Methodenartikel

Een eenvoudige Flowcytometrische methode om te meten glucose opname en Glucose Transporter Expression voor monocyten subpopulaties in volbloed

16.2K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/54255

⸱

12 augustus 2016

 ,  ,  ,  , 
1Centre for Biomedical Research, Macfarlane Burnet Institute for Medical Research and Public Health, 2Department of Infectious Diseases, Monash University, 3Department of Microbiology and Immunology, University of Melbourne, 4Department of Microbiology, The University of the West Indies, 5Division of Experimental Medicine, Department of Medicine, University of California, San Francisco, 6Department of Medicine, Monash University

In dit artikel

Samenvatting

Monocyten zijn integrale componenten van het menselijke aangeboren immuunsysteem die afhankelijk zijn van glycolytisch metabolisme wanneer geactiveerd. We beschrijven een flowcytometrieprotocol om glucosetransporterexpressie en glucoseopname door totale monocyten en monocytensubpopulaties in vers volbloed te meten.

Samenvatting

Monocyten zijn aangeboren immuuncellen die kan worden geactiveerd door pathogenen en ontsteking geassocieerd met bepaalde chronische ontstekingsziekten. Activatie van monocyten induceert effectorfuncties en een gelijktijdige verschuiving van oxidatieve naar glycolytische stofwisseling die gepaard gaat met verhoogde glucose transporter expressie. Deze verhoogde glycolytische stofwisseling wordt ook waargenomen voor de geoefende immuniteit van monocyten, een vorm van aangeboren immunologisch geheugen. Hoewel in vitro onderzoek protocollen glucose transporter expressie en glucose opname door monocyten zijn beschreven, zijn geen onderzocht door multi-parametrische flowcytometrie in volbloed. We beschrijven een multi-parametrische flowcytometrische protocol voor het meten van fluorescentie glucose analoge 2-NBDG opname in volbloed door totale monocyten en de klassieke (CD14 ++ CD16 -), tussenproduct (CD14 ++ CD16 +) en niet-klassieke ( CD14 + CD16 ++) monocytsubpopulaties. Deze methode kan worden gebruikt om glucose transporter expressie en glucoseopname voor totale monocyten en monocyt subpopulaties bij homeostase en ontstekingsziekten onderzocht en kunnen eenvoudig worden aangepast om glucoseopname andere leukocyten en leukocyten subpopulaties binnen bloed onderzocht.

Inleiding

Monocyten zijn een belangrijk onderdeel van de menselijke aangeboren immuunsysteem die snel gemobiliseerd naar plaatsen van infectie en ontsteking 1. Activatie van monocyten is kritisch voor het beperken van acute schade door ziekteverwekkers en is centraal in de pathogenese van een aantal chronische ziekten, waaronder atherosclerose 2, 3 kanker, HIV en 4,5.

Het metabolisme van rustende en geactiveerde monocyten verschilt dramatisch, met rustende monocyten gebruik oxidatief metabolisme en geactiveerde monocyten gebruikmaking glycolytische stofwisseling (dwz fermentatie van glucose tot lactaat) 6. Activatie van monocyten induceert expressie van glucose transporters die zorgt voor verhoogde glucoseopname voor glycolytische stofwisseling 7. Monocyt glucose transporter 1 (GLUT1) is een dergelijke transporteur opgereguleerd tijdens activatie en zijn expressie is aangetoond dat leidt tot de productie van pro-inflammatoire cytokines in vitro en in vetweefsel van obese muizen 8. Infectie van een monocytische cellijn door Kaposi-sarcoom geassocieerd herpesvirus leidt tot cellulaire opregulatie van GLUT1 9, en we onlangs bleek dat tijdens chronische hiv-infectie een verhoogd percentage van GLUT1 uitdrukken monocyten tijdens onbehandeld en antiretrovirale therapie behandeld infectie 10 aanwezig zijn. Samengevat, deze studies tonen aan dat glucose en glycolytische metabolisme door monocyten zijn belangrijke aspecten van vele ontstekingsziekten. Dus een eenvoudige methode om monocyten GLUT1 expressie en glucose meten die homeostase en ontstekingsziekte waarschijnlijk van nut zijn voor een groot aantal onderzoekers.

Menselijke monocyten zijn heterogeen, wordt samengesteld uit drie verschillende subsets die door differentiële expressie van het celoppervlak markers CD14 en CD16 11,12 kunnen worden onderzocht. Classical monocyten drukken een hoog niveau van CD14, maar niet uit te drukken CD16 (CD14 ++ CD16 -), tussenproduct monocyten een hoog niveau van CD14 en een tussenliggend niveau van CD16 (CD14 ++ CD16 +) en niet-klassieke monocyten een lage CD14 en een hoog niveau van CD16 (CD14 + CD16 ++). Monocyten die CD16 tot expressie zogenaamde CD16 + monocyten, die vergeleken met CD16 - monocyten hoge expressie van inflammatoire cytokines en het vermogen om beter te presenteren antigenen 13,14. Ongeveer 10% van de monocyten CD16 tijdens homeostase met hogere percentages waargenomen gedurende 15 inflammatie. Monocyt subpopulaties houden bepaalde ziektetoestanden en mogelijk bruikbare biologische markers van de ziekte en ziekteprogressie 16.

Ons doel was om een ​​methode die glucose transporter expressie en glucose-opname door humane monocyten en monocyt subpopulaties onder omstandigheden zo dicht mogelijk bij phy kan meten identificerensiological voorwaarden mogelijk. Eerdere studies gemeten monocyten glucose transporter expressie en opname van glucose 17,18, hoewel deze methoden geïsoleerde monocyten die kunnen hebben veranderd eiwitexpressie in vergelijking met fysiologische omstandigheden 19 onderzocht, en geen eerdere studie heeft de menselijke monocyten subpopulaties onderzocht. Gebruik van multi-parametrische flowcytometrie beschrijven we een werkwijze glucose transporter expressie en opname van de fluorescente glucose analoge 2-NBDG van totale monocyten en monocyt subpopulaties onderzocht (op basis van CD14 en CD16 expressie) binnen het gehele ongemanipuleerd bloed.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

LET OP: HIV-geïnfecteerde en HIV-geïnfecteerde patiënten werden gerekruteerd uit de Infectious Diseases Unit van The Alfred Hospital in Melbourne, VIC, Australië en uit de lokale gemeenschap, respectievelijk. Geïnformeerde toestemming werd verkregen van alle deelnemers, en het onderzoek werd goedgekeurd door het Comité Alfred Hospital Research and Ethics.

1. GLUT1 celoppervlak Detection op monocyten en monocyt subpopulaties

  1. Het verzamelen van bloed in citraat ACD-B antistollingsmiddel buizen en beginnen de experimenten in een biologisch veiligheidskabinet binnen 1 uur van de collectie.
  2. Voeg 100 pl bloed polypropyleenbuizen. Voeg 2 ml van 1x lyserende oplossing (zie Materials Table) buizen, terwijl op ijs, pipetteren voorzichtig te mengen. Incubeer gedurende 15 min op ijs. Centrifugeer bij 220 xg gedurende 5 minuten.
  3. Decanteren en tweemaal wassen met ongeveer 2-4 ml wasoplossing (0,5% BSA in 1x PBS) toevoegen en centrifugeren bij 220 g gedurende 5 min.
  4. Gebruik een pijptte voorzichtig verwijderen zoveel mogelijk van de wasoplossing mogelijk. Plaats de buisjes op ijs en opnieuw te schorten in 100 pl wasoplossing.
  5. Identificeren specifieke monocyten subpopulaties vlekken cellen met de volgende hoeveelheid antilichamen per 100 gl celsuspensie bereid in stap 1.4: 5 pl anti-CD3-PE, 5 pl anti-CD14-APC, 5 pl anti-CD16-PECy7, 5 gl GLUT1 FITC of IgG2b-FITC (isotype controle tube).
  6. Plaats op ijs gedurende 30 minuten in het donker. Was 2 maal met wasoplossing. Vast met 200-300 gl 0,5% formaldehyde in 1 x PBS.
  7. Analyseren op een flowcytometer opsporen van 4 kleuren binnen 24 uur in de volgende excitatie- en emissiegolflengte: FITC (488, 530), PE (488, 575), PECy7 (488, 780), APC (633, 660) 10.

2. glucoseopname door Monocyten

  1. Pipetteer 90 ul van bloed verzameld in stap 1.1 in polypropyleen buizen. Voeg 10 ul van een 14,60 pM 2-NBDG werkoplossingde 90 pl bloed (1,46 mM uiteindelijke concentratie) en flick voorzichtig te mengen. Het is cruciaal om 2-NBDG blootstelling aan licht te beperken door het bedekken buizen met aluminiumfolie.
  2. Incubeer bij 37 ° C in het donker gedurende 15-30 minuten en daarna onmiddellijk plaats op ijs. Voeg 4 ml 1x FACS lyserende oplossing voor buizen terwijl op ijs. Centrifugeer bij 220 xg bij 4 ° C gedurende 5 minuten.
  3. Was eenmaal door toevoeging van 4 ml wasoplossing (0,5% BSA in 1 x PBS). Centrifugeer bij 220 xg bij 4 ° C gedurende 5 minuten. Giet en leg ze op ijs.
  4. Vlek cellen met antilichamen: 5 pl anti-CD3-PE, 5 pl anti-CD14-APC en 5 pl anti-CD16-PECy7. Meng en plaats op ijs gedurende 30 minuten in het donker.
    LET OP: In deze periode ervoor te zorgen dat de flowcytometer is direct klaar voor analyse. Het verwerven van cellen in de volgende excitatie en emissie golflengte: 2-NBDG (488, 530), PE (488, 575), PECy7 (488, 780), APC (633, 660).
  5. Voeg 4 ml ijskoude wasbuffer (0,5% BSA in 1x PBS) buizen.Was eenmaal door centrifugatie bij 220 xg bij 4 ° C gedurende 5 minuten. Giet en voeg 200-300 ul ijs oude PBS en blijf op ijs in het donker (bedekt met aluminiumfolie). Analyseren op een flowcytometer binnen 10 min met behulp van excitatie- en emissiegolflengte instelling als in stap 2,4.

3. Data Acquisition and Analysis

OPMERKING: Kennis van flowcytometrie en gegevensanalyse verondersteld.

  1. Met een flow cytometer kan tenminste 4-kleuranalyse, ingesteld compensatie behulp ongekleurd en gekleurd individueel monsters.
    OPMERKING: Single kleuring met een FITC-gemerkt CD4 en CD14 kunnen worden gebruikt voor GLUT1 en 2-NBDG compensatie.
  2. Opzetten en label passende ramen vóór het verwerven van monsters. Teken een hek rond de monocyten populatie, en het verwerven van 100.000 tot 300.000 gebeurtenissen per monster bij gemiddelde tarief. 50.000 evenementen per compensatie monster is voldoende.
    OPMERKING: Compensatie kan voorafgaand worden uitgevoerd om te proevenverwerving of in single cell analyse software, volgens standaardprocedures.
  3. Export en gegevens op te slaan in een geschikte locatie. Openstellen single cell analyse software zoals FlowJo of andere analyse software (Aanvullende Figuur 1) en drag-and-drop monsters als beschreven (Supplemental figuur 2).
  4. Dubbelklik op het bestand (Aanvullende figuur 3) te openen. Teken een cirkel poort monocyten gebaseerd op voorwaartse en zijwaartse verstrooiing eigenschappen zoals getoond in figuur 1A en figuur 4 Supplemental. Dubbelklik op de monocyten populatie. Observeer en teken een kader rond de CD3 - populatie (Supplemental figuur 4).
  5. Dubbelklik op het CD3 - bevolking. Om te observeren de monocyten subpopulaties selecteren CD14-APC op de 'x-as, en CD16-PECy7 op de' y'- as, en dienovereenkomstig te etiketteren (Aanvullende Figuur 5).
  6. Indien er geen duidelijkepositieve en negatieve populaties, het meten van de expressie van GLUT1 of 2-NBDG opname in het specifieke monocyten subpopulaties. Bepaal de gemiddelde fluorescentie-intensiteiten (MFI) van GLUT1 en 2-NBDG door het aftrekken van het isotype en geen 2-NBDG achtergrond (Supplemental figuur 6).
  7. Wanneer gedefinieerde populaties bestaan, gebruikt de IgG2b-FITC aan de gate stellen en bepaal het percentage positieve cellen (figuur 3).
    LET OP: Gebruik deze procedure om de totale CD14 + monocyten te analyseren. Aangezien 2-NBDG opname doorgaans wordt gekenmerkt door een verschuiving in fluorescentie intensiteiten gegevens blijkt het best uit MFI en histogrammen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Compensatie moet worden uitgevoerd voor individuele fluorochromen fluorescentie spillover voorkomen. Monocyten worden eerst verrijkt door venstertijd gebaseerd op voorwaartse en zijwaartse verstrooiing. De plots gepresenteerde vertegenwoordigers van ten minste zes onafhankelijke experimenten uitgevoerd op volbloed dat bij zes of meer deelnemers zoals eerder beschreven 10 Figuur 1A toont de eerste gating van monocyten door cel verstrooiing en uitsluiting van T-...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De hier beschreven protocol Gegevens een eenvoudige methode om glucose transporter expressie en fluorescerende glucose analoge opname door monocyten en monocyt subpopulaties in volbloed onderzocht. Door beoordeling 2-NBDG opname in volbloed, deze techniek maakt soortgelijke omstandigheden als in vivo. Een eerdere studie onderzocht 6-NBDG opname in monocyten gescheiden van volbloed door dichtheidscentrifugatie 17. Echter, deze studie niet onderzocht monocyten subpopulaties en scheiding van monocyten u...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit onderzoek werd gefinancierd door de Australische Centrum voor HIV en Hepatitis Virologie Research (ACH 2) en een 2010 ontwikkelingsstoornissen subsidie ​​(CNIHR) van de Universiteit van Washington Center for AIDS Research (CFAR), een NIH gefinancierd programma onder award nummer AI027757 die wordt ondersteund door de volgende NIH Institutes en Centers (NIAID, NCI, NIMH, Nida, NICHD, NHLBI, NIA). CSP is een ontvanger van de CNIHR en ACH 2 subsidie. SMC is een ontvanger van een National Health en Medical Research Council of Australia (NHMRC) Principal Research Fellowship. De auteurs zeer erkentelijk voor de bijdrage aan het werk van het Victoriaanse operationele infrastructuur Support Program door de Burnet Institute ontvangen. Wij erkennen de hulp van Geza Paukovic en Eva Orlowski-Oliver uit de AMREP Flow Cytometry Core Faciliteit voor flowcytometrie training en technisch advies. Wij danken Angus Morgan voor media-coaching en organisatie van de video shoot. onze dankJesse Masson en Jehad Abdulaziz K. Alzahrani voor lab begeleiding tijdens de video shoot. Wij danken de inspanningen van Dr. David Simar aan de School of Medical Sciences, UNSW, Australië die kritisch methodologisch advies aangeboden. CSP danken www.nice-consultants.com voor grafische overleg.

AUTEURS 'BIJDRAGE:

CSP bedacht het project, ontworpen en experimenten, geanalyseerd en geïnterpreteerd data, en schreef het manuscript. JJA geïnterpreteerd gegevens en schreef het manuscript. TRB schreef het manuscript. JMM geïnterpreteerd data, maakte kritische intellectuele suggesties, en het manuscript beoordeeld. SMC interpreteren van gegevens, maakte kritische intellectuele suggesties en het manuscript beoordeeld.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
VACUETT Tube 9 ml ACD-B anticoagulantbuizenGreiner Bio-One GmbH455094
5 ml steriele polypropyleenbuizenBD Biosciences352063
Albumine uit runder serum (BSA)Sigma-AldrichA7906
16% formaldehyde oplossingElectron Microscopy Science15710
BD FACS lysing oplossing (10x)BD Biosciences349202Verdun BD FACS lysing oplossing 1/10 met gedeïoniseerd water voor werkconcentratie (bewaar tot 1 week bij 4 °C)
anti-CD3-PEBD Biosciences555340
anti CD14-APCBD Biosciences555399
anti-CD16-PECy7BD Biosciences557744
anti-Glut1-FITCR & D SystemsFAB1418F
IgG2b-FITCR & D SystemsIC0041F
2-NBDGLife technologiesN13195Suspensie 5 mg van 2-NBDG in 1 ml gedeïoniseerd water om een 14.60 mM stock oplossing te maken (bewaar tot 6 maanden bij 4 °C). Om de werkconcentratie van 2-NBDG te maken, verdun stock 1/100 met 1x DPBS. Dek af met folie. (bewaar tot 1 week bij 4 °C)
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1x)Life technologies14190-144Voor het maken van wasoplossing, voeg 0,5 g BSA toe per 100 ml DPBS (bewaar tot 2 weken bij 4 °C)

Referenties

  1. Shi, C., Pamer, E. G. Monocyte recruitment during infection and inflammation. Nat Rev Immunol. 11, 762-774 (2011).
  2. Woollard, K. J., Geissmann, F. Monocytes in atherosclerosis: subsets and functions. Nat Rev Cardiol. 7, 77-86 (2010).
  3. Richards, D. M., Hettinger, J., Feuerer, M. Monocytes and macrophages in cancer: development and functions. Cancer Microenviron. 6, 179-191 (2013).
  4. Anzinger, J. J., Butterfield, T. R., Angelovich, T. A., Crowe, S. M., Palmer, C. S. Monocytes as regulators of inflammation and HIV-related comorbidities during cART. J Immunol Res. 2014, 569819(2014).
  5. Palmer, C., Cherry, C. L., Sada-Ovalle, I. Glucose Metabolism in T Cells and Monocytes: New Perspectives in HIV Pathogenesis. EBioMedicine. , (2016).
  6. Cheng, S. C., et al. mTOR- and HIF-1alpha-mediated aerobic glycolysis as metabolic basis for trained immunity. Science. 345, 1250684(2014).
  7. Maratou, E., et al. Glucose transporter expression on the plasma membrane of resting and activated white blood cells. Eur J Clin Invest. 37, 282-290 (2007).
  8. Freemerman, A. J., et al. Metabolic reprogramming of macrophages: glucose transporter 1 (GLUT1)-mediated glucose metabolism drives a proinflammatory phenotype. J Biol Chem. 289, 7884-7896 (2014).
  9. Gonnella, R., et al. Kaposi sarcoma associated herpesvirus (KSHV) induces AKT hyperphosphorylation, bortezomib-resistance and GLUT-1 plasma membrane exposure in THP-1 monocytic cell line. J Exp Clin Cancer Res. 32, 79(2013).
  10. Palmer, C. S., et al. Glucose transporter 1-expressing proinflammatory monocytes are elevated in combination antiretroviral therapy-treated and untreated HIV+ subjects. J Immunol. 193, 5595-5603 (2014).
  11. Wong, K. L., et al. Gene expression profiling reveals the defining features of the classical, intermediate, and nonclassical human monocyte subsets. Blood. 118, e16-e31 (2011).
  12. Ziegler-Heitbrock, L., et al. Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood. Blood. 116, e74-e80 (2010).
  13. Belge, K. U., et al. The proinflammatory CD14+CD16+DR++ monocytes are a major source of TNF. J Immunol. 168, 3536-3542 (2002).
  14. Frankenberger, M., Sternsdorf, T., Pechumer, H., Pforte, A., Ziegler-Heitbrock, H. W. Differential cytokine expression in human blood monocyte subpopulations: a polymerase chain reaction analysis. Blood. 87, 373-377 (1996).
  15. Ziegler-Heitbrock, L. The CD14+ CD16+ blood monocytes: their role in infection and inflammation. J Leukoc Biol. 81, 584-592 (2007).
  16. Ziegler-Heitbrock, L. Macrophages: Biology and Role in the Pathology of Diseases. , Springer. 3-36 (2014).
  17. Dimitriadis, G., et al. Evaluation of glucose transport and its regulation by insulin in human monocytes using flow cytometry. Cytometry A. 64, 27-33 (2005).
  18. Fu, Y., Maianu, L., Melbert, B. R., Garvey, W. T. Facilitative glucose transporter gene expression in human lymphocytes, monocytes, and macrophages: a role for GLUT isoforms 1, 3, and 5 in the immune response and foam cell formation. Blood Cells Mol Dis. 32, 182-190 (2004).
  19. Stibenz, D., Buhrer, C. Down-regulation of L-selectin surface expression by various leukocyte isolation procedures. Scand J Immunol. 39, 59-63 (1994).
  20. Ahmed, N., Kansara, M., Berridge, M. V. Acute regulation of glucose transport in a monocyte-macrophage cell line: Glut-3 affinity for glucose is enhanced during the respiratory burst. Biochem J. 327 (Pt 2), 369-375 (1997).
  21. Cutfield, W. S., Luk, W., Skinner, S. J., Robinson, E. M. Impaired insulin-mediated glucose uptake in monocytes of short children with intrauterine growth retardation). Pediatr Diabetes. 1, 186-192 (2000).
  22. Yoshioka, K., et al. A novel fluorescent derivative of glucose applicable to the assessment of glucose uptake activity of Escherichia coli. Biochim Biophys Acta. 1289, 5-9 (1996).
  23. Speizer, L., Haugland, R., Kutchai, H. Asymmetric transport of a fluorescent glucose analogue by human erythrocytes. Biochim Biophys Acta. 815, 75-84 (1985).
  24. Palmer, C. S., et al. Increased glucose metabolic activity is associated with CD4+ T-cell activation and depletion during chronic HIV infection. AIDS. 28, 297-309 (2014).
  25. Palmer, C. S., Ostrowski, M., Balderson, B., Christian, N., Crowe, S. M. Glucose metabolism regulates T cell activation, differentiation, and functions. Frontiers in immunology. 6, (2015).
  26. Palmer, C. S., et al. Regulators of glucose metabolism in CD4 and CD8 T cells. International reviews of immunology. , 1-12 (2015).
  27. Palmer, C. S., Crowe, S. M. How does monocyte metabolism impact inflammation and aging during chronic HIV infection? AIDS research and human retroviruses. 30, 335-336 (2014).
  28. McFadden, K., et al. Metabolic stress is a barrier to Epstein-Barr virus-mediated B-cell immortalization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, E782-E790 (2016).
  29. Gamelli, R. L., Liu, H., He, L. K., Hofmann, C. A. Augmentations of glucose uptake and glucose transporter-1 in macrophages following thermal injury and sepsis in mice. Journal of leukocyte biology. 59, 639-647 (1996).
  30. Yin, Y., et al. Glucose Oxidation Is Critical for CD4+ T Cell Activation in a Mouse Model of Systemic Lupus Erythematosus. Journal of immunology. , 80-90 (2016).
  31. Yang, Z., Matteson, E. L., Goronzy, J. J., Weyand, C. M. T-cell metabolism in autoimmune disease. Arthritis research & therapy. 17, 29(2015).
  32. Yin, Y., et al. Normalization of CD4+ T cell metabolism reverses lupus. Science translational medicine. 7, 274ra218(2015).
  33. Barbera Betancourt, A., et al. Inhibition of Phosphoinositide 3-Kinase p110delta Does Not Affect T Cell Driven Development of Type 1 Diabetes Despite Significant Effects on Cytokine Production. PloS one. 11, e0146516(2016).
  34. Barron, C. C., Bilan, P. J., Tsakiridis, T., Tsiani, E. Facilitative glucose transporters: Implications for cancer detection, prognosis and treatment. Metabolism: clinical and experimental. 65, 124-139 (2016).
  35. Hegedus, A., Kavanagh Williamson, M., Huthoff, H. HIV-1 pathogenicity and virion production are dependent on the metabolic phenotype of activated CD4+ T cells. Retrovirology. 11, 98(2014).
  36. Taylor, H. E., et al. Phospholipase D1 Couples CD4+ T Cell Activation to c-Myc-Dependent Deoxyribonucleotide Pool Expansion and HIV-1 Replication. PLoS Pathog. 11, e1004864(2015).
  37. Loisel-Meyer, S., et al. Glut1-mediated glucose transport regulates HIV infection. Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 2549-2554 (2012).
  38. Palmer, C. S., et al. Emerging Role and Characterization of Immunometabolism: Relevance to HIV Pathogenesis, Serious Non-AIDS Events, and a Cure. J Immunol. 196 (11), 4437-4444 (2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Flowcytometrie2 NBDG opnameCD14 CD16 gatingHIV immunometabolismefluorescente glucose analogonimmuuncelmetabolisme

Gerelateerde artikelen