Dit manuscript beschrijft een methode die wordt gebruikt om xenografts (PDX's) van prostaatkankerpatiënten te genereren vanuit circulerende tumorcellen (CTC's). Het genereren van PDX-modellen uit CTC's biedt een alternatief experimenteel model om prostaatkanker te bestuderen; de meest vaak gediagnosticeerde tumor en een frequente doodsoorzaak door kanker bij mannen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Generatie van prostaatkanker Patiënt Afgeleid xenotransplantaatmodellen van circulerende tumorcellen
In dit artikel
Erratum-melding
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Samenvatting
Samenvatting
Patint-afgeleide xenograft (PDX) modellen winnen aan populariteit in kankeronderzoek en worden gebruikt voor preklinische medicijnevaluatie, biomarkeridentificatie, biologische studies en gepersonaliseerde geneeskundestrategieën. Circulerende tumorcellen (CTC's) spelen een cruciale rol bij tumormetastase en zijn geïsoleerd uit patiënten met verschillende tumortypen. Recent zijn CTC's gebruikt om PDX-experimentele modellen van borst- en prostaatkanker te genereren. Dit manuscript beschrijft de methode voor het genereren van prostaatkanker PDX-modellen vanuit CTC's ontwikkeld door onze groep. Voordelen van deze methode ten opzichte van conventionele PDX-modellen omvatten onafhankelijkheid van chirurgische monstercollectie en het genereren van experimentele modellen in verschillende ziektestadia. Dichtheidsgradientcentrifugering gevolgd door rode bloedcellyse en flowcytometrische depletie van CD45-positieve mononucleaire cellen wordt gebruikt om CTC's uit perifere bloedmonsters van patiënten met gemetastaseerde ziekte te verrijken. De CTC's worden vervolgens geïnjecteerd in immuungecompromitteerde muizen; vervolgens gegenereerde xenografts kunnen worden gebruikt voor functionele studies of worden geoogst voor moleculaire karakterisering. De primaire beperking van deze methode is de negatieve selectiemethode die wordt gebruikt voor CTC-verrijking. Ondanks deze beperking biedt de generatie van PDX-modellen vanuit CTC's een nieuw experimenteel model dat kan worden toegepast op prostaatkankeronderzoek.
Inleiding
Patiënt afgeleid xenotransplantaten worden steeds populairder experimentele modellen gebruikt voor kankeronderzoek. Ze kunnen worden gebruikt voor de karakterisering van biomerkers en biologische pathways, pre-klinische evaluatie van de werkzaamheid van geneesmiddelen, en het creëren van virtuele personen gepersonaliseerde kankertherapieën 1,2. Eerder hebben andere onderzoeksgroepen PDX modellen ontwikkeld ofwel door het implanteren of het injecteren van enkele tumorcel schorsingen of hele tumor explantaten in immunogecompromitteerd muizen 1. Deze PDX modellen vereisen chirurgische collectie van verse vaste tumoren, kwaadaardi....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Dit protocol is uitgevoerd op onze instelling met de goedkeuring van het institutioneel onderzoek ethische raad van bestuur en is in overeenstemming met alle institutionele, nationale en internationale richtlijnen voor het menselijk welzijn.
1. Verzameling van perifere bloed van patiënten met gevorderde prostaatkanker
Opmerking: Selecteer patiënten met gemetastaseerde prostaatkanker. Verkrijgen schriftelijke toestemming van de patiënt en het opnemen klinische kenmerken van de patiënten, met inbegrip van leeftijd bij de isolatie en eerdere chemotherapie en hormonale behandelingen. Patiënten met gemetastaseerde zi....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Dit protocol zal leiden tot de vorming van PDX modellen uit geïsoleerde CD45 negatieve prostaatkanker CTC. Op basis van de negatieve selectiemethode gebruikt in ons protocol dient om dode cellen te sluiten via DAPI kleuring. Het percentage CD45 negatieve cellen gedetecteerd door flow cytometrie is variabel en hangt af van de tumor belasting van de patiënt (figuur 1A). Immunofluorescentiekleuring ongesorteerd cellen met behulp CD45 en DAPI (voor celkernen identificeren) openbaart CD45 negatieve cellen, z.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Dit manuscript beschrijft een werkwijze voor het genereren van prostaatkanker PDX modellen van CTCs. Het gebruik van CTCs voor het genereren van PDX modellen heeft een aantal potentieel belangrijke voordelen ten opzichte van bestaande methoden. Eerst toegankelijke verzameling CTCs uit perifeer bloed maakt het genereren van experimentele modellen van dezelfde patiënt in verschillende stadia van de ziekte. Ten tweede bloedafname is een veiligere en goedkope methode om tumorcellen te isoleren ten opzicht.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.
Dankbetuigingen
We danken Dr. Jordi Ochando van de Flow Cytometry Shared Resources bij het Mount Sinai Medical Center voor hun hulp bij de flowcytometrie-analyse. We danken Dr. Rumana Huq van de Microscopy Shared Resource Facility bij het Mount Sinai Medical Center voor hun beeldvormingsassistentie. De auteurs danken de TJ Martell Foundation voor de steun bij dit project.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 | Gibco Life Technologies | 11875-093 | |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Gibco Life Technologies | 10437-028 | |
| Penicillin Streptomycin | Gibco Life Technologies | 15140-122 | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Corning Cell Gro | 21-031-CM | |
| 35 µm Cell Strainer | BD Falcon | 352340 | |
| 50 ml polystyreen conische buis | Crystalgen | 23-2263 | |
| Rode bloedcel lysering buffer | Sigma | R7757 | |
| DAPI | Invitrogen | d3571 | |
| Ficoll-Paque Plus | GE Healthcare | 17-1440 | |
| 12 mm x 75 mm Polystyrene buizen met celstrainer dop | BD Falcon | 352235 | |
| BD Vacutainer Lavender Bloedopnamebuizen met EDTA | |||
| BD Gevleugelde Bloedopname Set met Duw Knop Terugtrek Naald 23 gauge | |||
| BD Vacutainer Eenmalige Naaldhouder | |||
| Weggeef Latex Tourniquet | |||
| Latex of non-latex handschoenen | |||
| alcohol watten | |||
| 2 x 2 katoenen gaas kussentjes | |||
| Zelfklevende pleister | |||
| 25 G naald | |||
| 1 ml spuit |
Referenties
- Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer discovery. 4, 998-1013 (2014).
- Siolas, D., Hannon, G. J. Patient-derived tumor xenografts: transforming clinica....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
Erratum
Formal Correction: Erratum: Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells
Posted by JoVE Editors on 12/01/2015. Citeable Link.
A correction was made to Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells. There was a spelling error in one of the authors' surname. The author's name was corrected from:
Veronica Rodriquez-Bravo
to:
Veronica Rodriguez-Bravo
