We beschrijven hier een reproduceerbaar protocol voor het isoleren van de muis cirkel van Willis.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Protocol voor het isoleren van de muis Cirkel van Willis
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De cerebrale arteriële cirkel (circulus arteriosus cerebri) of een cirkel van Willis (Cow) is een van de bloedsomloop anastomose rond de optische chiasma en de hypothalamus die bloed naar de hersenen en de omliggende structuren. Het is betrokken bij verscheidene cerebrovasculaire aandoeningen zoals cerebrale amyloïde angiopathie (CAA) geassocieerde vasculopathieën, intracraniële atherosclerose en aneurysma's. Onderzoek naar de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan deze ziekten voor de identificatie van nieuwe drug targets voor de preventie nodig diermodellen. Sommige van deze modellen kan transgeen zijn, terwijl andere isolatie van de cerebro-vasculatuur, inclusief CoW.The hier beschreven methode is geschikt voor CoW isolatie in een muis afstamming en aanzienlijke mogelijkheden voor het screenen (expressie van genen, eiwitproductie zal betrekken, posttranslationele eiwit modificaties, secretoom analyse, enz.) onderzoek naar de grote schepen van de muis cerebrovaatstelsel. Het kan ook worden gebruikt voor ex vivo studies, door aanpassing van het orgaanbad ontwikkeld voor geïsoleerde muis olfactorische slagaders.
Inleiding
De cerebrale arteriële cirkel (circulus arteriosus cerebri), ook bekend als de cirkel van Willis (CoW), lus van Willisor veelhoek Willis) werd eerst beschreven door Thomas Willis in 1664. Het is een anastomose circulatie rond de optische chiasma en de hypothalamus dat kan worden beschouwd als een centrale naaf die bloed naar de hersenen en de omliggende structuren. Bloed in deze structuur via de interne halsslagader en vertebrale slagaders en stroomt uit de cirkel via het interieur middelste en achterste cerebrale slagaders. Elk van deze slagaders heeft links en rechts takken ter weerszijden van de cirkel. De basilaire, post communiceren, en de voorste communiceren s....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de Europese communautaire normen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren, met goedkeuring van de lokale ethische commissie voor dierproeven (Ile de France-Paris-comité, Authorization 4270).
1. Anesthesie
- Infuseren een dodelijke dosis pentobarbital (1 mg / 10 g lichaamsgewicht) intraperitoneaal (27-gauge naald en 1-ml spuit) in volwassen muizen voor de operatie.
2. Vessel Perfusie
Opmerking: Het is niet nodig om dierenarts zalf op de ogen tijdens het verblijf perfusie. Deze procedure is snel (5-10 minu....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De PBS-doorbloed muis is gedood en de koe wordt geïsoleerd zoals beschreven in paragraaf 3.2 van het protocol. Wanneer de dissectie correct wordt uitgevoerd, dient de koe in één stuk zijn en lichtjes transparant zijn door de afwezigheid van resterende bloed in de vasculatuur.
Figuur 2: De muis CoW na isolatie. (A) Ov.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
We beschrijven hier een reproduceerbare protocol voor de isolatie van de cirkel van Willis. De meest voorkomende cerebrovasculaire aandoeningen van CoW worden met CAA geassocieerde vasculopathieën, intracraniële atherosclerose en intracraniële aneurysma, die allemaal invloed op de wanden van slagaders. De risicofactoren zijn bekend, maar de moleculaire pathogenese van deze hersenaandoeningen steeds slecht begrepen en specifieke biologische merkers voor het voorspellen van het optreden daarvan ontbreken. Er bestaat grote.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door Paris VI University en een Pierre Fabre Innovatie subsidie.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Hardened Fine Iris Scissors | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| Scissors - Straight / Sharp / Sharp 16.5 cm | Fine Science Tools | 14002-16 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| Stereoscopic Zoom Microscope | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND Surface 60mm Culture Dish | Corning | #3295 | |
| Peristaltic Pump - MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 3/1992 |
Referenties
- Beckmann, N., et al. Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease. J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).
- Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
