Herhaalde bloedmonsters zijn noodzakelijk en belangrijk in dieronderzoek. We ontwikkelden een nieuwe, niet-dodelijke en betrouwbare methode voor herhaalde bloedopname bij volwassen zebravissen en pasten deze methode toe op de studie van bloedbiochemie, inclusief glucosemetabolisme.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Herhaalde bloedafname voor Blood Tests in Adult zebravis
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Herhaalde bloedafname is een van de meest gebruikte technieken uitgevoerd op laboratoriumdieren. Echter, een niet-dodelijke protocol voor bloedafname uit zebravis niet vastgesteld. De vorige methoden voor bloedafname uit zebravis zijn dodelijk, zoals laterale incisie, onthoofding en de staart ablatie. Zo hebben we een nieuwe "herhaalde" bloedafname methode een gedetailleerd protocol waarin deze procedure ontwikkeld, en hier aanwezig. Deze methode is minimaal invasief en resulteert in een zeer lage mortaliteit (2,3%) voor zebravis, waardoor herhaalde bloedmonsters van hetzelfde individu. Het maximale volume bloedafname is afhankelijk van het lichaamsgewicht van de vis. Het volume voor herhaalde bloedafname tussenpozen moet ≤0.4% lichaamsgewicht per week of ≤1% per 2 weken, die werden geëvalueerd door meting van hemoglobine zijn. Bovendien, hemoglobine, nuchtere bloedglucose, plasma triacylglycerol (TG) en totaal cholesterol niveaus in mannelijke en vrouwelijke volwassen zebravissen werden gemeten. We pasten deze methode ook de ontregeling van het glucosemetabolisme in dieet-geïnduceerde obesitas onderzoeken. Deze bloedafname methode vele toepassingen, waaronder glucose en lipidemetabolisme en hematologische onderzoeken, die het gebruik van zebravis zal toenemen menselijke ziekte modelorganisme toestaan.
Inleiding
Zebravis winnen steeds populairder als een waardevol model van menselijke ziekten vanwege hun organen en genetica zijn vergelijkbaar met die van mensen 1,2. Op het gebied van de ontwikkelingsbiologie, hebben vele studies aangetoond dat de zebravis en de mens vertonen gemarkeerd gelijkenis in hematopoiesis 3, hemostase 4,5 en myelopoiese 6. Volwassen zebravissen worden ook gebruikt voor het bestuderen immunologische 7, neurodegeneratieve 8 en obesitas gerelateerde ziekten 9 omdat modelorganisme kent gemeenschappelijke pathways met die verstoord menselijke ziekten. Voor overgewicht en obesitas....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle dierlijke procedures werden goedgekeurd door de ethische commissie van Mie University, en werden uitgevoerd volgens de Japanse dierenwelzijn regelgeving 'Wet op het Welzijn en beheer van Animals' (Ministerie van Milieu van Japan) en nageleefd internationale richtlijnen.
1. Voorbereiding van de naald
LET OP: Alle experimenten werden uitgevoerd onder verdoving, en alle inspanningen werden gedaan om het lijden te minimaliseren. Voor euthanasie, werden vis ondergedompeld in een ijs-waterbad (5 delen ijs / 1 deel water bij ≤4 ° C) gedurende ≥20 min.
- Bereid de glazen microcapillaire naalden d....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Deze bloedafname methode veroorzaakt minimale schade aan de zebravis (een <1 mm punctie Figuur 1J) en levert een zeer laag sterftecijfer van 2,3%. We onderzochten de maximale hoeveelheid bloed die kunnen worden verzameld uit een enkele vis en evalueerde de relatie met haar lichaamsgewicht (figuur 3). We vonden dat de maximale bloedvolume verzameld lineair was gecorreleerd met het lichaamsgewicht (R = 0,813). Het grootste volume van het bloed verzameld van een individuele vis (lichaam.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Wij presenteren hier een gedetailleerd protocol voor serieel verkrijgen van bloed van volwassen zebravissen. Deze werkwijze is eenvoudig uit te voeren en we gebruiken in lab dagelijks. Deze bloedafname methode is gebaseerd op het plaatsen van een glazen capillaire naald in de zebravis de dorsale aorta. Tijdens deze procedure is het essentieel om voorzichtig te zijn om niet ablateren de wervelkolom, omdat het criterium voor het zoeken naar de dorsale aorta. Het verminderen van de wervelkolom letsel zal de overlevingskans.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door JSPS KAKENHI Grant Nummer 25860294 en 25590073. We willen mevrouw Yui Namie bedanken voor de handgetekende illustratie, en de heer Koshi Kataoka en mevrouw Sayuri Ichikawa voor hun hulp bij het onderhouden van de zebravissen.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Glas capillairen met gloeidraad | Narishige | GD-1 | 1,0 mm buitendiameter. |
| Naaldtrekker | Narishige | PC-10 | Voor het produceren van de naalden |
| Heparine | Wako Pure Chemical Industries | 081-00136 | Voor heparinisatie |
| Aspiratiebuisassemblage | Drummond | 2-040-000 | Voor bloedafname |
| Pomp | Drummond | 1-000-9000 | Voor bloedafname |
| 2-fenoxyethanol | Wako Pure Chemical Industries | 163-12075 | Voor verdoving van de vissen |
| DRI-CHEM3500V | Fujifilm | - | Voor hemoglobinemeting |
| DRI-CHEM Slides | Fujifilm | Hb-WII | Voor hemoglobinemeting |
| Glutest Neo Super | Sanwa Kagaku Kenkyusho | - | Voor bloedglucosemeting |
| Wako L-type TG kit | Wako Pure Chemical Industries | 464-44201 | Voor TG-meting |
| Wako L-type CHO kit | Wako Pure Chemical Industries | 460-44301 | Voor totale cholesterolmeting |
| Parafilm M | Alcan Packaging | PM996 | Om het bloed te verdrijven |
Referenties
- Lieschke, G., Currie, P. Animal models of human disease: zebrafish swim into view. Nat Rev Genet. 8 (5), 353-367 (2007).
- Penberthy, W. T., Shafizadeh, E., Lin, S. The zebrafish as a model for human disease. Front Biosci. 7, d1439-d1453 (2002).
- Stachura, D. L., Traver, D.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
