Translationeel kankeronderzoek is afhankelijk van de extractie van menselijk weefsel. Er is veel werk verzet om extractiemethoden voor ex vivo analyse te optimaliseren. Hier beschrijven we weefselverwerkingsmethoden die een maximale data-output toestaan van beperkte monsters.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Werken met menselijke weefsels for Translational Cancer Research
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Medisch onderzoek ten behoeve van de mens wordt sterk gehinderd door de noodzaak van menselijk weefsel en proefpersonen. Echter, na het verkrijgen van toestemming voor menselijke monsters, moeten kostbare monsters met de grootste zorg worden behandeld om de integriteit van organen, weefsels en cellen tot het hoogste niveau te garanderen. Helaas vereist weefselverwerking per definitie de extractie van weefsels uit de gastheer, een verandering die grote cellulaire stress kan veroorzaken en grote gevolgen kan hebben voor daaropvolgende analyses. Deze stress kan ertoe leiden dat het monster niet langer representatief is voor de plaats waaruit het werd verkregen. Daarom moet bij de verwerking van deze monsters een strikt protocol worden gevolgd om representatiefheid te garanderen. De gewenste test(en) moeten ook in overweging worden genomen om ervoor te zorgen dat een optimale techniek wordt gebruikt voor monsterverwerking. Hieronder is een protocol voor weefselwinning, -verwerking en verschillende analyses die kunnen worden uitgevoerd op verwerkt weefsel om de downstream-productie uit beperkte weefselmonsters te maximaliseren.
Inleiding
Medisch onderzoek heeft enorm geprofiteerd van de studie van zowel menselijke cellijnen en diermodellen. Cellijnen zorgen voor betere controle van componenten in een systeem, alsmede het gebruik van cellen van het juiste organisme. Het werken met menselijke cellen, terwijl meer representatieve, presenteert een drastisch vereenvoudigd momentopname van mechanismen die verantwoordelijk zijn voor de gezondheid en ziekte kan zijn, omdat cellijnen de invloed van andere cellen, stromale componenten, en de organen die reacties 1 kunnen beïnvloeden niet kunnen herhalen. Anderzijds, dierlijke modellen, hoewel niet helemaal correct reproduceren menselijke ziekten en ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Ethische verklaring: Dit protocol wordt goedgekeurd door de Universiteit van Texas MD Anderson Cancer Center.
1. Specimen Procurement
- Verzamel onderzoek weefselmonsters van overtollige tumor en aanverwante normaal weefsel 10-12. Exemplaren te slaan op nat ijs om autolyse te voorkomen.
- Stuur alle weefsels, medische hulpmiddelen en vreemde lichamen verwijderd tijdens een chirurgische ingreep aan de afdeling Pathologie voor noodzakelijke onderzoeken om een pathologische diagnose te vergemakkelijken.
- Handvat weefsel voor onderzoek in overeenstemming met de toepasselijke onderzoek en weefsels banking beleid en procedures....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De hieronder weergegeven resultaten tonen flowcytometrie gating strategie voor brede immune fenotypering op een verwerkt melanoom tumor. De dag van kleuring werd weefselmonster geknipt en gehomogeniseerd met collagenase I en DNase I incubatie gedurende 60 min bij 37 ° C onder 225 rpm rotatie. Na digestie werd celsuspensie gefiltreerd door een 70 um cel zeef om vuil te verwijderen en de cellen werden gekleurd met fluorescentie gemerkte antilichamen voor flowcytometrie immuuncel fenotypering. Hieronder (figu.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Uiteindelijk moet de verwerkingsmethoden worden gedicteerd door de gewenste hypothese en de verwachte technische assays worden uitgevoerd (Figuur 1). Het volgende deel dient als een overzicht van potentiële tests die kunnen worden uitgevoerd op een dergelijke weefsel secties te beschrijven. Het is geenszins een uitputtend overzicht, maar is bedoeld om gids monster verwerkingsmethoden en de keuze van de downstream assays helpen door het beschrijven van technieken en aanbieden van hun sterke en zwakke pun.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door de filantropische bijdragen van de John G. en Marie Stella Kenedy Memorial Foundation (Grant # 0727033) en de Melanoma Research Alliance. De auteurs willen de Universiteit van Texas MD Anderson Cancer Center Institutionele Tissue Bank (ITB) bedanken voor de coördinatie van het weefsel distributie en het verzamelen en translationeel onderzoek te vergemakkelijken, evenals Dr. Ignacio Wistuba, Dr. Victor Prieto, de MD Anderson Cancer Center Afdeling pathologie en het melanoom Moon Shot Program. Tot slot, de auteurs willen alle patiënten en families getroffen door melanoom te erkennen.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
```html
```
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Naalden | BD | 305167 | |
| Wegwerp scalpels van roestvrij staal | Miltex | 4-410 | |
| Weefselkweekschaal | Corning | 353003 | |
| Biopsie cassettes | Thermo Fisher | 58931 | |
| RNA-stabiliserende oplossing | Ambion | AM7021 | |
| 1,5 ml Eppendorf buisjes | Phenix | MAX-815 | |
| 50 ml buizen | Corning | 430290 | |
| 10% neutraal gebufferd formaline | StatLab Medical Products | 28600-5 | |
| Formaline containers | Fisher Scientific | 23-032-059 | |
| Optimale snijtemperatuur oplossing (OCT) | Sakura Finetek | 4583 | |
| Tissue-Tek Cryomold | Sakura Finetek | 4557 | |
| Dnase I | Roche | 10104159001 | |
| Collageenase I | Roche | 11088793001 | |
| 70μm celsifters | BD Bioscience | 352350 | |
| 96 wel ronde bodemplatten | Corning | 3799 | |
| Live/Dead kleuroplossing | Life Technologies | L34957 |
Referenties
- Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. Cell Biology. Fixing problems with cell lines. Science. 346, 1452-1453 (2014).
- van der Worp, H. B., et al. Can animal models of disease reliably inform human studies. , PLoS Med. 7, e1000245 (2010).
- McCabe, P. M., et al.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
