Method Article

Een eenvoudige methode voor Automated Solid Phase Extraction van watermonsters voor immunologische Analyse van Kleine verontreinigende stoffen

DOI:

10.3791/53438

⸱

January 1st, 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centre Suisse d'Electronique et de Microtechnique, 2Department of Chemistry and Applied Biosciences, ETH Zurich, 3Department of Information Technology and Electrical Engineering, ETH Zurich

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A protocol for the extraction and pre-concentration of estradiol from water samples by using an automated and miniaturized system is presented.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een nieuwe methode voor vastefase-extractie (SPE) milieu watermonsters voorgesteld. De ontwikkelde prototype is kostenefficiënt en gebruiksvriendelijk, en maakt het mogelijk om een ​​snelle, geautomatiseerde en eenvoudige SPE voeren. De pre-geconcentreerde oplossing is geschikt voor analyse door immunoassay, met een laag gehalte organisch oplosmiddel. Een werkwijze wordt beschreven voor de extractie en pre-percentage natuurlijke hormoon 17β-oestradiol in 100 ml watermonsters. Omgekeerde fase SPE wordt uitgevoerd met octadecyl-silicagel sorptiemiddel en elutie uitgevoerd met 200 pl methanol 50% v / v. Eluent wordt verdund door toevoeging van di-water om de hoeveelheid methanol te verlagen. Na bereiding handmatig SPE kolom, wordt de totale procedure automatisch uitgevoerd binnen 1 uur. Aan het eind van het proces wordt oestradiol concentratie gemeten met behulp van een commercieel enzym-gekoppelde immuun-sorbent assay (ELISA). 100-voudig pre-concentratie wordt bereikt en het gehalte aan methanol in slechts 10% v / v. Vol terugvorderingen van het molecuulworden bereikt met 1 ng / l spiked gedeïoniseerd en synthetische zeewater monsters.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Monstervoorbereiding is een belangrijke stap in een analytisch proces. Vooral het verwijderen van matrixeffecten, vermindering van storingen en de verrijking van het analyt nodig om nauwkeurige resultaten te bereiken en lage detectiegrenzen. Hormoonverstorende stoffen (EDC's) zijn van bijzonder belang vanwege hun actie op de levende organismen, zelfs wanneer aanwezig op zeer lage niveaus in het milieu. Het natuurlijke hormoon 17β-estradiol is aanwezig op de EU watervervuiling watch list en gevoelig te worden toegevoegd aan de lijst van prioritaire stoffen die vallen onder de Europese Kaderrichtlijn Water. Vaste fase-extractie (SPE) is gewoonlijk voor de analyse v....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Opmerking: Het volgende protocol beschrijft de SPE uitgevoerd op 100 ml water monster met C18 sorptiemiddel en elutie met 50% v / v methanol. De verrijkte monster wordt verdund tot 10% v / v methanol bereiken voordat de analyse van een enzymgekoppelde immunosorbent assay (ELISA) kit.

1. Voorbereiding van de reagentia

  1. Bereid de watermonsters
    1. Voorafgaand aan een andere stap, filteren elke 100 ml water monster met 0,2 um poriegrootte filters.
    2. Spike het monster met gewenste concentratie door verdunning geschikt volume referentieoplossing in een volume water. Zo bereiden 100 ml water monster met 100 ng / l E2 door....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Reproduceerbaarheid sorptiemiddel verpakking werd geëvalueerd door het drogen en het wegen van de gepipetteerde sorbens in glazen flesjes en het resultaat wordt getoond in figuur 1. Reproduceerbaarheid van het tijdstip van de injectie werd getest 100 ml monsters, zie figuur 2. Concentratie initiële en pre- spiked geconcentreerde monsters werden bepaald met een commerciële ELISA kit voor 17β-oestradiol en worden getoond in figuur .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een nieuwe werkwijze voor de bereiding van watermonsters gevolgd door analyse met behulp immunoassay voorgesteld. Het instrument maakt het mogelijk om de vaste fase extractie uit te voeren op een geautomatiseerde en gebruiksvriendelijke manier.

De filtratie van het watermonster vóór de injectie in het systeem kritisch. Eventuele deeltjes nog in de oplossing mogelijk verstopping van de vloeibare netwerk veroorzaken en belemmeren de kolom SPE. Een andere belangrijke stap is de bereiding van de.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

This work was funded by the European Union Seventh Framework Program FP7/2007-2013 under grant agreement no. 265721. The authors thank the RIKILT Institute for Food Safety (NL) for their support in this project.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Filter membrane 0.2 μm pore sizeMerck MilliporeGNWP04700For sample filtration
Nylon membrane 11 μm pore sizeMerck MilliporeNY1104700For SPE column
Disposable biopsy punch 5 mmMedical Budget39302439
Nucleodur C18 ec Macherey Nagel713550.0150 μm particle diameter
Synthetic sea waterSigma AldrichSSWS500-500ML
MethanolVWR
17beta-estradiol standardEnzo Life Science300 ng/ml
17beta-estradiol ELISA kitEnzo Life ScienceADI-900-00896 wells, range 30 - 3,000 ng/L

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water. J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).
  2. Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Solid Phase ExtractionAutomated SPEWater Sample AnalysisImmunoassay CompatibilityEstradiol DetectionOctadecyl Silica SorbentMethanol ElutionELISA AnalysisEnvironmental MonitoringPollutant Pre concentration

Related Articles