Methodenartikel

Procedure Om de efficiëntie van Flocculanten Evalueer voor de opheffing van de gedispergeerde deeltjes van plantenextracten

8.7K weergaven

DOI:

10.3791/53940

9 april 2016

In dit artikel

Samenvatting

De hier gepresenteerde ontwerpprocedure voor experimenten maakt de evaluatie van verschillende flocculanten mogelijk op basis van hun vermogen om verspreide deeltjes in plantenextracten te bundelen, waardoor de troebelheid en de kosten van downstreamverwerking worden verminderd.

Samenvatting

Planten zijn voor de mens niet alleen belangrijk omdat ze producten zoals voedsel, diervoeding en grondstoffen leveren, maar ook omdat ze steeds vaker kunnen worden gebruikt als productieplatforms voor toegevoegde waarde producten zoals biofarmaceutische middelen. In beide gevallen kunnen vloeibare plantenextracten mogelijk moeten worden opgehelderd om deeltjes te verwijderen. Optimale opheldering verlaagt de kosten van filtratie en centrifugatie door de capaciteit en levensduur te verhogen. Dit kan worden bereikt door het introduceren van geladen polymeren, bekend als flocculanten, die gedispergeerde deeltjes kruis-linken om scheiding van vaste en vloeibare stoffen te vergemakkelijken. Er zijn geen mechanistische flocculatiemodellen voor complexe mengsels zoals plantenextracten, dus empirische modellen worden in plaats daarvan gebruikt. Hier wordt een ontwerp-van-experimentenprocedure beschreven die het mogelijk maakt om snel verschillende flocculanten te screenen, de opheldering van plantenextracten te optimaliseren en de turbiditeit aanzienlijk te verminderen. De resulterende voorspellende modellen maken het mogelijk om robuuste procescondities en sets van polymeren met complementaire eigenschappen te identificeren, bijvoorbeeld effectieve flocculatie in extracten met specifieke geleidbaarheden. De resultaten die worden gepresenteerd voor tabaksbladextracten kunnen eenvoudig worden aangepast aan andere plantensoorten of weefsels en zullen dus de ontwikkeling van meer kosteneffectieve downstream processen voor grondstoffen en plantaardige farmaceutische middelen vergemakkelijken.

Inleiding

Planten worden wijd gebruikt om levensmiddelen zoals vruchtensappen produceren, maar kunnen ook worden ontwikkeld als platforms voor de vervaardiging van hogere waarde biofarmaceutische producten 1-3. In beide gevallen, downstream processing (DSP) begint vaak met het verwijderen van vloeistoffen uit weefsels zoals bladeren en vruchten, gevolgd door de verduidelijking van deeltjes beladen extracten 4,5. Voor de vervaardiging van geneesmiddelen, kunnen de kosten van DSP oplopen tot 80% van de totale productiekosten 6,7 en dit gedeeltelijk weerspiegelt de hoge belasting deeltjes aanwezig in extracten bereid met werkwijzen zoals verstoren....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Ontwikkel een adequate experimentele strategie

  1. Identificeer de milieu- en procesparameters die relevant zijn voor de flocculatie procedure worden vastgesteld of geoptimaliseerd, dat wil zeggen welke factoren de sterkste invloed op de flocculatie. Doorgaans zijn er meerdere van dergelijke parameters zodat een DOE benadering zoals recent beschreven 20 noodzakelijk is door het ontbreken van mechanistische modellen.
    1. Select parameters (factoren) op basis van gegevens uit de literatuur 12, voorkennis en ervaring met het systeem. Typische factoren omvatten pH, buffer geleidbaarheid, incubatietijd en de temperatuur als oo....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Flocculatie tabak extract met verschillende polymeren

De hierboven beschreven werkwijze werd met succes toegepast op een werkwijze voor het uitvlokken van tabak extracten ontwikkelen tijdens de bereiding van een monoklonaal antilichaam (het HIV-neutraliserend antilichaam 2G12) en een fluorescent eiwit (DsRed) (figuur 1) 16, en is sindsdien overgebracht andere eiwitten zoals lectinen, malaria vaccin .......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Het belangrijkste aspect om te overwegen bij het ​​opzetten van een hinde naar deeltje flocculatie karakteriseren is dat het ontwerp moet in principe in staat zijn om de verwachte of mogelijke effecten 36,38, bijvoorbeeld de invloed van de pH, het type polymeer en polymeerconcentratie 16 detecteren en te beschrijven. Daarom is het belangrijk om de fractie van ontwerpruimte (FDS) evalueren voordat het eigenlijke experimenten. De FDS is de fractie van de multidimensionale experimentele ruimt.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteur heeft geen tegenstrijdige belangen te onthullen.

Dankbetuigingen

Ik wil Dr. Thomas Rademacher bedanken voor het verstrekken van de transgene tabakszaden en Ibrahim Al Amedi voor het kweken van de tabaksplanten. Ik wil Dr. Richard M Twyman bedanken voor redactionele assistentie en Prof. Dr. Rainer Fischer voor vruchtbare discussies. Dit werk werd gedeeltelijk gefinancierd door de European Research Council Advanced Grant ''Future-Pharma'', voorstelnummer 269110, de Fraunhofer-Zukunftsstiftung (Fraunhofer Future Foundation) en de Fraunhofer-Gesellschaft Interne Programma's onder subsidienummer Attract 125-600164.

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
2100P Portable TurbidimeterHach4650000Turbidimeter
2G12 antibodyPolymunAB002Referentie-antilichaam
Biacore T200GE Healthcare28-9750-01SPR-apparaat
BP-410Furh2632410001Zakfilter
Catiofast VSHBASF79002360Flocculerend middel
Centrifuge 5415DEppendorf5424 000.410Centrifuge
Centrifugebuisje 15 mlLabomedic2017106Reactiebuis
Centrifugebuisje 50 ml zelfstandigLabomedic1110504Reactiebuis
ChitosanCarl Roth GmbH5375.1Flocculerend middel
Design-Expert(R) 8Stat-Ease, Inc.n.v.t.DoE-software
DinatriumfosfaatCarl Roth GmbH 4984.3 Mediacomponent
Ferty 2 MegaKammlott5.220072Meststof
Forma -86C ULT-vrieskastThermoFisher88400Vrieskast
Kassenkasn.v.t.n.v.t.Voor plantenkweek
Grodan Rockwool Cubes 10 x 10 cmGrodan102446Kleiwolblok
HEPESCarl Roth GmbH9105.3Mediacomponent
K700P 60DPall5302305Diepfilterlaag
KS50P 60DPallB12486Diepfilterlaag
MiraclothLabomedic475855-1RFilterdoek
MultiLine Multi 3410 IDSWTWWTW_2020pH-meter / geleidbaarheidsmeter
Osram koelwit 36 WOsram4930440Lichtbron
PhytotronIlka Zelln.v.t.Voor plantenkweek
Polymin PBASF79002360Flocculerend middel
POLYTRON PT 6100 DKinematica11010110Homogenisatieapparaat met aangepast mesgereedschap
Protein ALife technologies10-1006Antilichaambindend eiwit
NatriumchlorideCarl Roth GmbHP029.2Mediacomponent
Synergy HTBioTekSIAFRTFluorescentieplatelezer
TRISCarl Roth GmbH4855.3Mediacomponent
Tween-20Carl Roth GmbH9127.3Mediacomponent
VelaPad 60PallVP60G03KNH4Filterhuis
Zetasizer Nano ZSMalvernZEN3600DLS-meting van deeltjesgrootteverdeling

Referenties

  1. Godfray, H. C. J., et al. Food Security: The Challenge of Feeding 9 Billion People. Science. 327, 812-818 (2010).
  2. Fischer, R., Schillberg, S., Buyel, J. F., Twyman, R. M. Commercial aspects of pharmaceutical protein production in plants. Curr. Pharm. Des. 19

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Flocculant effici ntieklaring van plantextractendesign of experimentstroebelheidsmetingpolymeerscreeningflocculatieprocesdieptefiltratietabbladextractprocesoptimalisatievaste vloeistofscheiding

Gerelateerde artikelen