Deze vereenvoudigde toepassing van intravitale microscopie van mesenterische aderen bij muizen kan worden gebruikt in verschillende ontstekingsmodellen om leukocyten-endotheel en bloedplaatjes-leukemie-interacties te observeren.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Intravitale Microscopie van leukocyten-endotheel en bloedplaatjes-leukocyten Interactions in mesenteriale Veins in Muizen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Intravitale microscopie is een werkwijze die kan worden gebruikt om verschillende processen in verschillende regio's en schepen in levende dieren te onderzoeken. In dit protocol beschrijven we intravitale microscopie van mesenterium aderen. Dit kan worden uitgevoerd in een korte tijd met reproduceerbare resultaten tonen leukocyt-endotheel interacties in vivo. We beschrijven een inflammatoire instelling na LPS uitdaging van het endotheel. Maar in dit model kan men veel verschillende soorten van toepassing van inflammatoire aandoeningen, zoals bacteriële, chemische of biologische en onderzoek de toediening van geneesmiddelen en hun directe effecten op het leven van dieren en de impact ervan op leukocyten werving. Dit protocol is met succes toegepast op een aantal verschillende behandelingen muizen en hun effect op ontstekingsreactie in vaten. Hierin beschrijven we de visualisatie van leukocyten en bloedplaatjes door fluorescent labelen die met rhodamine 6G. Bovendien kan een specifieke pe beeldvorming zijnrformed met behulp van gericht fluorescerend gemerkte moleculen.
Inleiding
Het doel van dit protocol is een vereenvoudigde methode van intravitale microscopie van mesenterium aderen beschrijven levende muizen directe observatie van leukocyt-endotheel leukocyt en bloedplaatjes interacties onder ontstekingsaandoeningen.
Intravitale microscopie werd ontwikkeld om leukocyt-endotheel interacties in vivo te bestuderen onder ontstekingsaandoeningen 1,2, wat niet triviaal, maar belangrijk voor het begrijpen van inflammatoire leukocyten rekrutering en functie. De werkwijze beschrijven we in dit protocol is ontwikkeld op basis van eerder gepubliceerde publicaties. Soortgelijke visualiseren bloedplaatje....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle dierproeven werden uitgevoerd in overeenstemming met de Duitse dierenbescherming recht (TierSchG). De muizen werden gehuisvest en behandeld in overeenstemming met de goede praktijken dier, zoals gedefinieerd door FELASA (www.felasa.eu/guidelines.php) en de nationale dierenwelzijn lichaam GV-SOLAS (www.gv-solas.de/index.html). Het dierenwelzijn commissie van de universiteit van Freiburg, evenals de lokale overheden (Regierungspräsidium Freiburg) goedgekeurd alle dierproeven.
1. Dierlijke Handling, Voorbereiding en inductie van de ontsteking
- Gebruik 4-6 weken oude mannelijke muizen met een gewicht bereik van 16 - 20 g. Opmer....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Een overzicht van de experimentele instelling in dit protocol beschreven in figuur 1. Het toont een muis met een geëxterioriseerde ileum-lus en de vaten, die worden waargenomen in opklaren. Figuur 2 toont zekere activatie in onbehandelde dieren wegens de procedure zelf. Er is bijna geen langzame walsen of stevige adhesie van leukocyten vergeleken met LPS behandelde muizen. Figuur 2 bevat eveneens de resultaten van intravitale microscopie in wildtype muizen hetzij behand.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Hierin beschrijven we de voorbereiding en uitvoering van intravitale microscopie van mesenterium aderen van muizen in vivo. Deze methode geeft ons de mogelijkheid om leukocyten-endotheel en bloedplaatjes-endotheel interacties 11 direct waar te nemen in het levende organisme.
Als een vroege reactie op het endotheel ontsteking wordt geactiveerd en interageert met leukocyten en bloedplaatjes resulteert in rollen, adhesie en transmigratie 12. Maar leukocyten ook in.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Rhodamine 6G | Sigma-Aldrich | 989-38-8 | |
| Lipopolysaccharides uit Escherichia coli 055:B5 | Sigma-Aldrich | L2637 |
Referenties
- Lehr, H. A., Vollmar, B., Vajkoczy, P., Menger, M. D. Intravital fluorescence microscopy for the study of leukocyte interaction with platelets and endothelial cells. Methods in enzymology. 300, 462-481 (1999).
- Atherton, A., Born, G. V.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
