij pH 6,9.
- Zorg voor licht met behulp van 24 T5 tl-lampen die resulteren in een gemiddelde verlichting van 984 umol m -2 sec -1 vergelijkbaar buitenomstandigheden piek.
- Dompel de PBRS in een waterbad om maintain een constante temperatuur van ongeveer 25 ° C. Controle van de temperatuur van het systeem met behulp van een recirculatie koelmachine en een automatische verwarming recirculerend waterbad unit controle.
- Monitor temperatuur en de pH in real-time en op te nemen met een datalogger.
- Zorg ervoor dat alle onderdelen van de microalgen groei systeem goed werkt, vooral voor de oogst microalgen entstof of het voorbereiden van anorganische verontreinigingen omdat ze niet kunnen worden bewaard.
2. Lab Ware Voorbereiding
- Was maatkolven, PBRS, mandeflessen en alle containers, met kraanwater en zeep. Spoelen met gedemineraliseerd water (DW).
- Acid spoel het lab ware teneinde sporen van anorganische verontreinigingen te verwijderen. Dit kan door een van twee manieren:
- Geniet lab ware O / N in 10% trace metalen graad salpeterzuur (LET OP: niet inademen rook, geconcentreerd salpeterzuur kan ernstige branden en giftige dampen, werk produceren in een damp hood gebruiken nitril handschoenen, veiligheidsbril en laboratoriumjas).
- Geniet lab ware gedurende 15 minuten in 50% trace metalen graad salpeterzuur.
- Spoel het lab ware met DW grondig minstens 3 keer om ervoor te zorgen alle zuur wordt verwijderd. Het is essentieel dat PBRS grondig gespoeld met name de monsterbuizen en de capillaire buisjes. Doet u dit niet zal verzuring van het medium en de mogelijke remming van de groei te produceren. Test de pH van het spoelwater om alle zure verifiëren is verwijderd.
- Steriliseer PBRS, containers en flessen door ze te autoclaveren bij 120 ° C en bij normale atmosferische druk gedurende ten minste 30 min.
3. N. salina Medium Voorbereiding
- Voorbereiding van de oplossing A: Gedeeltelijk Vul een 1 liter maatkolf met DW. Plaats een magnetische roerstaaf en voeg de in tabel 1 na elkaar chemicaliën. Zorg ervoor dat elk ingrediënt oplost vóór de toevoeging van de volgende bestanddelen. Verwijder de magneet en vul the kolf met het 1 L volume merk.
| Bestanddeel | Bedrag toe te voegen (g) | Uiteindelijke concentratie (g / l) |
| H 3 BO 3 | 0.900 | 0.900 |
| Na 2 MoO 4 · 2H 2 O | 0,012 | 0,012 |
| MnCl2 · 4H 2 O | 0.300 | 0.300 |
| ZnSO 4 · 7H 2 O | 0,060 | 0,060 |
| CuSO4 · 5H 2 O | 0,020 | 0,020 |
Tabel 1:. Oplossing Een recept Hoeveelheden bedragen nodig bij de bereiding van 1 liter geconcentreerde oplossing.
- Voorbereiding van de vitamine oplossing: In drie afzonderlijke volumetric kolven voeg vitaminen zoals weergegeven in tabel 2. Filtreer elke vitamine oplossing door een steriel 0,2 urn spuitfilter een steriele houder. Behoud vitaminen bij -4 ° C in het donker.
| Vitaminen | Bedrag (mg) | Final volume (ml) | Uiteindelijke vitamine-concentratie (mg / l) |
| Biotine | 12.22 | 500 | 24.43 |
| Vitamine B12 | 13.50 | 100 | 135.00 |
| Thiaminechloorhydraat | 977,63 | 500 | 1,955.27 |
Tabel 2:. Vitamine oplossing recept De hoeveelheden zijn hoeveelheden die nodig zijn voor de bereiding van geconcentreerde oplos-tie.
- 20 L autoclaveerbare container met DW gedeeltelijk te vullen en plaats een magnetische roerstaaf. Plaats de container op een magnetische roerder plaat en voeg de in tabel 3 (behalve de vitamines) chemie, toevoegen ze achter elkaar en na elke volledig oplost. Vul de container tot 20 L. bereiken
| Bestanddeel | Bedrag toe te voegen aan medium | Eenheid |
| NaCl | 350.00 | g |
| CaCl 2 · 2H 2 O | 3.00 | g |
| KCl | 9.60 | g |
| Na 2 SiO 3 · 9H 2 O | 1.14 | g |
| MgSO4 · 7H 2 O | 29.60 | g |
| KNO 3 | 20.40 | g |
| KH 2 PO 4 | 1.36 | g |
| Ammonium ferricitraat | 0.10 | g |
| Oplossing A | 20.00 | ml |
| Biotine-oplossing * | 818,00 | pi |
| Vitamine B12 oplossing * | 296,20 | pi |
| Thiaminechloorhydraat oplossing * | 521,60 | pi |
| * Toevoegen aan gekoelde autoclaaf media | | |
Tabel 3: N. salina medium recept. De hoeveelheden zijn bedragen die nodig zijn in de voorbereiding van de 20 L van voedselrijke medium.
- Steriliseer het medium autoclaaf gedurende 30 minuten bij 120 ° C en atmosferische druk. Laat het medium cool naar RT.
- Zet het vaatje op een magnetische roerder plaat. Voeg het bereid in stap 3.2 vitaminen en laat het medium mix grondig.
4. Anorganische verontreinigingen voorraad voorbereiding
- Gedeeltelijk vul de maatkolven aangegeven in tabel 4 met DW en voeg de individuele zout vermeld. Vul met DW om het gewenste uiteindelijke volume en meng. Niet bewaren deze bestanden zoals sommige elementen adsorberen aan wanden kolf
LET OP: Verschillende anorganische verontreinigende stoffen die in dit protocol zijn kankerverwekkend, teratogeen en mutageen, draag een gezichtsmasker, handschoenen en een laboratoriumjas bij het hanteren van zouten.
| Analyte | Zoutbron | Volume van de voorraad te bereiden (L) | Zout toe te voegen aan de kolf60; (Mg zout) | Analytconcentratie toegevoegd aan de kweek (mg analyt / l) |
| Als | NAASO 2 | 0.1 | 14.8 | 7.74E-02 |
| CD | CdCl2 | 0.5 | 13.5 | 1.50E-02 |
| Co | CoCl 2 .6H O 2 | 0.5 | 34.7 | 1.56E-02 |
| Cr | Na 2 Cr 2 O 7 · 2 H 2 O | 0.1 | 40.6 | 1.29E-01 |
| Cu | CuCl .2H 2 2 O | 0.1 | 38.3 | 1.30E-01 |
| Hg | HgCl2 | 1.0 | 14.6 | 9.80E-03 |
| Mn | MnCl2 .4H O 2 | 0.1 | 58.8 | 1.49E-01 |
| Ni | 2 NiCl .6H O 2 | 0.1 | 112,0 | 2.51E-01 |
| Pb | PbCl2 | 0.5 | 39.9 | 5.41E-02 |
| Sb | Sb 2 O 3 | 0.5 | 26.7 | 4.06E-02 |
| Se | Na 2 SeO 3 | 0.5 | 11.8 | 9.80E-03 |
| Sn | SnCl 2 .2H O 2 | 0.5 | 3.9 | 3.76E-03 |
| V | V 2 O 5 | 0.1 | 22.2 | 1.13E-01 |
| Zn | ZnCl2 | 0.1 | 99.9 | 4.36E-01 |
Tabel 4:. Geconcentreerde anorganische verontreinigingen stampreparaat toevoeging van 1 ml van deze geconcentreerde bouillon aan de PBR 1,1 L medium produceert de eindconcentratie in de laatste kolom.
- Steriliseer de anorganische verontreiniging bestanden door de oplossing door een steriel 0,2 urn spuitfilter en verzamel het filtraat in een steriele buis.
5. N. salina Inoculum Production
- In een 500 ml Erlenmeyer kolf van 200 ml medium bereid in stap 3 en voeg 3 gram agar. Bedek de kolf met aluminiumfolie en autoclaaf gedurende 20 minuten bij 120 ° C. Giet de oplossing in een steriele petri-gerechten en laat het afkoelen tot het stolt. Dit moet worden voltooid een steriele kap of op zijn minst in de buurt van een vlam in een schone omgeving om de kans op besmetting te verminderen.
- Streak N. Salina cellen in een steriele petri-dishes bereid in stap 5.1 onder toepassing van een steriele lus seeding. Plaats de petrischaal kweken op een tafel verlicht met T12 lampen gehandhaafd op kamertemperatuur. Laat microalgen groeien tot kolonies zichtbaar zijn.
- Overdracht kolonies om steriele verbijsterd erlenmeyers met 200 ml van voedselrijk medium bereid in stap 3 en houd ze op een verlichte schudtafel (1000 RPM). Laat de cultuur groeien tot medium wordt groen.
- Breng de microalgen een 1.1 L steriele PBR. Plaats de PBR per inoculum waterbad verlicht 200 umol m -2 s -1 bij T8 fluorescentielampen en gehouden op 23 ° C door een recirculerende koeler en een automatische verwarmen recirculerend waterbad controle. Pas de lucht en de CO 2 rotometers tot 2,5 L min -1 en 25 cc min -1, respectievelijk.
- Na een week van groei split biomassa in nieuwe 1 0,1 L PBRS met nieuw medium en laat het groeien tot een totaal van ten minste 28 g droog gewicht biomassaverkregen tussen de twee reactoren die kan worden bepaald door middel van optische dichtheid.
- Oogst de inoculum biomassa door centrifugatie bij 2054 x g gedurende 15 minuten bij 10 ° C met steriele centrifugeflessen en steriele technieken te voorkomen. Gooi het supernatant en blijven cel concentratie als nodig is.
- Zodra alle biomassa wordt gecentrifugeerd, resuspendeer de cellen in 300 ml vers steriel medium.
- Verdun 0,1 ml van microalgen kweek in 3 ml van DW en verdun vervolgens 0,1 ml van deze nieuwe oplossing in 3 ml van DW. Zorg ervoor dat het monster grondig gemengd. Meet de optische dichtheid (OD) van de microalg concentraat bij 750 nm () onmiddellijk met een spectrofotometer.
- Met vergelijking (1) om de hoeveelheid biomassa te bepalen in het concentraat.
Opmerking: Vergelijking (1) werd verkregen uit de lineaire regressie tussen versus totale hoeveelheid zwevende deeltjes (in g / l -1) voor N. Salina (R2 = 0,9995). Vergelijking 1 is ontwikkeld voor het spectrophotometer model in de Materials tabel, het genereren van een nieuwe kalibratie bij gebruik van een andere spectrofotometer model. - Met vergelijking (2) bepaal het volume van microalgen concentraat (in L) nodig om een 4 g / l -1 kweekdichtheid in een PBR van 1,1 L volume (in L) te verkrijgen.


- Met steriele techniek, voeg de hoeveelheid microalgen concentraat in de stap 5.9 een geautoclaveerde PBR een eerste kweek dichtheid van 4 g / l -1 bereikt. Vul PBR met medium tot 1,1 L. Herhaal deze stap tot 6 PBRS worden geënt. Plaats de PBRS in het inoculum waterbad.
- Laat de microalgen in de PBRS kweken voor 8 dagen en dan oogsten de biomassa (door het herhalen van stappen 5,6-5,7). Herhaal stap 5.8 de oorspronkelijke berekeninginoculum volume voor een eerste kweek dichtheid van 1 g / l -1.
6. Experimentele Reactoren
- Met behulp van steriele technieken voeg ongeveer 1 liter medium bereid in stap 3 aan elk van de 12-zuur gespoeld steriele PBRS. Plaats de PBRS in het waterbad van het experimentele groeisysteem. Schakel sparge lucht op 1,5 L min -1.
- Steriliseren een geijkte pH-meter met het schoonmaken van het met 70% ethanol. Meet de pH van het medium in de PBR en controleer pH ongeveer 7,0; zo niet, herhaal dan stap 2 tot zuur uitgeloogd uit het zuur spoelen stap te verwijderen.
- Kalibreren elke pH-controller met behulp van pH 7, desinfecteren de sondes met ethanol (70%) en plaats ze in de PBRS deksels.
- Aan elke PBR (behalve control PBRS) voeg 1 ml van elk van de anorganische verontreinigingen steriele voorraden bereid in stap 4. Laat de verontreinigingen grondig in de PBR mengen. De uiteindelijke concentratie van de anorganische verontreinigingen in de PBRS zijn voorstellingn in de laatste kolom in tabel 4, en worden de geschatte maximale concentraties verwacht van een kolengestookte elektriciteitscentrale integratie.
- Voeg 14 ml steriel DW met de controle PBRS.
- Voeg de geconcentreerde microalg inoculum verkregen in stap 5.11 van de experimentele PBRS teneinde een initiële kweek dichtheid van 1 g / l -1 verkrijgen. Laat biomassa mix grondig.
- Draai hoge lichtintensiteit lichten (van 984 umol m -2 sec -1) en pH-controllers op en CO 2 aan te passen aan 30 cc min 1. Verhoog de CO 2 stroom naar 50 cc min -1 vanaf dag 3 na afloop. Initial lage CO 2 debiet is cruciaal om grote veranderingen in de pH te voorkomen als gevolg van vertragingen in de gas / vloeistof overdracht en pH-meting.
- Meet en monsters te nemen als dat nodig is. Zorg ervoor dat het waterpeil na de bemonstering te markeren. (LET OP: sommige anorganische verontreinigingen in de PBR zijn kankerverwekkend, teratogeen en mutageen, gebruik handschoenen en capped containers bij de omgang met monsters).
- Voeg steriele DW dagelijks naar de PBRS in om te compenseren voor verliezen als gevolg van verdamping.
- Na 7 dagen kweken, oogsten de biomassa door centrifugatie bij 9936 x g en bewaart zowel biomassa en supernatant medium bij -80 ° C.
- Freeze drogen de biomassa bij 0,1 mbar en -50 ° CO / N. Poeder van de biomassa (gebruik een spatel om poeder biomassa in de centrifugebuis). Behoud gevriesdroogd biomassa bij -80 ° C.
7. Microwave Assisted Spijsvertering van Monsters
De digestie van de biomassa monsters is vereist als een pre-verwerkingsstap voor ICP-MS analyse.
Opmerking: deze stappen een gesloten vat microgolfontsluiting systeem met gecontroleerde druk opluchting. (LET OP: Hoge druk ontwikkelen tijdens zuur spijsvertering, inspecteren van de fysieke integriteit van de vertering schepen en schilden, en hervormen de deksels microgolfontsluiting vaartuig voor elk gebruik).
- Wash Teflon microgolfontsluiting vaten met water en zeep, afspoelen met DW en de lucht laten drogen schepen. Trace metaalverontreiniging in de vaten te verwijderen verteren bereid zoals beschreven in de volgende stappen.
- Vernieuwing van het microgolfontsluiting deksels vat en sluit de flesjes stevig vast.
- Voeg 10 ml salpeterzuur elk.
- Invoering van het schip in de veiligheid schild. Zorg ervoor dat er geen biomassa, water of andere reagentia worden achtergelaten op de wanden van de beschermkap of de buitenwanden van de reactievaten om schade aan het veiligheidsscherm voorkomen. Cap de veiligheid schild met de veiligheidsklep zorg ervoor dat de lente in de flacon is flush. Zoek het schild op de rotor met de dop ventilatieopeningen naar buiten in de buitenste rij en naar binnen in de binnenste rij.
- Op vaartuig nummer één, plaatst u de keramische thermowell en de temperatuur sensor. Deze thermometer controleert de werkelijke temperatuur in de flacon en dient als de controlerende parameter om de spijsvertering te progr voereneen M. Zorg ervoor dat de flacon nummer één bevat hetzelfde monster en reagens hoeveelheden als de andere flesjes.
- Voer de verteringsparameters getoond in Tabel 5 en begint spijsvertering. Wanneer het programma is afgelopen, koele lucht de flesjes tot ze RT bereiken.
| Stap | Flesjes spoelen | | | Monsterontsluiting | | |
| Temperatuur (° C) | Tijd (min) | Max. vermogen (W) | Temperatuur (° C) | Tijd (min) | Max. vermogen (W) |
| 1 | RT tot 190 | 25 | 1000 | RT 180 | 15 | 1000 |
| 2 | 190 | 10 | 1000 | 180 | 15 | 1000 |
| Uitlaat | - | 20 | - | - | 20 | - |
Tabel 5: Parameters gebruikt in het microgolfontsluiting programma.
- Binnen een zuurkast, plaatst het overdrukventiel tool op het schild dop met de dop ventilatieopeningen wijzen van u af. Zodra de druk is vrijgegeven openen de dop (LET OP: Altijd geopend verteerd flesjes in zuurkast sinds biomassavergisting met een zuur produceert giftige dampen).
- Gooi het zuur. De Teflon schepen met DW 3 keer spoelen. Laat flacons aan de lucht drogen.
- Biomassa verteren, voeg 50 mg gevriesdroogd biomassa magnetron reactievaten. Voor kwaliteitscontrole (QC) voor te bereiden de volgende flesjes: in twee verschillende flesjes toe ofwel 5 ml Level 7 ICPMS of 5 ml Level 7 Hg CVAAS standaard voorbereid in de stappen 9.1 en 10.1 (de verteerde oplossing van deze flacon wordt het laboratorium versterkte genoemd blanco (LFB)), laat een ander flesje leeg (de verteerde oplossingvan deze flacon wordt de laboratoriumreagens blanco (LRB)).
- Om medium verteren, voeg 10 ml supernatant medium zuur gespoeld microgolfontsluiting schepen drogen. Voor kwaliteitscontrole (QC) stelt de volgende injectieflacons: In twee flesjes voeg 5 ml van niveau 7 ICPMS of CVAAS metalen standaard bereid in stap 9,1 en 10,1 (de verteerde oplossing van dit buisje wordt de LFB), een nieuw buisje toevoegen 10 ml van DW (de verteerde oplossing van deze flacon wordt de LRB).
- Vernieuwing van het microgolfontsluiting deksels vat en sluit de flesjes stevig vast.
- Voeg 7 ml geconcentreerd sporenmetalen rang salpeterzuur en 3 ml waterstofperoxide aan elk flesje. Meng de inhoud door voorzichtig schudden van de oplossing. Digest de inhoud van de ampullen door stap 7,4-7,7 (gebruik microgolfontsluiting parameters voor steekproefspijsvertering in Tabel 5).
- Toevoegen verteerd monster een 25 ml maatkolf de vaten met DW spoelen voor verbeterd herstel. Vul de maatkolf met DWhet merk.
- Transfer gedigereerd monsters naar een afgedekte container. Bewaar monsters bij 4 ° C tot analyse kan worden voltooid. Voor dit onderzoek analyse op dezelfde dag gedaan Hg binnen drie dagen voor de andere elementen.
8. Quality Control (QC) monsters
Opmerking: Analyse QC samples om de betrouwbaarheid van de resultaten van experimentele monsters te verzekeren.
- Gedeeltelijk vullen een zuur gespoeld 1 L maatkolf met DW. Voeg 280 ml geconcentreerd trace metalen leerjaar salpeterzuur en meng (deze oplossing wordt ook wel de blanco-oplossing) (LET OP: Steeds zuur toevoegen aan water, nooit water toe te voegen aan zuur als de exotherme reactie gewelddadig kan zijn). Laat oplossing afkoelen tot kamertemperatuur.
- Naast QC monsters bereid in stappen 7.9 en 7.10, de voorbereiding van de volgende QC monsters.
- Voor de voortdurende kalibratie verificatie (CCV): Vul een polystyreen buis met kalibratiestandaard (voor de bereiding ziestap 9.2 en 10.1). Zet de Hg standaard oplossing op de CVAAS rek en de ICPMS standaardoplossing in de ICPMS autosampler.
- Voor de voortdurende kalibratie blanco (CCB): Vul twee polystyreen buizen (16 ml) met de blanco (bereid in stap 8.1). Plaats een monster in de CVAAS rek en het andere monster in de ICPMS autosampler.
- Voor het laboratorium versterkte matrix (LFM): Willekeurig kiezen 1 monster van elk 12 monsters voor elk type monster (bijv biomassa of medium) en gebruik het om een LFM bereiden. Voor ICPMS, voeg 0,5 ml ICPMS standaard niveau 7 en 3 ml geknipt experimentele monster (van ofwel biomassa of medium) in een polystyreen buis.
- Meng de inhoud en plaats de flacons op de ICPMS autosampler. Voor CVAAS, voeg 2 ml Hg standaard Level 7 en 6 ml verteerd experimentele monster (van ofwel biomassa of medium) om een polystyreen buis. Meng de inhoud en plaats flacons op de CVAAS rek.
- Voor de duplicaten van de monsters: Willekeurig kiezen 1 steekproef van steedsy 12 monsters voor elk type matrix (bijvoorbeeld biomassa, medium, LFM of verdund matrix) en dupliceren de flacon. Plaats de herhaalde flacons in de ICPMS autosampler of CVAAS rek.
- Voor extra monsters: Willekeurig kiezen 1 monster van elk 12 monsters voor elk type matrix (bijvoorbeeld biomassa, medium, LFM of verdund matrix) en dupliceren de flacon. Plaats de herhaalde flacons in de ICPMS autosampler of CVAAS rek.
- Definieer de kwaliteit van de gegevens criteria voor de studie. Voor de huidige studie te dupliceren de door Eaton, Clesceri, Rijst en Greenberg 25 kwaliteitscriteria. De voor de QC parameters zijn: procent verschil (% D) voor CCV binnen ± 10% 25 (met uitzondering van Pb en Sb, zie bespreking), LFB procent recovery (% R) binnen ± 70-130% 25, LFM procent recovery (% R) binnen 75-125% 25, en de relatieve procent verschil (RPD) binnen ± 20% 25, en een voortdurende calibratie blanco (CCB) hieronder methode rapportage limiet (MRL) 25. Zie berekeningsvergelijkingen in stap 9.7.
9. Kwantificering door inductief gekoppeld plasma massaspectrometrie (ICPMS)
- Op de dag van volledige analyse ongeveer 5 ml van uitgegist monster polystyreenbuizen en plaats ze in de ICPMS autosampler. Voeg ongeveer 15 ml gedigereerde monsters polystyreenbuizen en plaats ze in de CVAAS rack.
- Op dezelfde dag van analyse te maken van de kalibratie standaarden. Voeg gekocht ICPMS standaardoplossing en vul met lege (bereid in stap 8.1) zoals beschreven in tabel 6 (zie standaardoplossing beschrijving in het Material tabel) zuur-gespoeld maatkolven.
| Parameter | Level 1 | Niveau 2 | Niveau 3 | Niveau 4 | Niveau 5 | Niveau 6 | Niveau 7 |
| Heb norm worden toegevoegd (ml) | - | - | - | - | - | - | 10.0 |
| Niveau 7 worden toegevoegd (ml) | 0.0 | 1.0 | 2.5 | 5.0 | 20.0 | 25,0 | - |
| Eindvolume * (ml) | - | 50.0 | 50.0 | 50.0 | 100.0 | 50.0 | 100.0 |
| Uiteindelijke concentratie (ug / l) | | | | | | | |
| 75 Aangezien | 0.0 | 2.0 | 5.0 | 10.0 | 20.0 | 50.0 | 100.0 |
| 111 Cd | 0.0 | 1.0 | 2.5 | 5.0 | 10.0 | 25,0 | 50.0 |
| 59 Co | 0.0 | 10.0 | 25,0 | 50.0 | 100.0 | 250,0 | 500.0 |
| 52 Cr | 0.0 | 2.0 | 5.0 | 10.0 | 20.0 | 50.0 | 100.0 |
| 63 Cu | 0.0 | 5.0 | 12.5 | 25,0 | 50.0 | 125,0 | 250,0 |
| 55 Mn | 0.0 | 3.0 | 7.5 | 15.0 | 30,0 | 75,0 | 150,0 |
| 60 Ni | 0.0 | 8.0 | 20.0 | 40.0 | 80.0 | 200,0 | 400,0 |
| 208 Pb | 0.0 | 1.0 | 2.5 | 5.0 | 10.0 | 25,0 | 50.0 |
| 121 Sb | 0.0 | 12.0 | 30,0 | 60,0 | 120,0 | 300,0 | 600.0 |
| 51 V | 0.0 | 10.0 | 25,0 | 50.0 | 100.0 | 250,0 | 500.0 |
| 66 Zn | 0,0 | 4.0 | 10.0 | 20.0 | 40.0 | 100.0 | 200,0 |
| * Bereiken van dit volume door toevoeging van het bereid in stap 8.1-oplossing | | | | |
Tabel 6: Concentratie van kalibratiestandaarden Levels 1-7..
- Verwijder de kegels van de ICPMS en ultrasone trillingen hen 1 min in DW. Droog de kegels en zet ze terug in het instrument.
- Zet het water chiller, gassen (Ar, H 2, He), de ICPMS, plug lijnen naar interne standaard, en vul auto-sampler spoelen containers (DW, 10% salpeterzuur, 1% salpeterzuur + 0,5% zoutzuur) .
- Open de Masshunter Workstation software en zet de plasma, tune de ICPMS en laadt de ingestelde parameters in tabel 7 methode.
| Parameters | Waarden |
| Interne standaarden | 72 Ge, 115 |
| RF Power | 1.500 W |
| Plasma gasstromingssnelheid | 14.98 |
| Vernevelaar gasstromingssnelheid | 1.1 L / min (carrier en verdunning gas gecombineerd - 0,6 + 0,5 L / min) |
| Sampling kegel | Nickel voor x lens |
| Skimmer kegel | Nikkel |
| Sample opnamesnelheid | 0.3 rps |
| Vernevelaar pomp | 0.1 rps |
| S / C temperatuur | 2 ° C |
| Aftasttoestand | Dwell tijd 1 sec, het aantal herhaalde 3 |
| H2 gasstroom | N / A |
| Hij gasstroom | 4,3 ml / min |
Tabel 7: ICPMS bedrijfsomstandigheden.
- Plaats kalibratiestandaard, QC monsters en experimentele monsters in de autosampler. In de ICPMS software toe te voegen aan de analyse volgorde en monsters analyseren. Zuig het monster in het instrument om het plasma waarbij de elementen worden geïoniseerd. Dan trekt een vacuüm de ionen om een teller. De ionen scheiden afhankelijk van het atoomgewicht van de lichtste tot de zwaarste.
LET OP: Verzamel ICPMS afval in gevaarlijke insluiting en adequaat te behandelen voor verwijdering. - Zorg ervoor dat de correlatiecoëfficiënt (R) waarde voor de kalibratie curve voor elk metaal of metalloïde is groter dan 0.995 24.
- Tijdens monsteranalyse, bereken% R,% O en RPD zoals beschreven in de vergelijkingen 3-6 26 en de resultaten van het project kwaliteitscriteria voor gegevens vergelijken 8.3.
- Bereken procent recovery (% R) om verliezen te bepalen / het verkrijgen van het laboratorium versterkte blank (LFB) en matrix interferentie van het laboratorium versterkte matrix (LFM).


- Bereken procent verschil (% D) om de prestaties instrument veranderingen te bepalen met de tijd bij het uitvoeren van CCV monsters.

- Bereken relatieve procent verschil (RPD) op veranderingen in methode nauwkeurig te bepalen met de tijd bij het uitvoeren van de experimentele monsters.

- Om matrix interferentie (% R buiten het aanvaardbare bereik) te verminderen, verdunnen de monsters voor arme% R om een verhouding 1: 3 (voorbeeld: DW).
10. Hg kwantificering van Cold Vapor Atoomabsorptiespectrofotometer (CVAAS)
- Bereid kalibratiestandaarden dezelfde dag van de analyse. Verdunnen gekocht Hg norm door het toevoegen van 1 ml van de gekochte Hg standaardoplossing om een 100 ml maatkolf en vul aan met het bereid in stap 8.1 oplossing.
- Voeg 2,5 ml van deze oplossing in een 100 ml maatkolf en vul het in stap bereide 8,1-oplossing (deze nieuwe oplossing Niveau 7 Hg norm). Voeg verdunde Level 7 Hg standaard maatkolven en vul met lege (bereid in stap 8.1.) Zoals beschreven in Tabel 8 (zie gekocht Hg standaardoplossing beschrijving in het Material tabel).
| Parameter | Level 1 | Niveau 2 | Niveau 3 | Niveau 4 | Niveau 5 | Niveau 6 |
| L7 Hg formaat wordt toegevoegd (ml) | 0 | 1 | 2.5 | 5 | 20 | 25 |
| Eindvolume * (ml) | - | 50 | 50 | 50 | 100 | 50 |
| Uiteindelijke concentratie (ug / l) | 0 | 0.5 | 1.25 | 2.5 | 5 | 12.5 |
| * Bereiken van dit volume door toevoeging van het bereid in stap 8.1-oplossing | | | |
Tabel 8: Concentratie van Hg calibratiestandaard Levels 1-6..
- Open de Ar gas en lucht ventiel, zet de Atomic absorptie spectrofotometer en de Flow Injection Atomic Spectroscopy (FIAS). Open de CVAAS Winlab software, zet de Hg-lamp en laat het opwarmen tot parameter van de software energie 79. Laad het programma voor de Hg-analyse met de parameters in Tabel 9 bereikt. Stel de lichtbaan in het instrument om de maximale transmissie geven.
| Parameters | Waarden |
| Dragergas | Argon, 100 ml / min |
| Lamp | Hg elektrodeloze ontladingslamp, setup bij 185 mA |
| Golflengte | 253,7 nm |
| Spleet | 0,7 nm |
| Celtemperatuur | 100 ° C |
| Monstervolume | 500 gl |
| Carrier | 3% HCl, 9,23 ml / min |
| Reductant | 10% SnCl 2, 5,31 ml / min |
| Maat | Piekhoogte |
| Lees repliceert | 3 |
Tabel 9: CVAAS bedrijfsomstandigheden.
- Steek de lijn naar de carrier oplossing van 3% trace metalen graad zoutzuur.
- Steek de lijn naar het reductiemiddel oplossing van 10% stannochloride (geschikt voor analyse Hg) bij 3% sporenmetalen rang zoutzuur. Bereid deze oplossing dezelfde dag van de analyse als het is gevoelig voor atmosferische oxidatie (LET OP: Tinchloride is erg gevaarlijk, gebruik beschermende kleding bij het werken ermee Verzamel CVAAS afval in gevaarlijke insluiting en goed afvoeren.).
- Plaats de Hg normen, QC monsters en experimentele monsters in de CVAAS rek en input van de volgorde in de CVAAS Winlab software. Run normen en het genereren van de kalibratievergelijking.
- Run QC samples en experimentele monsters. De CVAAS trekt ongeveer 5 ml van het monster in het instrument reduceert de onderhavige Hg in het monster tot elementair Hg (Hg 0) gas en zuivert het gas uit de oplossing met een drager gas (Ar) in een gesloten systeem. De Hg damp gaat door een cel in het Hg lamp licht pad. Een detector bepaalt het licht geabsorbeerd bij 253,7 nm en koppelt deze aan concentratie. (LET OP: Hg damp is toxisch, zorgen instrument afzuigkap is op zijn plaats).
- Bereken% R,% D en RPD in stap 9.7 tijdens de analyse en de resultaten van het project datakwaliteit criteria te vergelijken.