Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

HSV-Mediated Transgene Expressie van Chimere constructen tot Behavioral functie van GPCR heteromeren in Muizen Studie

6.5K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/53717

⸱

9 juli 2016

 ,  , 
1Department of Psychiatry, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 2Department of Neurology, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 3Friedman Brain Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 4Department of Physiology and Biophysics, Virginia Commonwealth University Medical School

In dit artikel

Samenvatting

In dit artikel wordt beschreven hoe u virale vectoren te injecteren in de muis frontale cortex gedragsproblemen assays die GPCR heteromere vorming nodig te testen.

Samenvatting

Het heteromere receptorcomplex tussen 5-HT2A en mGlu2 is betrokken gebleken bij sommige van de gedragsfenotypes in muismodellen van psychose1,2. Bijgevolg vertegenwoordigt het onderzoek naar structurele details van de interactie tussen 5-HT2A en mGlu2 die schizofrenie-gerelateerd gedrag beïnvloedt, een krachtig translationeel hulpmiddel. Zoals eerder is aangetoond, wordt de head-twitch reactie (HTR) bij muizen veroorzaakt door hallucinogeen drugs en dit gedragsreactie ontbreekt in 5-HT2A knockout (KO) muizen3,4. Bovendien werd door het conditioneel tot expressie brengen van de 5-HT2A receptor alleen in de cortex aangetoond dat 5-HT2A receptor-afhankelijke signaalroutes op corticale piramideneuronen voldoende zijn om head-twitch gedrag te veroorzaken in reactie op hallucinogeen drugs3. Ten slotte is aangetoond dat de head-twitch gedragsreactie geïnduceerd door de hallucinogenen DOI en lyserginezuurdiethylamide (LSD) significant verminderd is in mGlu2-KO muizen5. Deze bevindingen suggereren dat mGlu2 ten minste gedeeltelijk noodzakelijk is voor de 5-HT2A receptor-afhankelijke psychose-achtige gedragseffecten geïnduceerd door LSD-achtige drugs. Dit levert echter geen bewijs of het 5-HT2A-mGlu2 receptorcomplex noodzakelijk is voor dit gedragsfenotype. Om deze vraag aan te pakken, werden herpes simplex virus (HSV) constructen gebruikt om het mGlu2 of mGlu2ΔTM4N (mGlu2/mGlu3 chimerische construct dat het 5-HT2A-mGlu2 receptorcomplex niet vormt) in de frontale cortex van mGlu2-KO muizen tot expressie te brengen om te onderzoeken of dit GPCR heteromere complex noodzakelijk is voor de gedragseffecten geïnduceerd door LSD-achtige drugs6.

Inleiding

Hallucinogenen zoals LSD, psilocybine en mescaline leiden tot significante veranderingen in het menselijk bewustzijn, cognitie en emotie 7-9. Inactivering van serotonine 5-HT2A receptor signalering door hetzij genetische of farmacologische benaderingen veroorzaakt aanzienlijk verzwakt gedragsreacties hallucinogenen zowel diermodellen 3,10 en 11 mens. Hoewel hallucinogenen binden andere receptorsubtypen 8, wordt de 5-HT2A receptor geacht voor de unieke gedragsactiviteit van deze stoffen.

Groep II metabotrope glutamaatreceptoren (bijv., MGlu2 en mGlu3) hebben het doelwit van veel aandacht met betrekking tot de moleculaire mechanisme van hallucinogenen en hun integrale rol onderliggende psychose 12 geweest. Eerder is aangetoond dat muizen zonder expressie van mGlu2 eiwit (mGlu2-KO muizen) ongevoelig zijn voor de cellulaire en gedragseffecten van hallucinogens 5. Ook is gesuggereerd dat het 5-HT2A en mGlu2 receptoren vormen een specifiek heteromeer complex waardoor serotonine en glutamaat liganden moduleren het patroon van G-eiwit koppelen in levende cellen 1,2.

Structureel, transmembraan (TM) domeinen 4 en 5 van mGlu2 speelt een fundamentele rol in heteromerische formatie met de 5-HT 2A receptor 5. Bovendien, verder onderzoek aangetoond dat drie residuen die aan het intracellulaire eind TM4 van mGlu2 noodzakelijk om de 5-HT2A receptor -mGlu2 heterocomplex in levende cellen 6 vormen.

Op basis van deze bevindingen waargenomen bij heterologe expressiesystemen Hier beschrijven we het gebruik van HSV-gemedieerde expressie van wildtype mGlu2 en mGlu2 / mGlu3 chimere constructen in de frontale cortex van mGlu2-KO muizen te testen of heteromere vorming tussen 5-HT2A mGlu2 en is nodig voor dehead-twitch gedrag geïnduceerd door hallucinogene 5-HT 2A receptor agonisten.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

LET OP: Alle procedures voor het fokken van dieren en zorgen werden uitgevoerd volgens de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) regulering van Icahn School of Medicine op de berg Sinaï. Zorg ervoor dat u steriele handschoenen te gebruiken tijdens de gehele procedure.

1. Drug en Virus Voorbereiding

  1. drug Voorbereiding
    1. Bereid 15,0 ml ketamine / xylazine anesthesie door het oplossen van 1,35 ml 100 mg / ml Ketamine en 0,75 ml 20 mg / ml xylazine in 12,9 ml 0,9% zoutoplossing. Meng oplossing.
  2. viruspreparaat
    1. Kloon de mGlu2 en mGlu2ΔTM4N constructen in een bicistronische herpes simplex virus (HSV) vector volgende standaardprotocollen eerder beschreven 6. Verpak de virale deeltjes zoals hiervoor beschreven 6,13,14. Substitutie van residuen Ala-677 4.40, Ala-681 4.44 en 4.48 Ala685 in mGlu2 voor Ser686 4,40, PhE690 4,44 en Gly-694 4,48 in mGlu3 (HA-mGlu2ΔTM4N) zijn eerder beschreven 6.
      Opmerking: Het is eerder aangetoond dat het chimere construct HA-mGlu2ΔTM4N is vastgesteld op het plasmamembraan met intacte G-eiwit-afhankelijke signalering 6.
    2. WINKEL virale vectoren -80 ° C wanneer niet in gebruik. Dooi virale vector op ijs, en vervolgens aliquot in 10 ul porties. Voor de chirurgische procedure op ijs bewaren.

2. Chirurgie

  1. chirurgie voorbereiding
    1. Weeg muis en injecteer de muis met de juiste dosis van ketamine / xylazine cocktail (voor details, zie punt 1.1.1).
    2. Controleer de muis om te zien of de juiste verdoofd, knijp voet en de staart van pijn reactie, als niet in staat om een ​​reactie uit te lokken, is de muis goed verdoofd.
    3. Scheren muis hoofd van de basis van de schedel tot aan de punt van de neus met behulp van clippers. Toepassen oftalmische gel om de muis afterward blindheid van de muis voorkomen.
    4. Laad elke spuit op het stereotactische frame. tilt dan loodrechte gedeelte van elke arm van de stereotaxisch frame zodat ze 10 graden van de normaal. Zorgen dat de armen gekanteld, zodanig dat de naalden tegenover elkaar.
    5. Reinig elke spuit door het vullen van de naald met 70% ethanol. Vul de naald ten minste driemaal zodat de injectiespuit schoon.
    6. Zodra de naald is schoongemaakt, spoelt de naald door het vullen van de naald met dubbel gedestilleerd H 2 O. Eenmaal gespoeld, vul elke naald met 1,3 pi dubbel gedistilleerd H 2 O. Draai de plunjer van de spuit om 0,3 ui dubbel gedestilleerd H2O vrijgeven Als water kralen op het puntje van de naald, veeg water weg. Als er niets komt uit de spuit, duw de zuiger helemaal naar beneden en herhaal het schoonmaken van de spuit.
    7. Na het vullen met water, dan trek de spuit vullen van de spuit met0,5 ul van de lucht.
    8. Zodra de lucht en water zijn in de spuit voorzichtig de spuit te vullen met 1,3 ul van het virus oplossing. Op dit punt ervoor te zorgen dat het totale volume in de spuit 2,8 pi. Gaan krullen de punt van de spuit 0,3 pi virus vrij. Als er vloeistof kralen aan de punt van de naald voorzichtig weg te vegen vloeistof. Als er niets komt uit de spuit, duw de zuiger helemaal naar beneden en herhaal het schoonmaken van de spuit.
  2. Chirurgie
    1. Maak de muis om de stereotaxische frame, en zorg ervoor dat de stereotaxische kader aan te passen, zodat de schedel is vlak en waterpas. Toepassen povodine jodium blootgestelde hoofdhuid. Met behulp van een scalpel, maak een sagittale incisie langs de middellijn van de schedel binnen het blootgestelde geschoren gebied. Bevestig vervolgens de Buret klemmen om de huid op de incisie site om ervoor te zorgen dat de schedel blijft blootgesteld.
    2. Gebruik H 2 O 2 om weg te ontbinden het beenvlies aan de hechtingen van het blootstellenschedel. Nu de bregma en hechtingen zichtbaar zijn, moet u de stereotaxische kader aangepast om ervoor te zorgen dat de schedel niveau.
    3. Lijn de naaldpunten van de spuiten met de bregma en de coördinaten van de bregma nemen. Bereken de coördinaten waar de naalden zullen worden ingevoegd.
      1. Voor de Rostral-Cauldal (RC) vlak, voeg 1,6 mm om de opgenomen RC bregma coördinaten (1,6 van Bregma). Voor de dorsale-ventrale (DV) vlak aftrekken 2,4 mm uit de opgenomen DV bregma coördinaten (-2,4 van Bregma).
      2. Tot slot, voor de mediale laterale (ML) vlak, voeg 2,6 mm om de opgenomen ML bregma coördinaten (2,6 van Bregma). Voor alle coördinaten zeker zowel links als rechts coördinaten nemen, aangezien dit een bilaterale injectie.
    4. Breng de naald op de gewenste coördinaten. Markeer de plaatsen waar de naalden zullen worden ingebracht en met een boor, boor de gemarkeerde gebieden.
    5. Met een wattenstaafje applicator wipe weg overtollige bloed of bot fragment.
    6. Breng de naalden aan de schedel waar de uiteinden van de naalden het oppervlak van de hersenen raken. Laat dan de naalden naar de gewenste coördinaten te langzaam verlaagd.
    7. Zodra de naalden in de gewenste coördinaten injecteer langzaam de inhoud van de spuit door het verdraaien van de zuiger van de naald 0,1 gl per minuut in de loop van 5 min (in totaal 0,5 ui).
    8. Zodra de injectie heeft plaatsgevonden laat de spuit in cortex nog eens 5 min.
  3. Closing Up / Verzorging
    1. Verwijder de naalden uit de muis cortex gelijkmatig en langzaam. Verwijder vervolgens de muis uit de stereotaxische frame.
    2. Solliciteer cyanoacrylaat (dermal lijm) aan de basis flappen van de huid van de incisie en vervolgens met een pincet grijpen de kleppen van de huid en leg ze samen.
    3. Laat de cyanoacrylaat drogen. Plaats de muis in de kooi meer dan een verwarmingselement (verwarmingselement is facultatief indien de surgical suite wordt gehouden in het kader van RT van 37 ° C - anders niet nodig). Zorg ervoor dat de muis te plaatsen op een papieren handdoek om ervoor te zorgen dat beddengoed niet houden aan chirurgische plaats.
    4. Afhankelijk van de lengte van de chirurgische procedure op dat de muizen van anesthesie binnen 30 - 60 minuten na behandeling. Na de operatie wordt het dier geplaatst in zijn eigen kooi en gevolgd totdat het bewuste alvorens terug te keren naar de kamer te herstellen wordt. Nr analgetica gebruikt postoperatief, omdat de resultaten van onze experimenten kan wijzigen door het wijzigen van enkele van de hersenen biochemische routes. Echter, worden de dieren gecontroleerd tot ze herstellen van narcose op de dag van de operatie, en dagelijks na de operatie op tekenen van infectie en evaluatie van pijn / distress.

3. Head Twitch Response Experiment

  1. Opstelling
    1. Voer alle gedrags-testen 10:00-14:00, 2-3 dagen na stereotaCTIC injectie van virale deeltjes.
    2. Te (±) -1- (2,5-dimethoxy-4-joodfenyl) -2-aminopropaan hydrochloride (DOI) in een 0,9% zoutoplossing tot 2,0 mg / kg. Ook bereiden een 0,9% zoutoplossing.
    3. Bereid een kooi (28 x 18 x 15 cm) zonder beddengoed en het gebruik van een tri-pod, stel een camera, zodat het zicht van de videocamera is direct boven de kooi.
    4. Wennen de muizen om de kamer ten minste 4 uur voor het begin van het experiment.
    5. Het opzetten van een camcorder op het hoofd twitch opnemen.
  2. Experiment
    1. Plaats de camera, zodat het direct boven een kooi. Kalibreer de camera zodat de gehele kooi in het gezichtsveld.
    2. Weeg muis en injecteer muis intraperitoneaal met geschikte dosis van ofwel 0,9% zoutoplossing of DOI (0,01 ml / g). Opmerking: Als een muis weegt 25 gram, dienen dosis tot een totaal volume van 0,25 ml.
    3. Plaats elke muis terug in hun eigen kooi for 10 min. Na 10 min, plaats muis in het midden van de lege kooi en valideren dat er geen dode hoeken in het gezichtsveld van de camera. Druk op record op de camcorder. Verlaat de kamer.
      LET OP: de muis bewegingen en verschillende gedragsreacties daarin (... Hoofd trillen, oor scratch, etc Raadpleeg aanvullende gegevens tabel 1 van Gonzalez-Maeso et al 2007 voor de volledige lijst van gedragsreacties veroorzaakt door DOI) 3, zal worden opgenomen voor 30 minuten. Daarom is het belangrijk dat er geen dode hoeken in het gezichtsveld opgenomen.
    4. Na 30 min stoppen met opnemen op de camcorder en plaats de muis terug in de oorspronkelijke huis kooi. Herhaal dit proces voor elke muis.
  3. recensie
    1. Laat elke scheidsrechter beoordeling van de tapes te verblinden voor de experimentele omstandigheden van de muis (bijv., Drugs gebruikt tijdens het hoofd twitch experiment of virus gebruikt tijdens intracraniële injectie)). Handmatig op te nemen elk hoofd twitch throughout van de video.
      OPMERKING: Head-kramp wordt gedefinieerd als een snelle schudden hoofdbewegingen uitgevoerd door een muis (aanvullende video).
    2. Voor elke muis, het gemiddelde van de laatste HTR reactie van de drie totalen van de blinde scheidsrechters. Toen de groep deze waarden door de experimentele conditie en het uitvoeren van statistische analyses (bijv., T-test of ANOVA).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Eerdere bevindingen tonen aan dat het hoofd-kramp murine gedragsreactie betrouwbaar en robuust opgewekt door hallucinogenen, en het is afwezig bij 5-HT2A -Ko 3 muizen. Verder is aangetoond dat het hoofd-spierrespons opgewekt door hallucinerende 5-HT2A agonisten DOI en LSD significant verlaagd in mGlu2-KO muizen 5. Hoewel eerdere bevindingen overtuigend aangetoond dat 5-HT 2A en mGlu2 geassembleerd als een heteromeer complex in vi...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Overzicht van eerdere bevindingen in mGlu2-KO muizen 5, de resultaten mGlu2 en mGlu2 / mGlu3 chimere constructen die de 5-HT2A -mGlu2 receptorcomplex in gekweekte cellen vormen suggereren dat de 5-HT2A -mGlu2 heteromere receptorcomplex muis frontale cortex is nodig om het hoofd-twitch gedrag te induceren door LSD-achtige hallucinogene 5-HT 2A receptor agonisten. Een beperking van deze methode is dat het niet dicht moleculaire omgeving heeft gemeten op een subcellulair niveau n...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

NIH R01MH084894 deel aan de financiering van deze studie. We danken Drs. Yasmin Hurd en Scott Russo op Mount Sinai School of Medicine voor de donatie van muizen en het gebruik van hun operatie en het gedrag faciliteiten tijdens het filmen van dit werk.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
mGlu2 bicitronisch herpes simplex virus (HSV) vector MIT CoremGlu2 en mGlu2DTM4N werden gesubcloneerd in de bicitronische HSV-GFP virus vector p1005+ HSV die GFP tot expressie brengt onder controle van de CMV promotor. Virale deeltjes werden geproduceerd door de Viral Core Facility van het McGovern Institute (MIT). Voor meer informatie, neem contact op met de directeur, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu)
mGlu2ΔTM4N bicitronisch herpes simplex virus (HSV) vector MIT CoremGlu2 en mGlu2DTM4N werden gesubcloneerd in de bicitronische HSV-GFP virus vector p1005+ HSV die GFP tot expressie brengt onder controle van de CMV promotor. Virale deeltjes werden geproduceerd door de Viral Core Facility van het McGovern Institute (MIT). Voor meer informatie, neem contact op met de directeur, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu)
GFP bicitronisch herpes simplex virus (HSV) vector MIT CoremGlu2 en mGlu2DTM4N werden gesubcloneerd in de bicitronische HSV-GFP virus vector p1005+ HSV die GFP tot expressie brengt onder controle van de CMV promotor. Virale deeltjes werden geproduceerd door de Viral Core Facility van het McGovern Institute (MIT). Voor meer informatie, neem contact op met de directeur, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu)
Xylazine LloydLijst nr. 4811-20ml, NADA #139-236, NDC Code(s): 61311-481-101.35 ml van ketamine (100 mg/ml) + 0.75 ml van xylazine (20 mg/ml) worden verdund in 12.0 ml van 0.9% zoutoplossing
Ketamine VedcoKetaVed-10ml, NADA #200-029, NDC Code(s): 50989-161-061.35 ml van ketamine (100 mg/ml) + 0.75 ml van xylazine (20 mg/ml) worden verdund in 12.0 ml van 0.9% zoutoplossing
Ophthalmisch gelFisher ScientificNC0550805
Burret clipsFisher ScientificNC9268369
Feather chirurgisch mesFisher ScientificNC9032736
WaterstofperoxideFisher Scientific19-898-919 
Hamilton spuitFisher Scientific14815203
Hamilton™ Kleine Hub Verwijderbare Nadelen (33 Ga)Fisher Scientific14816206
Snoerloze Micro BoorFisher ScientificNC9089241
Dermabond Dermaal AdhesiefFisher ScientificNC0690470
(±)-1-(2,5-Dimethoxy-4-iodofenyl)-2-aminopropaan hydrochloride (DOI)Sigma-Aldrich42203-78-1Opgelost in 0.9% zoutoplossing tot de concentratie van 2.0 mg/kg

Referenties

  1. Fribourg, M., et al. Decoding the Signaling of a GPCR Heteromeric Complex Reveals a Unifying Mechanism of Action of Antipsychotic Drugs. Cell. 147 (5), 1011-1023 (2011).
  2. Gonzalez-Maeso, J., et al. Identification of a serotonin/glutamate receptor complex implicated in psychosis. Nature. 452 (7183), 93-97 (2008).
  3. Gonzalez-Maeso, J., et al. Hallucinogens Recruit Specific Cortical 5-HT(2A) Receptor-Mediated Signaling Pathways to Affect Behavior. Neuron. 53 (3), 439-452 (2007).
  4. Gonzalez-Maeso, J., et al. Transcriptome fingerprints distinguish hallucinogenic and nonhallucinogenic 5-hydroxytryptamine 2A receptor agonist effects in mouse somatosensory cortex. J Neurosci. 23 (26), 8836-8843 (2003).
  5. Moreno, J. L., Holloway, T., Albizu, L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Metabotropic glutamate mGlu2 receptor is necessary for the pharmacological and behavioral effects induced by hallucinogenic 5-HT2A receptor agonists. Neurosci Lett. 493 (3), 76-79 (2011).
  6. Moreno, J. L., et al. Identification of Three Residues Essential for 5-HT2A-mGlu2 Receptor Heteromerization and its Psychoactive Behavioral Function. J Biol Chem. 287, 44301-44319 (2012).
  7. Geyer, M. A., Vollenweider, F. X. Serotonin research: contributions to understanding psychoses. Trends Pharmacol Sci. 29 (9), 445-453 (2008).
  8. Nichols, D. E. Hallucinogens. Pharmacol Ther. 101 (2), 131-181 (2004).
  9. Hanks, J. B., Gonzalez-Maeso, J. Animal models of serotonergic psychedelics. ACS Chem Neurosci. 4 (1), 33-42 (2013).
  10. Fiorella, D., Rabin, R. A., Winter, J. C. Role of 5-HT2A and 5-HT2C receptors in the stimulus effects of hallucinogenic drugs. II: Reassessment of LSD false positives. Psychopharmacology (Berl). 121 (3), 357-363 (1995).
  11. Vollenweider, F. X., Vollenweider-Scherpenhuyzen, M. F., Babler, A., Vogel, H., Hell, D. Psilocybin induces schizophrenia-like psychosis in humans via a serotonin-2 agonist action. Neuroreport. 9 (17), 3897-3902 (1998).
  12. Moreno, J. L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Group II metabotropic glutamate receptors and schizophrenia. Cell Mol Life Sci. 66 (23), 3777-3785 (2009).
  13. Kurita, M., et al. HDAC2 regulates atypical antipsychotic responses through the modulation of mGlu2 promoter activity. Nat Neurosci. 15 (9), 1245-1254 (2012).
  14. Kurita, M., et al. Repressive Epigenetic Changes at the mGlu2 Promoter in Frontal Cortex of 5-HT2A Knockout Mice. Mol Pharmacol. 83 (6), 1166-1175 (2013).
  15. Rives, M. L., et al. Crosstalk between GABAB and mGlu1a receptors reveals new insight into GPCR signal integration. Embo J. 28 (15), 2195-2208 (2009).
  16. Milligan, G. The Prevalence, Maintenance and Relevance of GPCR Oligomerization. Mol Pharmacol. (84), Epub ahead of print 158-169 (2013).
  17. Ferre, S., et al. G protein-coupled receptor oligomerization revisited: functional and pharmacological perspectives. Pharmacol Rev. 66 (2), 413-434 (2014).
  18. Gonzalez-Maeso, J. GPCR oligomers in pharmacology and signaling. Mol Brain. 4 (1), 20(2011).
  19. Gonzalez-Maeso, J. Family a GPCR heteromers in animal models. Front Pharmacol. 5, 226(2014).
  20. Dragulescu-Andrasi, A., Chan, C. T., De, A., Massoud, T. F., Gambhir, S. S. Bioluminescence resonance energy transfer (BRET) imaging of protein-protein interactions within deep tissues of living subjects. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (29), 12060-12065 (2011).
  21. Calebiro, D., et al. Single-molecule analysis of fluorescently labeled G-protein-coupled receptors reveals complexes with distinct dynamics and organization. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (2), 743-748 (2013).
  22. Fonseca, J. M., Lambert, N. A. Instability of a class a G protein-coupled receptor oligomer interface. Mol Pharmacol. 75 (6), 1296-1299 (2009).
  23. Hern, J. A., et al. Formation and dissociation of M1 muscarinic receptor dimers seen by total internal reflection fluorescence imaging of single molecules. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (6), 2693-2698 (2010).
  24. Hlavackova, V., et al. Sequential inter- and intrasubunit rearrangements during activation of dimeric metabotropic glutamate receptor 1. Sci Signal. 5 (237), 59(2012).
  25. Irannejad, R., et al. Conformational biosensors reveal GPCR signalling from endosomes. Nature. 495 (7442), 534-538 (2013).
  26. Calebiro, D., Nikolaev, V. O., Persani, L., Lohse, M. J. Signaling by internalized G-protein-coupled receptors. Trends Pharmacol Sci. 31 (5), 221-228 (2010).
  27. Celada, P., Puig, M. V., Diaz-Mataix, L., Artigas, F. The hallucinogen DOI reduces low-frequency oscillations in rat prefrontal cortex: reversal by antipsychotic drugs. Biol Psychiatry. 64 (5), 392-400 (2008).
  28. Béïque, J. -C., Imad, M., Mladenovic, L., Gingrich, J. A., Andrade, R. Mechanism of the 5-hydroxytryptamine 2A receptor-mediated facilitation of synaptic activity in prefrontal cortex. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (23), 9870-9875 (2007).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

HSV transgene expressieinjectie in de frontale cortexhoofdkruid responsstereotactische chirurgiemGlu2 knockoutmuizen5 HT2A receptorgedragsfenotypesimmunocytochemieWestern blot
HSV-Mediated Transgene Expressie van Chimere constructen tot Behavioral functie van GPCR heteromeren in Muizen Studie
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.