Driedimensionale Biomimetic Technologie: Novel Biorubber Creëert Defined micro- en macro-schaal Architectures in Collageen Hydrogels

Samenvatting

Er is een innovatieve biofabricagetechniek ontwikkeld om driedimensionale constructies te engineeren die lijken op de architecturale kenmerken, componenten en mechanische eigenschappen van in vivo weefsel. Deze techniek beschikt over een nieuw ontwikkeld opofferbaar materiaal, BSA-rubber, dat gedetailleerde ruimtelijke kenmerken overdraagt en de in vivo architectuur van een grote verscheidenheid aan weefsels reproduceert.

Samenvatting

Weefsel steigers spelen een cruciale rol in het weefsel regeneratieproces. De ideale steiger moet voldoen aan een aantal eisen, zoals het hebben van een goede samenstelling, gerichte modulus, en goed gedefinieerde architectonische kenmerken. Biomaterialen die de intrinsieke structuur van in vivo weefsel herhalen van vitaal belang voor het bestuderen van ziekten en voor de regeneratie van verloren misvormde weke delen te vergemakkelijken. Een nieuwe biofabrication techniek ontwikkeld die geavanceerde imaging, driedimensionale (3D) drukken en selectieve enzymatische activiteit waarmee een nieuwe generatie van biomaterialen voor onderzoek en klinische toepassing. Het ontwikkelde materiaal, runderserumalbumine rubber, is de reactie geïnjecteerd in een mal die specifieke geometrische kenmerken handhaaft. Dit offeren materiaal maakt het mogelijk een adequate overdracht van de architectonische kenmerken van een natuurlijke steiger materiaal. Het prototype bestaat uit een 3D collageen steiger met 4 en 3 mm kanalen die reprESENT een vertakte architectuur. Dit document benadrukt het gebruik van deze biofabrication techniek voor het genereren van natuurlijke constructen. Dit protocol maakt gebruik van een computer-aided software (CAD) aan een vaste matrijs die reactiegegoten met BSA rubber gevolgd door enzymatische digestie van het rubber zal produceren, waardoor de architecturale eigenschappen in de dragermateriaal.

Inleiding

Op het gebied van tissue engineering de mogelijkheid om weefsel steigers fabriceren is van vitaal belang. Een geschikte weefselskelet een 3D structuur bestaat uit biocompatibele materialen, en bootst in vivo weefselarchitectuur naar cel en weefselgroei en remodellering bevorderen. Deze steiger moet het transport van voedingsstoffen en de verwijdering van afvalstoffen ^1-4 toestaan. Een van de belangrijkste obstakels bij de productie van deze steigers is de mogelijkheid om specifieke geometrische kenmerken herhalen in een biocompatibel materiaal. Biofabrication verscheidene technieken zijn gerapporteerd aan de geometrische kenmerken van deze steigers temperen, electrospinning voorbeelden ^5-8, solvent-casting ^{9, 10} stereolithografie en 3D-printen ^11, onder anderen. Deze technieken tekortschieten bij het verstrekken van een relatief eenvoudige overdracht van beheersbare interne en externe architectonische kenmerken, zijn duur, worden beperkt door hun resolutie en bedrukbaarheid ( bijvoorbeeld nozzle gauge, materieel beperking), of vereisen na vervaardigingstechnieken dat een lange tijd levensvatbare stellage ¹² te produceren vereist.

In veel commerciële fabricage systemen, is het ontstaan ​​van holten, kanalen en kenmerken bereikt met zand of andere geschikte verwijderbare of te offeren materiaal. De metalen of plastic deel wordt gevormd rond de zandmal en zodra deze is gestold, wordt het zand verwijderd. In vrijwel dezelfde manier, de volgende generatie van biomaterialen heeft de BioSand equivalent. Daarom werd de BSA rubber ontwikkeld ter vervanging van BioSand. De BSA rubber een nieuw samengestelde materiaal dat uit runderserumalbumine verknoopt met glutaaraldehyd. Het uiteindelijke doel is om specifieke architectonische kenmerken herscheppen in een biologisch afbreekbaar collageen schavot. De kenmerken van de opofferende biorubber die dimensionele getrouwheid handhaaft de vorm van het oorspronkelijke weefsel beschreven.

Meerdere combinaties van BSA en glutaaraldehyde concentraties werden getest met een verscheidenheid van oplosmiddelen. Dit materiaal is gemaakt door de reactie tussen BSA en glutaaraldehyde. BSA rubber kan reactiemengsel geïnjecteerd in de ingewikkelde geometrie van het weefsel vormen. Verknoopte BSA trypsine labiel en gemakkelijk verteerd door het enzym onder milde pH en temperatuuromstandigheden. Omgekeerd intacte type I collageen is zeer resistent tegen trypsine digestie. Deze functies werden gekapitaliseerd voor het selectief verwijderen van de BSA rubber verlaten van het collageen achter. De huidige werkzaamheden bestonden uit het bepalen van de ideale parameters die nodig zijn om een ​​labiele schimmel die specifieke architectonische kenmerken kan leveren aan een biocompatibel schavot te verkrijgen. De specifieke kenmerken die werden geëvalueerd opgenomen mengbaarheid, enzymdigestie, draagkrachtig, en het vermogen om de reactie geïnjecteerd in een negatieve vorm zijn. De combinatie van 30% BSA en 3% glutaaraldehyde aan deze vereisten voldoet. Dit protocol voorziet in de necessary richtlijnen om deze driedimensionale scaffolds te creëren. Het prototype bestaat uit een collageen scaffold dat een vertakte architectuur met een in- en twee uitstroomkanaal met diameters van 4 en 3 mm, respectievelijk vertegenwoordigt. Deze techniek heeft het potentieel om macro- en micro-omgeving van het weefsel van belang na te bootsen. Deze technologie een haalbare techniek om een specifieke geometrische leerzaam leveren aan een biologisch afbreekbaar materiaal in een relatief eenvoudige en geschikte kwestie met hoge getrouwheid, die kunnen worden afgestemd op de in vivo weefsel elasticiteit en andere eigenschappen van het weefsel van belang na te bootsen.

Protocol

1. Bepaal het percentage van vaste stoffen in de Collagen Batch

1. Pak de collageen na een eerder gepubliceerde procedure ^13. Dooi minste 20 ml collageen. Bepaal de initiële percentage collageen vaste stoffen in de batch om de collageenconcentratie manipuleren de hydrogelen.
   1. Snijd drie stukjes aluminiumfolie (ongeveer 6 x 6 cm) en vormen elk een pan met de bodem van een 25 ml bekerglas. Noteer het gewicht van elke pan.
   2. Voeg een kleine hoeveelheid collageen aan elke pan en noteer het totale gewicht van de aluminium pan en collageen. Voeg 0,5-0,8 g collageen op elke aluminium pan.
      Opmerking: Na deze stap zijn er drie aluminiumfolie pannen en elk moet een kleine hoeveelheid collageen hebben. Zorg ervoor dat het gewicht van elk (totaal 3) lege aluminium pan en het gewicht van de pan na de toevoeging van collageen op te nemen.
   3. Bereken het gewicht van het collageen in elke pan behulp van de fadat formule:
      Collageen gewicht = Pan en collageen gewicht - Pan gewicht
   4. Plaats de drie aluminium pannen die het collageen in de oven op 100 ° C gedurende 24 uur aanhouden.
   5. Na 24 uur op te nemen het gewicht van elke aluminium pan en het uitgedroogd collageen.
   6. Bereken het gewicht van het gedroogde collageen met de volgende formule:
      Gedehydrateerde collageen gewicht = Pan en vochtarme collageen gewicht - Pan gewicht
   7. Bereken het percentage vaste stof van de drie monsters aan het collageen vaste concentratie te bepalen volgens de onderstaande formule:
      
   8. Bereken de gemiddelde collageen vaste-stofgehalte van de partij via het percentage collageen vaste stoffen voor elk van de drie monsters.
      Opmerking: Het collageen dat wordt gebruikt is wat overblijft van de gehydrateerde collageen. Geen van de gedroogde collageen wordt gebruikt.
   9. Na het bepalen van het percentage collageen vaste stof (initial collageen concentratie) van de partij, voort te zetten met behulp van de resterende gehydrateerd collageen. Gebruik een gekalibreerde pH-meter om de pH van het collageen batch passen aan 3.
      1. Voeg kleine hoeveelheden (2-5 gl tegelijk) van 12 N zoutzuur (HCl). Blijf op ijs te allen tijde. Niet zoutzuur rechtstreeks aan het collageen - toevoegen van het zuur aan de zijkant van de buis. Na toevoeging van het zuur, de spatel gebruikt om het zuur te duwen aan het collageen en snel roer het mengsel.
   10. Zodra een pH van 3 bereikt, laat het collageen zitten O / N bij 4 ° C.

2. Voorbereiding van de BSA Rubber

1. Bereid de oplossing runderserumalbumine (BSA) volgens de onderstaande procedure.
   1. Bereid 2x fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). Voeg twee PBS tabletten 100 ml water aan 0,02 M PBS-oplossing.
   2. Combineer BSA 2x met PBS tot een 30% BSA-oplossing volgens de procedure hieronder creëren.
      1. Bijvoorbeeld, een 30% BSA maken met 30 ml 2x PBS, gebruik 12,9 g BSA. Voeg 1/3 van de 2x PBS (bijvoorbeeld 10 ml) in een kolf met een roerstaaf. Voeg 1/2 van de BSA (bijvoorbeeld 6,45 g BSA) aan de kolf en met een spatel, nat droge opgeloste stof.
      2. Herhaal deze procedure voor het toevoegen PBS en BSA totdat alle opgeloste stof en oplosmiddel uit de kolf. Gebruik de spatel om alle opgeloste stof bevochtigen. Het zal lijken op een mix van wat vloeistof en bosjes. Laat het zitten voor ongeveer 30 min.
      3. Draai vervolgens de roerder op een lage cyclus en zorg ervoor dat er geen klonten rondom het roerstaafje. Moet 90 min om alles in oplossing te krijgen of kan worden overgelaten roeren O / N bij 4 ° C. Nadat de opgeloste stof wordt alle opgeloste Plaats de oplossing in een 20 ml spuit en afgedekt met een 0,20 urn spuitfilter. Druk op de zuiger om vloeistof te verdrijven door het filter en het verzamelen van de gesteriliseerde oplossing in een nieuwe buis. Bewaren bij 4 ° C.
   3. Bereid 3% glutaraldehyde solutidoor verdunning van 25% glutaaraldehyde oplossing steriel gefiltreerd 2x PBS. Bijvoorbeeld, voor 10 ml van 3% glutaraldehyde-oplossing, gebruik 2 ml 25% glutaaraldehyde en 8 ml 2x PBS. Bewaren bij 4 ° C.

3. Mallen Treatment

Opmerking: De in dit document beschreven prototype maakt gebruik van een op maat gemaakte roestvrijstalen Y mal stuk. De matrijs bevat een instroom en uitstroom twee kanalen 4 en 3 mm, respectievelijk. Ten eerste, schone mallen, spuiten ze met onverzadigde reuzel, en steriliseer hen. Bereid de vormen volgens de hierna beschreven procedure.

1. Schone roestvrij stalen mallen gebruikt sonicator met een frequentie van 35 kHz. Plaats de vormen in de ultrasoonapparaat en dompel ze met water en ijs. Houd de vormen koude allen tijde tijdens de ultrasoonapparaat loopt. Voer het ultrasoonapparaat gedurende 2 perioden van 90 min.
   1. Na elke periode gebruiken een naald om ervoor te zorgen dat er geen materiaal in de Luerslot roestvrij staal of bRass connector. Zeep en water om het gehele oppervlak van beide zijden van de matrijzen te reinigen. Controleer of er geen obstakel in de kanalen.
2. Plaats de mallen, schroeven en Luer lock connector in een autoclaaf zak en autoclaaf is.
3. Vul de fles die hecht aan een lucht spuit halverwege met in de handel verkrijgbaar reuzel (gemengde vetzuur release agent). Plaats de dop met een gewone dop fles. Plaats het in een autoclaaf zak en autoclaaf het.
   Opmerking: Reuzel wordt gebruikt om de afgifte van het materiaal reactiegegoten later zal (BSA rubber) te vergemakkelijken. Plaats het deksel spuitbusfles in de autoclave- kan de interne afdichting beschadigen.
4. Warmen de reuzel voor 45 seconden of totdat het duidelijk en vloeistof in een magnetron. Schroef de lucht spuit deksel aan de reuzel fles. Sluit de deksel met de sproeier. Bevestig de spuit om de lucht bron bij de labtafel. Open de luchtklep, en open het mondstuk van de spuit totdat het begint het bevochtigen van het oppervlakvan een papieren handdoek.
5. Spray reuzel loodrecht op het matrijsoppervlak tot het oppervlak volledig wordt bedekt. Na elk stuk is bespoten, plaats ze in een petrischaal en verzegelen. Plaats de schimmels bij 4 ° C gedurende 2 uur.
6. Ga verder met de mallen steriliseren van het oppervlak aan UV-licht blootgesteld gedurende 30 min. Plaats ze terug bij 4 ° C tot ze klaar zijn om de reactie geïnjecteerd worden.

4. Injectie van de Reactie van de BSA Rubber

Opmerking: Alle materialen en oplossing moet koud blijven tot het eerste gebruik om voortijdige instelling van de BSA rubber in de volgende stappen te voorkomen.

1. Bereid de dispenser voor het leveren van de BSA rubber om de matrijzen de volgende stappen.
   1. Steriliseren alle mengcomponenten (twee O-ringen, spuitkap, dubbele spuit, mengen tip en 4: 1 dispenser) door ze bloot te stellen aan UV licht gedurende 30 min in de polymerasekettingreactie (PCR) kap.
      Opmerking: Een PCR kap werd gebruikt omdat tZijn procedure houdt fixatieven. Deze chemicaliën kunnen niet worden gebruikt in de cel / weefselkweek kap vanwege het risico van blootstelling en toxiciteit voor de cellen. Iedere andere kap die een UV-licht bevat zal geschikt zijn.
   2. Plaats het dopje op de oplossing houder.
   3. Voer de meng- en injectie op een 4: 1 verhouding van BSA glutaraldehyde. Voeg de 30% BSA aan de dubbele spuit kamer die het hoogste bedrag van de oplossing zal opleveren (Het duurt ongeveer 4 ml te nemen in te vullen). Zorg ervoor dat u voldoende ruimte laten aan de O-ring te plaatsen om de overvolle en vervuiling van de aangrenzende kamer te voorkomen.
   4. Voeg 3% glutaaraldehyde oplossing voor de andere kamer (het zal ongeveer 1 ml naar vullen). Zorg ervoor dat u voldoende ruimte laten aan de O-ring te plaatsen om overlopen en vervuiling van de aangrenzende kamer te voorkomen.
   5. Plaats de dubbele spuit op de dispenser. Kantel de montage verticaal, zodat de spuit cap is op de top. Plaats de dop met het mengen tip.
   6. ScREW de twee roestvrij stalen mal stukken samen.
   7. Plaats het aan de binnenzijde van een autoclaaf tas.
   8. Om de lucht in de dispenser verwijderen, houd hem rechtop en snel knijp de handgreep eenmaal een kleine hoeveelheid BSA gemengd met glutaaraldehyde los. Dan snel bevestig de RVS Y mal Luer lock-connector aan de spuit.
   9. Houd de roestvrijstalen Y mal met de linkerhand en de BSA-Glutaraldehyd mengsel dispenser aan de rechterkant. Afwisselende waartoe elk der linker en rechter uitlaat van de uitstroomkanalen door de uitlaat naar de zijkanten van de autoclaafzak te zorgen dat de binnenste holtes gevuld met de oplossing. Dan, plaats de mallen horizontaal en weer te injecteren.
   10. Maak de mallen van de dispenser en plaats in een 25 mm petrischaal.
   11. Plaats Parafilm rond de petrischaal om uitdroging van het rubber te voorkomen.
   12. Plaats de vorm in de 4 ° C koelkast O / N.

5. Aanpassen van de Collageen Concentratie

Opmerking: Het collageen dient op ijs te allen tijde tijdens het proces blijven.

1. Wijzig de collageenconcentratie met het percentage collageen vaste stoffen.
   1. Voeg 10 ml van 1,75% collageen door instelling van de oorspronkelijke collageenconcentratie met koud water.
   2. Met een geijkte pH-meter, op pH 3 met behulp 12 N zoutzuur. Mis zoutzuur niet rechtstreeks aan het collageen voeg het zuur aan de zijkant van de buis. Na toevoeging van het zuur, de spatel gebruikt om het zuur te duwen in het collageen en snel roer het mengsel.
   3. Weeg 4 g collageen in een afzonderlijke conische buis.
   4. Centrifugeer de collageen lucht te verwijderen bij 4 ° C en 9343 g gedurende 20-30 minuten.
   5. UV steriliseren celkweek kap 30 min en voeg 14 ul van laminine voor de 4 ml collageen. Dit resulteert in een uiteindelijke laminine concentratie van 10 ug / ul. Opmerking: Laminine biedt structural integriteit, hechting en bevordert verschillende cellulaire reacties.
   6. Draai de PCR UV licht gedurende 20-30 min alvorens de kap voor sterilisatie.
   7. Plaats de Luer lock dop te hechten aan een 20 ml injectiespuit, in ethanol gedurende een 2 uur. Vervolgens laten drogen en plaats het in UV-licht.
   8. Gamma bestralen het collageen voor 8,6 min tot 1200 cGy bereiken.
      Opmerking: Het zal afhangen van het verval van het cesium source. Stel de tijd om dezelfde dosis te bereiken.

6.Casting Collageen op BSA Rubber

1. Aan het collageen polymeriseren Gebruik een 8: 1: 1 verhouding (collageen: HEPES: MEM). De volgende procedure is gebaseerd op een aanvankelijke 4 g aangezuurde collageen (uit stap 5.1.8).
   1. Voeg een 0,2 N HEPES-oplossing in water en breng de pH op 9 door toevoeging van kleine hoeveelheden (1-5 ui) van 1-5 M natriumhydroxide (NaOH). Met een geijkte pH-meter, bewaken de pH van de oplossing na elke toevoeging. Bewaren bij 4 ° C of keep op ijs.
   2. Zet het UV licht van de weefselkweek kap gedurende 20-30 minuten aan de kap steriliseren.
   3. Autoclaaf tang, spatel en scalpel voor sterilisatie.
   4. Meng 1,5 ml 0,2 N HEPES (pH 9) en 1,5 ml van 10x MEM met de weefselkweek kap. Zorg ervoor om het op ijs en vortex het voor 5 seconden voorafgaand aan het gebruik te houden. Bewaar bij 4 ° C of te houden op ijs.
   5. Om de PCR kap steriliseren, zet het UV-licht gedurende 30 minuten.
   6. Plaats een 12 wells plaat en een 20 ml injectiespuit bij -20 ° C gedurende 10 minuten, of tot gebruik blijven. Opmerking: Houd alle materialen koude totdat klaar voor gebruik. De temperatuurstijging veroorzaakt premature collageen fibrillogenese.
   7. Spray alle buizen en goed platen die zullen worden in de kap met 70% ethanol en laat ze drogen voor sterilisatie. Plaats een 20 ml spuit op ijs afgekoeld voor later gebruik.
   8. In de PCR-kap, opent u de roestvrij stalen mallen om de BSA rubber en met behulp van een scalpel los, snijd de uitlaat kanalen van de BSA rubber schimmel.
   9. Onder de motorkap PCR, open de steriele collageen buizen en voeg 1 ml van de HEPES-MEM-oplossing (zorg ervoor dat voordat het extraheren van de HEPES-MEM-oplossing, dat het goed gemengd en er zijn geen vaste deposito's).
   10. Met de steriele spatel, meng het collageen en bufferoplossing.
   11. Sluiten en vortex snel een goed gemengde hydrogel waarborgen.
   12. Over te dragen aan een koude 20 ml spuit.
   13. Met één hand de BSA Rubber binnenkant van de put en, met de andere afzien helft van het collageen hydrogel oplossing op de bodem van de put.
   14. Met behulp van de steriele pincet, ervoor te zorgen dat de rubberen in- en uitstroom uiteinden goed raken de zijkanten van het.
   15. Pour collageenoplossing bovenop het rubber tot volledig bedekt.
   16. Controleer of de BSA rubber in het collageen is opgehangen en dat er geen luchtbellen, in het bijzonder nabij de uiteinden van de rubber.
   17. Plaats het deksel en wikkel Parafilm rond deomtrek van de put.
   18. Zet in de incubator gedurende 1 uur bij 37 ° C. Houd de PCR UV-licht op.
2. Na de polymerisatie van het collageen, UV verknopen de hydrogel via de volgende procedure.
   Opmerking: De verknoping van het collageen wordt uitgevoerd met een UV crosslinker inrichting waarin de hoeveelheid energie kan worden bestuurd.
   1. Schakel de UV crosslinker en wordt de energie instelling om de lege ruimte te bestralen met 630.000 uJ / cm ^2.
   2. Verwijder de gels uit de incubator.
   3. Spray handen met ethanol, en, binnen de kamer, verwijdert u het deksel zo snel mogelijk.
   4. Sluit de tank en UV verknopen de hydrogelen van de energie-instelling te selecteren en bestralen 630.000 uJ / cm ^2.
   5. Na de verknoping cyclus, zet het UV-licht op de PCR-kap
   6. Spray handen met ethanol en open de kamer snel plaatsen van het deksel weer op de wells plaat. Verplaats de well plaatde PCR kap.
   7. Met behulp van de steriele spatel voorzichtig los te maken en verwijder de gel uit de put. Flip de gels onder de motorkap naar de bodem van de hydrogel verknopen. Herhaal stap 6.2.3 en 6.2.4.

7. enzymdigestie van de BSA Rubber

1. Met het oog op een holle collageen schavot hebben, verwijderen BSA rubber op een manier die geen afbreuk doet aan de afmetingen ingebed in de hydrogel. De procedure wordt hieronder beschreven.
   1. Zet het UV-licht voor 20-30 min naar de weefselkweek kap steriliseren.
   2. Voeg 0,25% trypsine-oplossing pH 7,8. Bijvoorbeeld, voor 15 ml water, voeg 0,0376 g trypsine in een 50 ml conische buis. Breng de pH op 7,8 door toevoeging van kleine hoeveelheden (2-5 ul) van 1 M NaCl. Plaats de oplossing in een 20 ml spuit en afgedekt met een 0,20 urn spuitfilter. Druk op de zuiger om vloeistof te verdrijven door het filter en het verzamelen van de steriele oplossing in een nieuwe buis.
   3. Zet het waterbad en zet de temperatuur tot 30° C.
   4. Na 30 min, zet het UV-licht. Spray ethanol over alle buizen en materialen die worden gebruikt in de kap.
   5. Breng de collageen hydrogel onder de motorkap en plaats in een aparte conische buis.
   6. Voeg ongeveer 3-5 ml (net genoeg om de gels te dekken) van 0,25% trypsine-oplossing met een pH van 7,8 aan elke buis.
   7. Sluit de buizen met Parafilm en vortex lichtjes gedurende ongeveer 1 minuut.
   8. Plaats in de 30 ° C waterbad gedurende 15-24 uur. Terwijl in het waterbad, licht vortex de gels dikwijls tot de BSA rubber is geknipt of uit de hydrogel.
      Opmerking: Om te bepalen of de BSA rubber is verwijderd, ofwel de rubber drijft in de trypsine oplossing of er kapotte stukken. Er mogen geen visuele donkere gebieden binnen de hydrogel.
2. Om ervoor te zorgen dat alle BSA rubber en trypsine heeft uit de hydrogels is verwijderd, spoel het zoals hieronder beschreven.
   1. Zet de PCR hood UV-licht voor 20-30 min.
   2. Bereid Mosconas oplossing. Combineer kaliumchloride (KCl, 28,6 mM), _(NaHCO3, 11,9 mM), glucose (9,4 mM) en (NaH _{2PO 4,} 0,08 mM) in water. Pas de pH op 7,4 met 1 M NaOH of 12 M HCl-oplossing. Plaats de oplossing in een 20 ml spuit en gebruik een spuitfilter van 0,20 urn om de oplossing te steriliseren.
   3. Spray alles met ethanol voordat ze op de kap en laat de ethanol te drogen.
   4. Open de tube en breng 5-10 ml steriele Mosconas oplossing voor een nieuwe 50 ml conische buis.
   5. Breng de collageen hydrogel de conische buis die de enzymoplossing bevat. Zorg ervoor dat de hydrogel volledig bedekt is met de oplossing. Laat de buis in de shaker in de koelkast bij 4 ° C gedurende 30 minuten.
   6. Zuig het Mosconas oplossing en herhaal stap 7.2.5 tweemaal.
   7. Bewaren bij 4 ° C.

Resultaten

De resultaten tonen aan dat dit biofabrication techniek efficiënt in het genereren van 3D draagstructuren die de ruimtelijke rangschikking gezien in vivo weefsel nabootsen. De architectonische kenmerken zijn vitale parameters voor weefselregeneratie toepassing, spelen een cruciale rol in de in vivo cel interactie en functionaliteit van het weefsel.

De consistentie en mengbaarheid van de BSA rubber was een bel...

Discussie

Biofabrication is een zeer multidisciplinair veld waarin biologie en engineering principes fuseren tot complexe materialen die thuishoren weefsel na te bootsen te genereren. Om dit te bereiken, is er een behoefte aan technieken die de informatie uit in vivo weefsel gebruiken en deze in een in vitro scaffold ontwikkelen. Zo kan een platform worden gemanipuleerd dat lijkt op het architectonische, functionele en mechanische eigenschappen van het weefsel in vivo. De optimale steigermateriaal moete...

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Collageen type I			Collageen uit rundsleder
Zoutzuur (HCl)	Sigma-Aldrich	7647-01-0
Fosfaatbufferoplossing (PBS-tabletten)	MP Biomedical	U5378	1 tablet per 100 ml maakt 1x PBS
Albumine uit runderserum (BSA)	Sigma-Aldrich	A9647
Glutaraldehyde	Sigma-Aldrich	G5882	Toxisch
Reuzel	Fields	3090
Roestvrijstalen mallen			Gemaakt met Microlution Machine
Luchtspuitset	Central Pneumatic	47791
Mengtip voor dubbele spuit	Medmix	ML2.5-16-LLM	Mixer, DN2,5X16, 4:1 bruin, med
Kleine O-ring voor dubbele spuit	Medmix	PPB-X05-04-02SM	Piston B, 5 ml, 4:1, PE naturel
Deksel dubbele spuit	Medmix	VLX002-SM	Deksel, 4:1/10:1, PE bruin, med
Grote O-ring voor dubbele spuit	Medmix	PPA-X05-04-02SM	Piston A, 5 ml, 4:1
Dubbele spuit	Medmix	SDL X05-04-50M	Dubbele spuit, 5 ml, 4:1
Dubbele spuitdispenser	Medmix	DL05-0400M	Dispenser, 5 ml, 4:1, med, gewoon
Laminim			3.6 mg/ml - geëxtraheerd USC lab
20 ml spuit Luer Lock Tip	BD	302830
Luer Lock doppen	Fisher	JGTCBLLX
HEPES	Sigma-Aldrich	H4034
Gibco Minimum Essential Media 10x (MEM)	Life Technologies	1143-030
Trypsine	Life Technologies	27250-018
UV Crosslinker	Spectroline UV	XLE1000
Natriumchloride (NaCl)	Fisher	S271-10	Om Mosconas voor te bereiden
Kaliumchloride (KCl)	Sigma-Aldrich	P5405-250	Om Mosconas voor te bereiden
Natriumbicarbonaat (NaHCO3)	Fisher	BP328-500	Om Mosconas voor te bereiden
Glucose	Sigma-Aldrich	G-8270	Om Mosconas voor te bereiden
Natriumfosfaat didasisch (NaH2PO4)	Sigma-Aldrich	S-7907	Om Mosconas voor te bereiden
Steriele filter voor spuiten	Corning	431224