Methodenartikel

Een Quick Fenotypische Neurologische Scoring System voor het evalueren van ziekteprogressie bij de SOD1-G93A muismodel van ALS

DOI:

10.3791/53257

⸱

6 oktober 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1ALS Therapy Development Institute

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit videoprotocol beschrijft een gevoelige, betrouwbare en snelle methode voor het evalueren van de neuromusculaire tekorten in een transgene muismodel van amyotrofische laterale sclerose.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De SOD1-G93A transgene muis is het meest gebruikte diermodel van amyotrofische laterale sclerose (ALS). Bij ALS TDI hebben we een fenotypisch screeningsprotocol ontwikkeld, hierin getoond in video, dat op betrouwbare wijze de neuromusculaire functie van SOD1-G93A muizen op een snelle manier beoordeelt. Dit protocol omvat een eenvoudig neurologisch scoresysteem (NeuroScore) ontworpen om de hindlimbfunctie te beoordelen. NeuroScore is gericht op de hindlimbfunctie omdat hindlimbdeficiënties het vroegst gerapporteerde neurologische teken van ziekte zijn bij SOD1-G93A muizen. Het protocol ontwikkeld door ALS TDI biedt een onbevooroordeelde beoordeling van het begin van parese (lichte of gedeeltelijke verlamming), progressie en ernst van verlamming en het is gevoelig genoeg om geneesmiddelgeïnduceerde veranderingen in ziekteprogressie te identificeren. In dit rapport minimaliseert de combinatie van een gedetailleerd manuscript met video scoreduideligheden en variatie tussen experimenten, waardoor het protocol kan worden overgenomen door andere laboratoria en vergelijkingen mogelijk worden tussen studies die op verschillende locaties plaatsvinden. We geloven dat dit videoprotocol kan dienen als een uitstekend trainingsinstrument voor huidige en toekomstige ALS-onderzoekers.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sinds de ontwikkeling in het midden 1990 van het SOD1 G93A-transgeen muismodel is de meest gebruikte diermodel van amyotrofe laterale sclerose (ALS) 1. Dit transgeen muismodel werd genetisch gemanipuleerd om een ​​gemuteerde vorm van de humane Cu / Zn superoxide dismutase 1 (SOD1) gen herbergt de ALS geassocieerde glycine alanine mutatie op aminozuur 93 (G93A) tot overexpressie. De G93A mutatie is één van vele mutaties in het SOD1 gen die samen samenstelling ongeveer 1 5 van familiale ALS gevallen 2.

De SOD1-G93A model is een werkpaard van ALS geneesmiddelontwikkeling onderzoek, omdat naast de duidelijke genetische l....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle experimenten worden uitgevoerd in overeenstemming met de door de National Institutes of Health Guide voor de zorg en het gebruik van dieren protocollen en werden goedgekeurd door de ALS TDI's institutionele dierlijke zorg en gebruik Comite (IACUC).

1. Dieren, Huisvesting en Studieopzet

Opmerking: De SOD1-G93A muis kolonie werd afgeleid van de hoge kopie B6SJLTgN (SOD1G93A) 1Gur stam oorspronkelijk geproduceerd door Gurney et al. 7. De kolonie wordt momenteel onderhouden door het kruisen van transgene C57BL / 6-SJL mannen met wild-type C57BL / 6-SJL F1 vrouwtjes. De F1-dieren worden g....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De neurologische score gegevens voor de 90 mannelijke en 94 vrouwelijke niet-behandelde SOD1-G93A muizen studeerde aan ALS TDI in 2014 werden geëvalueerd. De resultaten tonen aan dat mannelijke muizen kenmerkend een agressievere ziekteprogressie dan vrouwelijke muizen, zoals blijkt uit een groter deel van hun levensduur NS 1 dan bij vrouwen. NS 2 en 3 NS optreden met vrijwel gelijke frequentie over geslachten. NS 0 werd uitgesloten van de analyse omdat het wordt beschouwd als een "normaal" fenotype. NS 4 werd .......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In dit verslag beschrijven we een snelle en eenvoudige video protocol dat, indien juist toegepast, kan op betrouwbare beoordeling van de progressie van de ziekte in SOD1 G93A-muizen en identificeren drugs geïnduceerde veranderingen. Terwijl verschillende groepen fenotypische scoring systemen voor SOD1-G93A muizen 8-10 hebben ontwikkeld, ze vaak niet voldoende informatie over de procedure te bieden en zijn ontoereikend voor replicatie. Hierdoor worden scoresystemen zelden gebruikt buiten de specifieke groep di.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We willen Beth Levine bedanken voor het kritisch beoordelen van het manuscript, Valerie Tassinari voor het ontwikkelen van het genotyperingsprotocol, en Matt Ferola en Carlos Maya voor hun uitzonderlijke dierenverzorging.

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
B6SJLTgN(SOD1G93A)1Gur strainThe Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME002726Stam van muizen gebruikt in dit onderzoek
BreedersBiomedical Research Models, Inc., Worcester, MAKolonieonderhoud
ScaleNavigator OHAUS, Parsippany, NJModel N14120Gebruikt om muizen te wegen
Nutra-GelHBio-Serv, Flemington, NJ#S4798Nat voer voor zieke muizen
Irradiated Lab Animal DietHarlan, Indianapolis, IN2918-111914MKauwggoed
Lab-grade Sani-chipsHarlan Teklad, Indianapolis, IN7090Bedding
JMPH SAS Institute, Inc., SAS Campus Drive, Cary, NC v10.0.2Statistische software
Microsoft ExcelMicrosoft, One Microsoft Way, Redmond, WAExcel 2013 (v 15.0)Spreadsheet-software
GraphPad Prism 5GraphPad software Inc., La Jolla, CAv5.4Grafische software
Mouse HutsBio-Serv, Flemington, NJK3272Voor omgevingsverrijking

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gurney, M. E., et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).
  2. Rosen, D. R., et al. Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Beoordeling van de achterpootfunctiestaartophangingstestanalyse van het loopgangpatroontest van de schrijfreflexordinale logistische regressieevaluatie van ziekteprogressiescreening van therapeutische interventiesfenotypische overgangspunten

Gerelateerde artikelen