Methodenartikel

Zoutgehalte-afhankelijke toxiciteit Test van Silver nanocolloïden gebruik van Medaka Eieren

DOI:

10.3791/53550

⸱

18 maart 2016

 , 
1Graduate School of Life Sciences, Toyo University, 2Research Center for Life and Environmental Sciences, Toyo University

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Embryonale stadia zijn het meest vatbaar voor xenobiotica. Hoewel chemische toxiciteit afhankelijk is van de zoutconcentratie, bestaat er geen methode om de zoutconcentratieafhankelijkheid van toxiciteit voor aquatische organismen te testen. Hier beschrijven we een nieuwe en snelle methode om de zoutconcentratieafhankelijkheid van toxiciteit voor aquatische embryo's te bepalen.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het zoutgehalte is een belangrijk kenmerk van het aquatisch milieu. Voor waterorganismen definieert de leefgebieden van zoetwater, brak water en zeewater. Tests van de toxiciteit van chemicaliën en beoordeling van hun ecologische risico voor waterorganismen worden vaak uitgevoerd in zoet water, maar de toxiciteit van chemische stoffen voor waterorganismen afhankelijk van pH, temperatuur, zoutgehalte. Er is geen methode echter voor het testen van het zoutgehalte afhankelijkheid van toxiciteit voor waterorganismen. Hier gebruikten we medaka (Oryzias latipes), omdat ze zich kunnen aanpassen aan zoetwater, brak water en zeewater. Verschillende concentraties van embryo grootbrengen medium (ERM) (1x, 5x, 10x, 15x, 20x en 30x) werden gebruikt om de toxiciteit van zilver nanocolloidal deeltjes (SNCS) testen om eieren (1x ERM en 30x ERM Medaka hebben osmotische druk gelijkwaardig om zoet- en zeewater, respectievelijk). In zes-well platen, 15 medaka eieren in drievoud werden blootgesteld aan SNCS bij 10 mg / L &# 8722, 1 in verschillende concentraties ERM bij pH 7 en 25 ° C in het donker.

We gebruikten een dissectie microscoop en een micrometer voor het meten van de hartslag per 15 sec en oog diameter op dag 6 en full body lengte van de larven op het uitkomen dag (deel 4). De embryo's werden waargenomen tot het uitkomen of dag 14; we vervolgens geteld het uitbroeden tarief per dag gedurende 14 dagen (deel 4). Zilver accumulatie te zien in embryo's, gebruikten we inductief gekoppeld plasma massaspectrometrie om de zilveren concentratie van testoplossingen (deel 5) en dechorionated embryo's (hoofdstuk 6) .De toxiciteit van de SNCS om medaka embryo's duidelijk toe met toenemende verzilting te meten. Deze nieuwe methode laat ons toe om de toxiciteit van chemische stoffen te testen in verschillende zoutgehaltes.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sinds de oprichting van de Organisatie voor Economische Samenwerking en Ontwikkeling (OESO) richtsnoeren voor de proef voor het testen van chemische stoffen in 1979, hebben 38 testrichtsnoeren gepubliceerd in deel 2 van de richtsnoeren, Effecten op biotische systemen 1. Al het water levende organismen getest hebben van zoetwaterhabitats, namelijk zoetwater planten geweest; algen; ongewervelde dieren zoals watervlooien en chironomiden; en vissen zoals medaka, zebravis, en regenboogforel. In vergelijking met zout water omgevingen, zijn zoetwater milieus meer rechtstreeks getroffen door menselijke economische en industriële activiteiten. Daarom hebben zoetwater omgevingen zijn prioriteit voor het testen, omdat ze een hoger risico van vervuiling.

In de kustgebieden, met inbegrip van estuaria, zoutgehaltes verschillen tussen brak water en zeewater omstandigheden, en deze gebieden worden vaak vervuild door industriële activiteit 2. Kustgebieden en de bijbehorende wetlands worden gekenmerkt door hoge ecologische biodiversiteit en productiviteit. Ecosystemen langs de kust moeten daarom worden beschermd tegen chemische verontreiniging. Echter, er is beperkt ecotoxicologisch onderzoek in brak water en zeewater habitats.

Sakaizumi 3 bestudeerde de interacties tussen toxische methylkwik en zoutgehalte in Japanse Medaka eieren en vond dat het verhogen van de osmotische druk van de meetoplossing verhoogde de toxiciteit van de methylkwik. . Sumitani et al 4 gebruikt medaka eieren aan de toxiciteit van stortplaats percolaat te onderzoeken; Zij vonden dat de osmotische gelijkwaardigheid van percolaat om de eieren was de sleutel tot het induceren afwijkingen tijdens embryogenese. Daarnaast Kashiwada 5 gemeld dat plastic nanodeeltjes (39,4 nm in diameter) gemakkelijk doordrongen door de medaka ei chorion onder brakke omstandigheden (15x embryo opfok medium (ERM)).

Een typische kleine vis model, de Japanse Medaka (Oryzias latipes ) is gebruikt in de fundamentele biologie en ecotoxicologie 6. Japanse medaka kunnen leven in omstandigheden, variërend van zoet water naar zeewater omwille van hun sterk ontwikkelde chloride cellen 7. Zij zijn dan ook waarschijnlijk nuttig zijn voor het testen in omstandigheden met een uitgebreide lijst van zoutgehaltes te zijn.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De Japanse medaka gebruikt in deze studie werden humane wijze in overeenstemming met de institutionele richtlijnen van Toyo University behandeld, met inachtneming van de verlichting van leed en ongemak.

1. Silver nanocolloïden (SNCS)

  1. Schaf gezuiverd SNCS (20 mg / L -1, 99,99% zuiverheid, deeltje gemiddelde diameter van ongeveer 28,4 ± 8,5 nm gesuspendeerd in gedestilleerd water).
  2. Valideer de zuiverheid en concentratie van het zilver door inductief gekoppeld plasma massaspectrometrie (ICP-MS) analyse volgens gebruiksaanwijzing 8. De voorbehandeling methode voor het ICP-MS analyses wordt beschreven in hoofdstuk 7.

2. Voorbereiding van de SNC Solutions (mengsels van zilver colloïden en Ag +) met verschillende zoutgehaltes

  1. Bereid 60 × ERM bestaande uit 60 g NaCl, 1,8 g KCI, 2,4 g CaCl2 · 2 H 2 O, en 9,78 g MgSO4 · 7H 2 O in 1 L van ultrapure water; breng de pH op 7,0 met 1,25% NaHCO3 in ultrapuur water.
  2. Roer de ERM-oplossing bij 25 ° C gedurende de nacht.
  3. Meng SNCS met verdund ERM. Bereid 40 ml van elk SNC-ERM gemengde oplossing. De uiteindelijke concentratie is 10 mg / l -1 van SNCS in verschillende concentraties van ERM (1x, 5x, 10x, 15x, 20x of 30x).
  4. Stel de pH van de SNC-ERM gemengde oplossing tot 7,0 met 0,625% NaHCO3 in ultrapuur water. pH-instelling van groot belang het bereiden van de SNC-oplossing, omdat Ag + afgifte wordt vergemakkelijkt door zure omstandigheden 9.
  5. Gebruik AgNO 3 als referentie compound voor SNCS.
    1. Meng AgNO 3 met verdunde ERM. Bereid 40 ml AgNO 3 -ERM gemengde oplossing bij een AgNO3 concentratie van 15,7 mg / L -1 (10 mg / l -1 zilver) in verschillende concentraties ERM (1x, 5x, 10x, 15x, 20x of 30x) .
      Opmerking: Om zilver colloïd giftigheid onderzoeken, AgNO3oplossing, die een bron van oplosbaar zilverzout, wordt gebruikt als referentieverbinding voor SNCS, dat een mengsel van zilver colloïden en oplosbaar zilverzout zijn.

3. Medaka Cultuur en Egg Oogsten

  1. Haal de medaka (O. latipes) (oranje-rood stam) (60 mannen en 60 vrouwen).
  2. Cultuur medaka als groepen (20 mannetjes en 20 vrouwtjes als één groep) in 1x ERM in 3 L tanks door een medaka doorstroomsysteem kweeksysteem.
    1. Cultuur aan de volgende voorwaarden:
      pH-bereik van het kweekmedium: 6,2-6,5
      licht: donker cyclus: 16: 8 uur
      temperatuur van het kweekmedium: 24 ± 0,5 ° C
      osmotische druk van het kweekmedium: 257 mOsm
  3. Voeden medaka op Artemia salina nauplii om 10.00 uur (een keer per dag) en diervoeders een kunstmatige droge vis dieet om 09:00, 11:00, 13:00, 15:00 en 17:00 (vijf keer per dag).
    1. Verkrijgen A. salina nauplii.
    2. Bereidt 5 L van een 3,0% zoutoplossing in een kunststof beker.
    3. Voeg 30 g Artemia eieren aan de zoutoplossing in het bekerglas.
    4. Incubeer de eieren bij 25 ° C gedurende 48 uur met bruisend (4 l / min -1) met behulp van een luchtpomp.
    5. Na 48 uur, stopt de borrelende.
    6. Laat de oplossing staan ​​gedurende 5 tot 10 minuten om de gearceerde A. scheiden salina nauplii (onderste deel van de oplossing) van de uitgebroede eieren en eierschalen (bovenste deel van de oplossing).
    7. Verwijder de bovenste laag van de oplossing door decanteren.
    8. Filtreer het onderste gedeelte van de oplossing door een zeef met openingen van 283 pm, en verzamel de nauplii die passeren op een net met openingen van 198 pm.
    9. Voeden de nauplii de medaka binnen 6 uur.
  4. Nadat de vrouwelijke medaka hebben voortgeplant, verwijder de externe ei clusters voorzichtig van organen Vrouwtjes of verzamelen van de eieren van de bodem van het aquarium door een smalle netto (netto maat 5 cm x 5 cm, gatgrootte 0,2 mm x 0,2 mm).
  5. Spoel het ei cluster met stromend leidingwater gedurende 5 sec.
  6. Voeg alle van de gespoeld ei clusters 30x ERM-oplossing.
  7. Verwijder de clusters uit de oplossing na 1 minuut en plaats het ei clusters tussen droog papieren handdoeken en rollen zachtjes.
  8. Doe de eieren terug in de 30x ERM.
  9. Selecteer bevruchte eieren onder een stereomicroscoop.
  10. Place geselecteerd 810 eieren in 1x ERM in zes-well plastic platen met behulp van een tang.
  11. Incubeer de eieren bij 25 ± 0,1 ° C in een incubator totdat ontwikkelingsstadium 21. (ontwikkelingsstadia van de medaka embryo's werden gedefinieerd op basis van het werk van Iwamatsu 10.)
  12. Kies uit bebroede eieren in ontwikkelingsfase 21 onder een dissectie microscoop.
  13. Spoel geselecteerde eieren met 1x ERM.
  14. Betreft het gespoeld eieren blootstelling experimenten (hoofdstuk 4).

4. toxiciteit testen van SNCS of AgNO3 Bij Different ERM zoutgehaltes

  1. Spoel medaka eieren (stap 21) driemaal met testoplossing [SNCS (10 mg / l -1) of AgNO 3 (15,7 mg / l -1 als 10 mg / l -1 zilver) bij elke concentratie van ERM (1x, 5x , 10x, 15x, 20x of 30x) bij pH 7]. Als controles worden eieren 1 × tot 30 × ERM bij pH 7.
  2. Voeg 15 gespoeld eieren tot 5 ml van elke testoplossing in zes-well plastic platen. (Voer de blootstelling experimenten drie keer voor SNC of AgNO 3 toxiciteit testen met behulp van elke testoplossing.)
  3. Wikkel de platen in aluminiumfolie.
  4. Incubeer de gewikkelde platen bij 25 ° C in het donker totdat uitgebroed of 14 dagen.
  5. Let op de blootgestelde eieren elke 24 uur voor biologische veranderingen en dode eieren (figuren 1 en 2).
  6. Ruil de testoplossingen iedere 24 uur.
  7. Voeren opmerkingen als volgt.
    1. Op dag 6 van de blootstelling, tel de hartslag (per 15 sec) of medaka embryo's onder een dissectiemicroscoop met een stopwatch (Figuur 3a).
    2. Op dag 6 van de blootstelling, meet de grootteoogschaduw (diameter) van medaka embryo's onder een stereomicroscoop met een micrometer (Figuur 3b).
    3. Op het uitbroeden dag, het meten van de full body lengte van larven onder een dissectie microscoop met behulp van een micrometer (Figuur 3c).
    4. Tel het aantal blootgestelde eieren die uitkomen in de 14 dagen (Figuur 3d).

5. Isolatie van oplosbare Zilver uit SNC Solution, en Silver Analyse

  1. Isoleer oplosbaar zilverzout van elke SNC oplossing (een mengsel van zilver colloïden en oplosbaar zilverzout) door filtreren door een membraanfilter 3 kDa bij 14.000 x g en 4 ° C gedurende 10 minuten. Gebruik een 3 kDa membraan filter om oplosbare zilver isoleren van de SNCS, omdat de gerapporteerde gemiddelde diameter van geaggregeerde SNCS in 1x ERM is 67,8 nm 11 and dat van Ag + is 0,162 nm 12; de 3 kDa membraan uitgesloten deeltjes met een diameter van 2 nm of meer 13.
  2. Meet de zilverconcentratie in 50 pl gefiltreerde oplossing (= de oplosbare zilverconcentratie) met ICP-MS analyse (Figuur 3e) volgens de ICP-MS handleiding 8. De voorbehandeling werkwijze voor de ICP-MS analyses wordt beschreven in hoofdstuk 7.

6. Meting van Silver Bioaccumulatie in Medaka Embryo's

  1. Expose medaka eieren (fase 21) SNCS of AgNO 3 zoals beschreven in hoofdstuk 4.
  2. Op dag 6 van de blootstelling, chorion verwijderen van het ei (bijv dechorion) door Medaka uitkomen enzym volgens de Medaka Book 14 beschreven protocol.
  3. Meet de zilveren concentratie van de dechorioned eieren door ICP-MS-analyse op basis van de ICP-MS handleiding 8 (figuur 3f). de voorbehandelingwerkwijze voor de ICP-MS analyses wordt beschreven in hoofdstuk 7.

7. Meting van de Silver Concentratie door ICP-MS Analysis

  1. (; Rubriek 1 voor de validatie van de zilveren concentratie) monsters [50 ul van zilver-oplossing toe te voegen; drie dechorionated embryo's (hoofdstuk 5); of 50 pl gefiltreerde oplossing (punt 5)] een 50 ml Teflon beker.
  2. Voeg 2,0 ml ultrazuiver salpeterzuur 50 ml bekerglas.
  3. Verwarm het mengsel op een hete plaat bij 110 ° C tot net voordat deze droogt (ongeveer 3 uur).
  4. De organische stoffen volledig oplossen, voeg 2,0 ml ultrazuiver salpeterzuur en 0,5 ml waterstofperoxide aan de beker.
  5. Verwarm het mengsel weer op de hete plaat tot net voordat het droogt (ongeveer 3 uur).
  6. Los het residu op in 4 ml 1,0% ultrazuiver salpeterzuuroplossing.
  7. Overdracht 4 ml oplossing voor een centrifugebuis.
  8. Herhaal 7,6-7,7 maal (in totaal driemaal). Het eindvolume is 12.0ml.
  9. Meet de zilveren concentratie van het monster (opgelost in 1,0% ultrapuur salpeterzuur) met behulp van ICP-MS analyse volgens de gebruiksaanwijzing 8.
    1. Gebruik een interne en een externe standaardoplossing (zie Materials List) om de zilveren concentratie te kwantificeren. De interne en externe standaardoplossing is geaccrediteerd door de Amerikaanse Vereniging voor Laboratory Accreditation (A2LA). Detectielimieten van zilver waren 0,0018 ng / ml -1 (oplossing) en 0,016 ng mg gewicht -1 (embryo lichaam).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het effect van het zoutgehalte op SNC toxiciteit was erg duidelijk: de inductie van misvorming of dood saliniteit afhankelijke (figuren 1 en 2). We gemeten fenotypische biomarkers (hartslag, oog grootte, full body lengte, en broedeieren rate) in SNC (10 mg / l -1) -exposed embryo's. Deze fenotypische biomarkers bleek zoutgehalte SNC-afhankelijke toxiciteit.

Hart varieerden 29,6-...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Medaka is een zoetwatervis die zeer tolerant voor zeewater; het is niet bekend dat de oorspronkelijke natuurlijke habitat van deze vis was zout water uit de Japanse kust 6. Vandaar medaka vissen hebben goed ontwikkelde chloride cellen 7. Deze unieke eigenschap geeft wetenschappers een nieuwe manier om de toxiciteit van de teststof in de omgeving als een functie van het zoutgehalte (zoet naar zeewater) met alleen één vissoort.

Om medaka eieren in de eerste fase 21 te ver...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wij zijn Ms. Kaori Shimizu en de heer Masaki Takasu van de Graduate School of Life Sciences, Toyo University, dankbaar voor hun technische ondersteuning. Dit project werd ondersteund door onderzoekssubsidies van de Special Research Foundation en Bio-Nano Electronics Research Centre van Toyo University (aan SK); door het Science Research Promotion Fund van de Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan (aan SK); door het New Project Fund for Risk Assessments, van het Ministerie van Economische Zaken, Handel en Industrie (aan SK); door een Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research (toekenning 23651028 aan SK); door een Grant-in-Aid for Scientific Research (B) en (C) (toekenning 23310026 en 26340030 aan SK); en door een Grant-in-Aid for Strategic Research Base Project for Private Universities (toekenning S1411016 aan SK) van het Ministerie van Onderwijs, Cultuur, Sport, Wetenschap en Technologie van Japan.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Silver nanocolloïdenUtopia Silver Supplementen
NaClNacalai Tesque, Inc.31319-45Voor het maken van ERM
KClNacalai Tesque, Inc.28513-85Voor het maken van ERM
CaCl2·2H2ONacalai Tesque, Inc.06730-15Voor het maken van ERM
MgSO4·7H2ONacalai Tesque, Inc.21002-85Voor het maken van ERM
NaHCO3 Nacalai Tesque, Inc.31212-25Voor het maken van ERM
AgNO3Nacalai Tesque, Inc.31018-72
pH meterHORIBA, Ltd.F-51S
BalansMettler-Toledo International Inc.MS204S
medaka (Oryzias latipes) oranje-rode stamNational Institute for Environmental Studies
medaka doorstroming kweeksysteemMeito Suien Co.MEITOsystem
Artemia salina nauplii-eierenJapan pet design Co. Ltd4975677033759
beluchtingspompJapan pet design Co. Ltdgeruisloos w300
Otohime larval β-1Marubeni Nissin Feed Co. LtdOtohime larval β-1Kunstmatig droog visvoer
dissectiemicroscoopLeica microsystemsM165FC
micrometerFujikogaku, Ltd.10450023
incubatorNksystemTG-180-5LB
schudlerELMI Ltd.Aizkraukles 21-136
6-well plastic platenGreiner CELLSTARM8562-100EA
aluminiumfolieAS ONE Co.6-713-02
stopwatchDRETEC Co. Ltd.SW-111YE
3 kDa membraanfilterEMD Millipore Corporation0.5 ml centrifugaal-type filter
50 ml Teflon bekerAS ONE Co.33431097
Aangepaste claritas standaardSPEXertificateZSTC-538Voor interne standaard
Aangepaste claritas standaardSPEXertificateZSTC-622Voor externe standaard
Ultrapuur salpeterzuurKanto Chemical Co.28163-5B
Waterstofperoxide Kanto Chemical Co.18084-1Bvoor atomaire absorptiespectrometrie
ICP-MSThermo ScientificThermo Scientific X Series 2 
Hot plateTiger Co.CRC-A300

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2 Effects on Biotic Systems. , OECD. Available from: http://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-guidelines-for-the-testing-of-chemicals-section-2-effects-on-biotic-systems_20745761 (2015).
  2. National Coastal Condition Report. , Environmental Protection Agency, Office of Water and Office of Research and Development. Washington, DC. (2001).
  3. Sakaizumi, M. Effect of inorganic salts on mercury-compound toxicity to the embryos of the Medaka, Oryzias latipes. J. Fac. Sci. Univ. Tokyo. 14 (4), 369-384 (1980).
  4. Sumitani, K., Kashiwada, S., Osaki, K., Yamada, M., Mohri, S., Yasumasu, S., et al. Medaka (Oryzias latipes) Embryo toxicity of treated leachate from waste-landfill sites. J. Jpn. Soc. Waste Manage. Exp. 15 (6), 472-479 (2004).
  5. Kashiwada, S. Distribution of Nanoparticles in the See-through Medaka (Oryzias latipes). EHP. 114 (11), 1697-1702 (2006).
  6. Iwamatsu, T. The Integrated Book for the Biology of the Medaka. , University Education Press. Japan. (2006).
  7. Miyamoto, T., Machida, T., Kawashima, S. Influence of environmental salinity on the development of chloride cells of freshwater and brackish-water medaka, Oryzias latipes. Zoo. Sci. 3 (5), 859-865 (1986).
  8. XSERIES 2 ICP-MS Getting Started Guide Revision B - 121 9590. , Thermo Fisher Scientific Inc.. Available from: http://202.127.146.37/eWebEditor/uploadfile/20130314161434190.pdf (2007).
  9. Kashiwada, S., Ariza, M. E., Kawaguchi, T., Nakagame, Y., Jayasinghe, B. S., Gartner, K., et al. Silver nanocolloids disrupt medaka embryogenesis through vital gene expressions. ES & T. 46 (11), 6278-6287 (2012).
  10. Iwamatsu, T. Stages of normal development in the medaka Oryzias latipes. Mech. Dev. 121, 605-618 (2004).
  11. Kataoka, C., Ariyoshi, T., Kawaguchi, H., Nagasaka, S., Kashiwada, S. Salinity increases the toxicity of silver nanocolloids to Japanese medaka embryos. Environ. Sci.: Nano. 2, 94-103 (2014).
  12. Shannon, R. D. Revised effective ionic radii and systematic studies of interatomic distances in halides and chalcogenides. Acta Cryst. 32, 751-767 (1976).
  13. Pore size chart. , Spectrum Laboratories, Inc.. Available from: http://jp.spectrumlabs.com/dialysis/PoreSize.html (2015).
  14. Wakamatsu, Y. Medaka Book, 6.1: Preparation of hatching enzyme. , National BioResource Project (NBRP) Medaka. Available from: [cited 2015] https://shigen.nig.ac.jp/medaka/medakabook/index.php?6.1%20preparation%20of%20hatching%20enzyme (2015).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Toxiciteitsassay voor saliniteitkweekmedium voor embryo shartslagmetingoogdiameter metinglichaamslengtemetingICP MS analysebioaccumulatie van zilveruitkomstpercentage

Gerelateerde artikelen