Glaucoom wordt gekenmerkt door schade aan retinale ganglioncellen. Het induceren van glaucoom in diermodellen kan inzicht geven in de studie van deze ziekte. Hier schetsen we een procedure die verlies van RGC's induceert in een in vivo rattenmodel en de voorbereiding van gehele netvliezen voor analyse demonstreert.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Glaucoom is een ziekte van het centrale zenuwstelsel die retinale ganglioncellen (RGC's). RGC axonen die deel uitmaken van de oogzenuw te voeren visuele input naar de hersenen voor visuele waarneming. Schade aan RGC en hun axonen leidt tot verlies van het gezichtsvermogen en / of blindheid. Hoewel de specifieke oorzaak van glaucoom is niet bekend, de belangrijkste risicofactor voor de ziekte een verhoogde intraoculaire druk. Glaucoom inducerende procedures in diermodellen een waardevol hulpmiddel voor onderzoekers bestuderen van het mechanisme van RGC dood. Dergelijke informatie kan leiden tot de ontwikkeling van effectieve neuroprotectieve behandelingen die kunnen helpen bij het voorkomen van gezichtsverlies. Het protocol in dit document beschrijft een werkwijze voor het induceren glaucoom - achtige omstandigheden in een in vivo rattenmodel wanneer 50 gl 2 M hypertone zoutoplossing wordt geïnjecteerd in de episclerale veneuze plexus. Blancheren van de schepen geeft succesvolle injectie. Deze procedure veroorzaakt verlies van RGCs glaucoom simuleren. Een maand nainjectie worden de dieren opgeofferd en ogen verwijderd. Next, het hoornvlies, lens en glasvocht worden verwijderd om een oogschelp te maken. Het netvlies wordt dan afgepeld van de achterzijde van het oog en vastgemaakt op Sylgard gerechten met cactusnaalden. Op dit punt kunnen neuronen in het netvlies worden gekleurd voor analyse. De resultaten van dit lab blijkt dat ongeveer 25% van RGC verloren binnen een maand na de procedure in vergelijking met interne controles. Deze procedure maakt de kwantitatieve analyse van retinale ganglion celdood in een in vivo rat model glaucoom.
Inleiding
Glaucoom is een groep van oogziekten invloed neuronen in het netvlies, in het bijzonder, de retinale ganglioncellen 1-2. De axonen van deze cellen convergeren naar de oogzenuw uitvoering visuele informatie naar de hersenen waar het zicht wordt waargenomen worden. Schade aan RGC en hun axonen veroorzaakt daarom visuele gebreken.
De belangrijkste kenmerken die geassocieerd worden met glaucoom aandoeningen zijn RGC degeneratie en dood, verhoogde intra-oculaire druk (IOP) en optische schijf cupping en atrofie. Deze kenmerken leiden tot gezichtsveld verlies of volledige, onomkeerbare blindheid. Op dit moment, glaucoom heeft blindhei....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle procedures met behulp van proefdieren zijn in overeenstemming met de normen van het Institute for Animal Care en gebruik Comite (IACUC) aan Western Michigan University geweest.
1. Dieren
- Gebruik mannelijke en vrouwelijke ratten leeftijd van 3 maanden in deze studie.
- Houd dieren in een 12 uur licht / donker cyclus met vrije toegang tot voedsel en water.
2. Voorbereiding van de KAX Cocktail for Animal Anesthesie
- Los 50 mg xylazine (20 mg / ml) in 5 ml ketamine (100 mg / ml) met 1 ml acepromazine (10 mg / ml) en 3 ml gedestilleerd water. Meng goed.
- Steriliseren....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
In dit gedeelte van de inrichting onderdelen en procedure voor glaucoom-achtige omstandigheden in een in vivo ratten glaucoom te induceren. We tonen de afzonderlijke gereedschappen en apparatuur die een hypertone zoutoplossing of een stijging van de intraoculaire druk veroorzaakt voeren. We tonen de injectie in de episclerale veneuze plexus met zijn karakteristieke blancheren effect en de vertroebeling van de voorste kamer dat resulteert. We beschrijven ook het proces van het ne.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Dit protocol beschrijft een werkwijze voor het induceren glaucoom-achtige omstandigheden in een in vivo rattenmodel. In deze procedure wordt een injectie van hypertone zoutoplossing om littekenvorming te induceren in het trabeculaire netwerk 29, 32. Ontwikkeling littekenweefsel afsluit de uitstroom van waterige humor waardoor de druk in de voorste kamer toeneemt. Met een verminderde uitstroom en drukopbouw, de lens opgehangen aan elastische ligamenten duwt terug in het glasvocht kamer. Glasvocht geld.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen tegenstrijdige of concurrerende belangen te melden.
Dankbetuigingen
C. Linn wordt ondersteund door een NIH-subsidie (NIH NEI EY022795).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Xylazine hydrochloride, Minimum 99% | Sigma, Life Science | X1251-1G | |
| Ketamine hydrochloride injection, USP, 100mg/ml | Putney, Inc | NDC 26637-411-01 | 10 ml fles |
| Acepromazine Maleate, 10mg/ml | Phoenix Pharmaceutical, Inc | NDC 57319-447-04, 670008L-03-0408 | 50 ml fles |
| Serum fles, 10 ml | VWR | 16171319 | Borosilicaatglas |
| 1 ml insulinspuiten | VWR | BD329410 | 28 G naald |
| Natriumchloride | Sigma | S7653 | 2 M Oplossing |
| Microelectrode Puller | Narishige Group | PP-830 | |
| Zwaar gepolijste standaard en dunne wand borosilicaatbuis | Sutter Instruments | B150-86-10HP | zonder filament, 0,86 mm |
| Microfil spuitnaald voor het vullen van micropipetten | World Precision Instruments, Inc | MF28G | |
| Luer-Lock naald 18 gauge | Fisher Scientific | 1130421 | Spuitnaald |
| Flexibele polyethyleen buis | Fisher Scientific | 22046941 | 0,034 inch diameter, ongeveer 10 inch |
| Proparacaine Hydrochloride Opthalmic Solution, USP, 0,5% | Akorn, Inc | NDC 17478-263-12 | 15 ml steriele fles |
| Gekromde schaar | Fine Science Tools | 14061-11 | |
| Microscoop | Leica | StereoZoom 4 | |
| Hemostaatklem | Fine Science Tools | 1310912 | gebogen rand |
| Drievoudig antibioticumzalf | Fisher Scientific | NC0664481 | |
| Scalpatuurhandvat | Fine Science Tools | 10004-13 | |
| Scalpatuurblad #11 | Fine Science Tools | 10011-00 | |
| 60 mm x 15 mm Wegwerp Petri-schaal | VWR | 351007 | |
| Fosfaat gebufferde zoutoplossing 10x Concentraat | Sigma, Life Science | P7059-1L | 1x verdunning |
| Veer schaar | Fine Science Tools | 15009-08 | |
| Pincetten (2), Dumont # 5 | Fine Science Tools | 11251-30 | |
| 3 ml Transfer Pipetten, polyethyleen, niet sterieel | BD Biosciences | 357524 of 52947-948 | 1 en 2 ml graduaties |
| 35 mm x 10 mm Easy Grip Petri-schaal | BD Biosciences | 351008 | |
| Sylgard 184 | VWR | 102092-312 | |
| Cactusnaalden | |||
| Paraformaldehyde | EMD Millipore | PX0055-3 of 818715.0100 | Gemaakt tot een 4% oplossing |
| Triton X-100 | Sigma | T9284-100 ml | Gemaakt tot zowel een 1% als 0,1% oplossing |
| Fetaal bovien serum | Atlanta Biological | S11150 | 500 ml |
| Gezuiverde muis Anti-rat CD90/muis CD90.1 | BD Pharmingen | Cat 554892 | 1:300 verdunning |
| Alexa Fluor 594 geit anti-muis | Life Technologies | A11005 | 1:300 verdunning |
| Microscoopglaasjes | Corning | 2948-75x25 | |
| Glycerol | Sigma | G5516-100 ml | 50% glycerol tot 50% PBS, naar gewicht |
| Dekglaasje | Corning | 2975-225 | Dikt 1 22 x 50 mm |
| Confocale Microscoop | Nikon | C2 Eclipse Ti |
Referenties
- Goel, M., Picciani, R. G., Lee, R. K., Bhattacharya, S. K. Aqueous Humor Dynamics: A Review. Open Ophthalmol. J. 4, 52-59 (2010).
- Thylefors, B., Negrel, A. D. The global impact of glaucoma. Bull. World Health Organ. 72 (3), 323-326 (1994).
- Thylefors, B., Negrel, A. D., Pararajasegaram, R., Dadzie....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
