We introduceren de VacuSIP, een eenvoudige, niet-invasieve en betrouwbare methode voor schoon en nauwkeurig puntsampling van water. Het systeem werd ontwikkeld en geëvalueerd voor de gelijktijdige verzameling van het water dat wordt ingeademd en uitgeademd door benthische suspensie-voeders in situ, om de verwijdering en uitscheiding van deeltjes en opgeloste verbindingen schoon op te meten.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
VacuSIP, een verbeterde INEX Methode voor het
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Benthische suspensie-voeders spelen essentiële rollen in het functioneren van mariene ecosystemen. Door grote volumes water te filteren, plankton en detritus te verwijderen en deeltjes- en opgeloste verbindingen uit te scheiden, dienen ze als belangrijke agenten voor benthische-pelagische koppeling. Nauwkeurige meting van de verbindingen die door suspensie-voeders worden verwijderd en uitgescheiden (zoals sponzen, ascidiën, polychaeten, tweekleppigen) is cruciaal voor de studie van hun fysiologie, metabolisme en voedingsecologie, en is fundamenteel om de ecologische relevantie van de nutriëntenstroom gemedieerd door deze organismen te bepalen. Echter, de beoordeling van de snelheid waarmee suspensie-voeders deeltjes- en opgeloste verbindingen in de natuur verwerken, wordt beperkt door de beperkingen van de momenteel beschikbare methodologieën. Ons doel was om een eenvoudige, betrouwbare en niet-invasieve methode te ontwikkelen die schone en gecontroleerde watermonsters vanaf een specifiek punt zou toelaten, zoals de uitstroomopening van benthische suspensie-voeders, in situ. Onze methode maakt gelijktijdige bemonstering van ingeademde en uitgeademde water van het bestudeerde organisme mogelijk door gebruik te maken van kleine buisjes geïnstalleerd op een op maat gebouwd manipulatorapparaat en zorgvuldig gepositioneerd in de uitstroomopening van het bemonsterde organisme. Door een septum op het opvangvat met een spuitnaald te doorboren die aan het uiteinde van elke buis is bevestigd, kan de externe druk het bemonsterde water langzaam door de bemonsteringsbuis in het vat forceren. De langzame en gecontroleerde bemonsteringssnelheid maakt het mogelijk om de inherente ongelijkmatigheid in het water te integreren terwijl een bemonstering vrij van besmetting wordt gegarandeerd. We geven aanbevelingen voor de meest geschikte filterapparaten, opvangvat en opslagprocedures voor de analyse van verschillende deeltjes- en opgeloste verbindingen. Het VacuSIP-systeem biedt een betrouwbare methode voor de kwantificering van ongestoorde suspensie-voedermetabolisme in natuurlijke omstandigheden die goedkoop en gemakkelijk te leren en toe te passen is om de fysiologie en functionele rol van filters in verschillende ecosystemen te beoordelen.
Inleiding
Benthische schorsing feeders spelen een essentiële rol in het functioneren van mariene ecosystemen 1. Door het filteren van grote hoeveelheden water 2,3, ze te verwijderen en scheiden deeltjes (plankton en detritus) en opgeloste verbindingen 1 (en referenties daarin) en zijn een belangrijk middel van benthische-pelagische koppeling 4,5 en voedselkringloop 6,7. Nauwkeurig meten van de deeltjes en opgeloste stoffen verwijderd en uitgescheiden door benthische schorsing feeders (zoals sponzen, ascidians, borstelwormen en tweekleppigen) is fundamenteel voor hun fysiologie, metabolisme en het voeden van de ecologie te ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. voorbereidende stappen en Cleaning Procedures
- Reinigingsproduct
- Draag beschermende kleding, een laboratoriumjas en handschoenen te allen tijde. Uitvoeren van deze voorbereidende stappen in een schone ruimte vrij van stof en rook.
- Bereid een zoutzuur 5-10% zuur (HCl) met verse, kwalitatief hoogwaardige, dubbel gedestilleerd water.
- Bereid een 5% zeer goed oplosbaar basismengsel van anionogene en niet-ionogene oppervlakteactieve oplossing (zie Materials List) met verse, hoge kwaliteit, dubbel gedestilleerd water.
- Bewaar alle oplossingen in schone, met zuur gewassen containers.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Optimalisatie van zeewater collectie methoden
Selectie van de collector flesjes en reiniging
VacuSIP-compatibele opvangbakken zou een septum die het mogelijk maakt de bemonstering te worden geïnitieerd door piercing met een injectienaald te hebben. Ze moeten de verhoogde onderwater druk (2-3 bar bij typische scuba werkdiept.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
voorbereidende stappen
Collector flesjes voor DOM en nutriëntenanalyses
Sinds collector schepen kunnen interageren met opgeloste micro-bestanddelen en de sampler muren kan een substraat voor de groei van bacteriën 30-34, verschillende flesjes voor DOM en voedingsstoffen collectie werden getest zijn. Borosilicate wordt niet aanbevolen voor silica kwantificering 33,35, omdat glazen flessen de aanvanke.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Wij danken Manel Bolivar voor zijn hulp bij het veldwerk. We zijn dankbaar voor de "Parc Natural del Montgrí, les Illes Medes i el Baix Ter" voor hun steun aan ons onderzoek en bemonstering permissies. De onderwaterwereld manipulator is ontworpen door Ayelet Dadon-Pilosof en gefabriceerd door Mr. Pilosof. Dit werk werd ondersteund door de Spaanse regering project CSI-Coral [subsidie aantal CGL2013-43106-R RC en MR] en door een FPU beurs van "Ministerio de Educación, Cultura y Deporte (MECD)" naar TM. Dit is een bijdrage van de Marine biogeochemie en Global Change onderzoeksgroep gefinancierd door de Catalaanse regering [subsidie nummer 2014SGR1029] en ISF subsidi....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| GorillaPod, Original | Joby | GP000001 | flexible portable tripod |
| Flangeless Ferrule | IDEX Health & Science | P-200X | 1/16" in Blue/pk |
| Male Nut | IDEX Health & Science | P-205X | 1/16" in Green/10 pk |
| Female to Female Luer | IDEX Health & Science | P-658 | |
| Female-Male Luer | IDEX Health & Science | P-655 | |
| Peek Tubing (254 µm ID) | IDEX Health & Science | 1531 | 1/16" OD x 0.01 in ID x 5 ft lengte. Alternatieve ID kan worden gebruikt. |
| Two component resin epoxy | IVEGOR | 9257 | Meng de twee componenten van de hars goed door elkaar voor gebruik |
| (TOC) EPA Vials | Cole -Parmer | 03756-20 | 40 ml glazen flacons. Ook gemaakt door Thomas Scientific (referentienummer 9711F09). |
| HDPE Vials | Wheaton | 986701 (E78620) | 20 ml hoge dichtheid polyethyleen flacons |
| Vacuette Z no additive | Greiner bio-one | 455001 | Voorverlucht door de fabrikant |
| Septum Sample Bottles | Thomas Scientific | 1755C01 | 250 ml glazen flessen |
| Septum Cap 1 | Wheaton | W240844SP (E7865R) | 22-400 voor HDPE flacons |
| Septum Cap 2 | Wheaton | W240846 (1078-5553) | 24-400 voor glazen flacons en flessen. Ook gemaakt door Thermo Scientific National (ref. 03-377-42). |
| In-line stainless steel Swinney Filter holders | Pall | 516-9067 | 13 mm diameter |
| PTFE Seal Washer | Pall | 516-8064 | ring voor roestvrijstalen filterhouders |
| TCLP Glass Filters | Pall | 516-9126 | binder-vrije glasvezelfilters, 13 mm diameter, poriëngrootte 0.7 µm |
| Polycarbonate Filter Holders | Cole -Parmer | 17295 | 13 mm diameter |
| Isopore Membrane Filters | Millipore | GTTP01300 | 13 mm diameter, poriëngrootte 0.2 µm |
| Contrad 70 Solution | Decon Labs | 1002 | zeer goed oplosbaar basismengsel van anionisch en niet-ionische oppervlakte-actieve stofoplossing |
| Sterile Syringe Filters | VWR International Eurolab S.L. | 514-0061P | 25 mm diameter, poriëngrootte 0.2 µm |
| Fluorescein | Sigma-Aldrich | (oude ref.28802) 46955-100G | 100 g |
| Holdex, disposable,sterile | Greiner bio-one | 450263 | steriele, wegwerpbuishouder met afgecentreerde luer voor Vacuette |
| Sterile Needles | IcoGammaPlus | 5160 | 0.7 mm x 30 mm |
| Cryovials Nalgene | Nalgene | V5007(Cat. No.5000-0020) | 2 ml |
| Cryobox carton | Rubilabor | M-600 | 145x145x55 mm p/microtube 1.5 ml |
| Orthophosphoric Acid | Sigma | 79617 of Gebruik alternatief Ultra-Pure Hydrochloorzuur, uiteindelijke concentratie 0,1% | |
| Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | 500 g |
| Glutaraldehyde | Merck | 8,206,031,000 | 25%, 1 L |
| Hand Vacuum Pump | Bürkle | 5620-2181 of Gebruik alternatief standaard laboratoriumvacuümpomp |
Referenties
- Gili, J. M., Coma, R. Benthic suspension feeders: their paramount role in littoral marine food webs. Trends. Ecol. Evol. 13 (8), 316-321 (1998).
- Reiswig, H. In situ pumping activities of tropical Demospongiae. Mar. Bio. 9, 38-50 (1971).
- McMurray,....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
