Kwantificering van Intra-peritoneale eierstokkanker Metastase

Samenvatting

Eierstokkankermetastase wordt gekenmerkt door talrijke diffuse intra-peritoneale laesies, waardoor nauwkeurige visuele kwantificering van de tumorbelasting een uitdaging is. Hierin beschrijven we een methode voor in situ en ex vivo kwantificering van de metastatische tumorbelasting met behulp van rood fluorescerend proteïne (RFP)-gelabelde tumorcellen en optische beeldvorming.

Samenvatting

Epitheeliaal ovariumkanker (EOC) is de belangrijkste doodsoorzaak door gynaecologische maligniteit in de Verenigde Staten. Mortaliteit is te wijten aan de diagnose van 75% van de vrouwen met late stadia van de ziekte, wanneer metastasen al aanwezig zijn. EOC wordt gekenmerkt door diffuse en wijdverbreide intra-peritoneale metastasen. Cellen die van de primaire tumor losraken, verankeren zich in het mesotheel dat de buikholte bekleedt, evenals in het omentum, wat resulteert in multi-focale metastasen, vaak in aanwezigheid van peritoneale ascites. In ons laboratorium zijn we gericht op een meer gedetailleerd begrip van factoren die het metastatische succes van EOC reguleren. Echter, het kwantificeren van de metastatische tumorbelasting vertegenwoordigt een significante technische uitdaging vanwege het grote aantal, kleine omvang en brede verdeling van laesies door het hele peritoneum. Hierin beschrijven we een methode voor analyse van EOC-metastasen met behulp van cellen gelabeld met rood fluorescerend proteïne (RFP) gekoppeld aan in vivo multispectrale beeldvorming. Na intra-peritoneale injectie van RFP-gelabelde tumorcellen, worden muizen wekelijks geïmagerd tot het tijdstip van opoffering. Op dit moment wordt de peritoneale holte chirurgisch blootgelegd en worden organen in situ geïmagerd. Gedissecteerde organen worden vervolgens op een gelabelde transparante sjabloon geplaatst en ex vivo geïmagerd. Verwijdering van weefselautofluorescentie tijdens beeldverwerking met behulp van multispectrale ontmenging maakt nauwkeurige kwantificering van de relatieve tumorbelasting mogelijk. Deze methode is nuttig in een verscheidenheid van toepassingen, inclusief therapeutische studies om verbindingen te evalueren die metastase kunnen remmen en daardoor de algehele overleving kunnen verbeteren.

Inleiding

Epitheliale eierstokkanker (EOC) is de meest voorkomende doodsoorzaak van gynaecologische maligniteit, met een geschatte 21.290 nieuwe diagnoses in de VS in 2015 en naar schatting 14.180 doden ^1. De overgrote meerderheid (> 75%) van de vrouwen gediagnosticeerd met late stadia van de ziekte (stadium III of IV) gekenmerkt door diffuse intraperitoneale metastase en slechte prognose. Terugkeer van de ziekte in de buikholte na eerstelijns chemotherapie is ook gebruikelijk en vormt een belangrijke oorzaak van sterfte ^2,3. EOC uitzaaiing door een uniek mechanisme waarbij zowel rechtstreeks in het verlengde van de primaire tumor naburige peritoneale org....

Protocol

Alle in vivo studies werden goedgekeurd door de Universiteit van Notre Dame Animal Care en gebruik Comite en gebruikte vrouwelijke C57 / BL6J muizen.

1. Muizen Ovarian Cancer Cell Culture

1. Maak de ID8 muis eierstokkanker celcultuurmedium als volgt: 1 L Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) aangevuld met 4% foetaal runderserum (FBS), 1% penicilline / streptomycine, 5 ug / ml insuline, 5 ug / ml transferrine en 5 ng / ml natriumseleniet.
2. Transduceren ID8 muizen eierstokkanker cellen ¹³ tot Red Fluorescent Protein (RFP) met in de handel aangekocht lentivirale deeltjes uitdrukken RFP en een select....

Resultaten

Het mechanisme van metastatische ovariumkanker gekenmerkt door zeer diffuse intraperitoneale metastase uit talrijke lesies van verschillende grootte, waaronder meerdere kleine (<2 mm) laesies. Aldus gebruik van RFP gelabelde tumorcellen (figuur 1) en optische beeldvorming verschaft een alternatieve methode voor handmatige telling en meting van verwondingsgrootte. De ontwikkeling van tumor belasting in de tijd kan worden bepaald door wekelijkse weging van muizen en met.......

Discussie

In tegenstelling tot onderzoek met humaan ovarium kankercellen die in immuungecompromitteerde muizen moeten worden uitgevoerd, de hierboven beschreven protocol gebruikt immuuncompetente C57 / Bl6 muizen en syngene muizen eierstokkankercellen. Hoewel dit maakt evaluatie van de mogelijke rol van immune infiltraten bij tumorprogressie en metastase, de aanwezigheid van donker haar op het buikoppervlak maakt beeldvorming minder gevoelig. Toepassing van een ontharingscrème om haar voorafgaand aan beeldvorming versterkt beeldv.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Dulbecco's Modified Eagle Medium	Corning	10-014-CM
Fetal bovine serum	Gibco	10437-028
penicillin/streptomycin
Insulin-transferrin-sodium selenite media supplement	Sigma	I-1884
Bruker Xtreme small animal imaging system	Bruker Corp.
Bruker Multispectral software	Bruker Corp
lentiviral particles with Red fluorescent protein	GenTarget, Inc.	LVP023
trypsin for cell culture	Corning	25-053-CI
PBS	Corning	21-040-CM
depilatory cream (such as Nair Hair Remover Lotion)	aankopen bij de drogisterij	n/a
ImageJ software	http://imagej.nih.gov/ij/		gratis download
dissectie-instrumenten (tang)	Roboz Surgical Instrument	RS 5130
dissectie-instrumenten (Schaar)	Roboz Surgical Instrument	RS 5910