Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Het ontwikkelen van een Speeksel Antibody Multiplex Immunoassay menselijke blootstelling aan Environmental Pathogens Meet

7.8K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/54415

⸱

12 september 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1National Exposure Research Laboratory, U.S. Environmental Protection Agency, 2National Risk Management Research Laboratory, U.S. Environmental Protection Agency, 3Oak Ridge Institute for Science and Education, 4Department of Biological Sciences, McMicken College of Arts and Sciences, University of Cincinnati

In dit artikel

Samenvatting

In het huidige klimaat van schaarse middelen, ontstaan er nieuwe technologieën die het onderzoekers mogelijk maken om studies goedkoper, sneller en met meer precisie uit te voeren. Hier beschrijven we de ontwikkeling van een kralen-gebaseerde speekselantilichaam multiplex immunoassay om de blootstelling van mensen aan meerdere omgevingspathogenen gelijktijdig te meten.

Samenvatting

De etiologie en de effecten van menselijke blootstelling aan omgevingsfactoren ziekteverwekkers zijn wereldwijd grote zorg, en dus zou de mogelijkheid om de blootstelling en infecties met behulp van kosteneffectieve, high-throughput benaderingen te beoordelen onontbeerlijk. Dit manuscript beschrijft de ontwikkeling en analyse van een korrel-gebaseerde multiplex immunoassay mogelijkheid gelijktijdig de aanwezigheid van antilichamen in menselijk speeksel meerdere pathogenen. Speeksel is bijzonder aantrekkelijk in deze toepassing omdat het invasief, goedkoper en gemakkelijker te verzamelen dan serum. Antigenen van ziekteverwekkers uit de omgeving gekoppeld waarbij gecarboxyleerde microsferen (korrels) en gebruikt om antilichamen in zeer kleine volumes menselijke speekselmonsters met een kraal gebaseerde, oplossing-fase-assay gemeten. Bolletjes werden in combinatie met antigenen van Campylobacter jejuni, Helicobacter pylori, Toxoplasma gondii, norovirussen (G I.1 en G II.4) en hepatitis A-virus. Opdat de antigenen voldoende gekoppeld terde korrels, werd bevestigd middels koppelmiddelen soortspecifieke, dierlijke primaire invangantilichamen, gevolgd door incubatie met gebiotinyleerd anti-species secundaire detectie antilichamen en streptavidine-R-fycoerythrine reporter (SAPE). Als een controle voor het meten aspecifieke binding werd één kraal set identiek behandeld als de anderen behalve dat niet gekoppeld aan een antigeen. De antigeen gekoppelde en controle parels werden vervolgens geïncubeerd met prospectief verzamelde menselijke speekselmonsters, gemeten op een high throughput analyse gebaseerd op de principes van flowcytometrie, en de aanwezigheid van antilichamen tegen elk antigeen werd gemeten mediane fluorescentie- intensiteit eenheden (MFI) . Deze multiplex immunoassay heeft een aantal voordelen, waaronder meer gegevens met minder monster; lagere kosten en arbeid; en de mogelijkheid om de bepaling te passen aan verschillende doelen plaats. Resultaten geven aan dat de speekselklieren multiplex immunoassay kan identificeren eerdere blootstelling en infecties, wat kan worden especially nuttig in surveillance studies met grote menselijke bevolking.

Inleiding

Achtentachtig procent van diarree gerelateerde ziekte wereldwijd wordt in verband gebracht met de blootstelling aan verontreinigde water, onveilig voedsel en slechte sanitaire / hygiëne, waardoor ongeveer 1,5 miljoen doden, van wie de meerderheid zijn kinderen 1. Dit is een belangrijke bron van zorg voor de openbare gezondheid van de ambtenaren en beleidsmakers. In een poging om blootstelling en ziekten die verband houden met water en andere milieu-pathogenen te onderzoeken, ontwikkelden we een multiplex immunoassay om antilichamen in menselijke monsters 2-4 te meten. Deze methode kan worden toegepast epidemiologische studies menselijke blootstelling aan deze pathogenen te bepalen en beter omlijnd en immunoprevalence incidente infecties.

Speeksel houdt aanzienlijke belofte als alternatief voor serum biomarker voor menselijk onderzoek. Onder de voordelen van speeksel zijn de niet-invasieve en gemak van monsterverzameling, lage kosten, en samples gemakkelijk worden opgehaald kinderen 5-7 </ Sup>. Serum- en speekselmonsters werden uitgebreid onderzocht op antilichamen tegen H. pylori 2,3,8, Plasmodium falciparum 9, Entamoeba histolytica 10, Cryptosporidium parvum 3,11, Streptococcus pneumonia 12, hepatitis virussen A en C 13-14, noroviruses 2-4,15, T. gondii 2-4, dengue virus 16, humaan immunodeficiëntievirus (HIV) 17 en Escherichia coli O157: H7 18.

Een multiplex immunoassay maakt de analyse van meerdere analyten tegelijk in één monstervolume binnen een enkele cyclus of lopen. Multiplexverzending antigenen van C. jejuni, T. gondii, H. pylori, werden hepatitis A virus, en twee noroviruses toegepast om menselijke speeksel IgG en IgA 2-4 3,4 en 2,3 plasma IgG antilichaamresponsen meten deze pathogenen met eenBead-based multiplexing immunoassay. Bij gebruik in combinatie met epidemiologische onderzoeken van blootstelling aan microben in water, bodem en voedsel, kan het type assay beschreven in deze studie waardevolle informatie voor het begrijpen van infecties veroorzaakt door ziekteverwekkers uit de omgeving te verruimen. Bovendien kan het speeksel antilichaam gegevens verkregen uit deze studies worden gebruikt om de risico-evaluatie modellen 19-22 te verbeteren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Goedkeuring werd verkregen van de Institutional Review Board (IRB # 08-1844, Universiteit van North Carolina, Chapel Hill, NC, USA) voor het verzamelen van gestimuleerde crevicular speekselmonsters van strandgangers in Boquerón Beach, Puerto Rico, als onderdeel van de Verenigde Staten Environmental Protection Agency (US EPA) De nationale Epidemiologische en Environmental Assessment van recreatief (NEEAR) Water Study 23 tot zwemmen bijbehorende risico's en ziekten te beoordelen. Proefpersonen mits informed consent en werden geïnstrueerd over het gebruik van het speeksel collectie apparaat door getrainde USEPA aannemers. De speekselmonsters werden verscheept op ijs en bij ontvangst, werden zij gecentrifugeerd en opgeslagen bij -80 ° C zoals beschreven 4.

1. Bead Activation

  1. Resuspendeer kralen set voorraden door vortexen en sonificeren gedurende 20 seconden en de overdracht van ongeveer 5,0 x 10 6 van de voorraad kralen (400 ul) naar microcentrifugebuizen.
    Opmerking: THij parels worden geleverd in een concentratie van 12,5 x 10 6 kralen / ml.
  2. Pellet de voorraad parels door centrifugeren bij 10.000 xg gedurende 2 minuten.
  3. Verwijder het supernatant en resuspendeer de gepelleteerde kralen in 100 ul gedistilleerd water (dH 2 O) van vortex en sonicatie gedurende 20 sec. Herhaal stap 1.2.
  4. Verwijder het supernatant en resuspendeer de gewassen parels in 80 pl 100 mM monobasisch natriumfosfaat, pH 6,2 door vortex en sonicatie gedurende 20 sec.
  5. Vlak voor het gebruik maken van een oplossing 50 mg / ml N -hydroxysulfosuccinimide (sulfo-NHS) door toevoeging van 200 pl dH 2 O tot de 10 mg sulfo-NHS aliquot. Meng door vortex.
  6. Voeg 10 ul van 50 mg / ml sulfo-NHS aan de korrels. Meng door vortex.
  7. Vlak voor het gebruik maken van een 50 mg / ml 1-ethyl- [3dimethylaminopropyl] carbodiimide hydrochloride (EDC) door toevoeging van 200 ul gedestilleerd water (dH 2 O) aan de 10 mg EDC aliquot. Meng door vortex.
  8. Voeg 10 ul van 50mg / ml EDC oplossing van de kralen. Meng door vortex. Incubeer de kralen gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur in het donker onder mengen door vortex op 10 min intervallen. Pellet de geactiveerde korrels door microcentrifugatie bij 10.000 xg gedurende 2 minuten.
  9. Verwijder het supernatant en resuspendeer de kralen in 250 ui 50 mM 2- [N -Morpholino] ethaansulfonzuur (MES), pH 5,0 door vortex en sonicatie gedurende 20 sec.
  10. Pellet de geactiveerde korrels door microcentrifugatie bij 10.000 xg gedurende 2 minuten.
  11. Herhaal stap 1.9 en 1.10.
    Opmerking: Dit levert een totaal van twee wassingen met 50 mM MES, pH 5,0.
  12. Resuspendeer de kralen in 100 pi 50 mM MES, pH 5,0 door vortex en sonicatie gedurende 20 sec.

2. Bead Koppeling

  1. Stel de antigenen aan de korrel sets in met de in Tabel 1 concentraties.
  2. Voeg elk antigeen aan de geactiveerde kralen en breng het totale volume op 500 pl in 50 mM MES, pH 5,0. Meng de antigenen eend kralen door vortex.
  3. Incubeer de antigenen en de parels gedurende 2 uur onder mengen door rotatie (~ 15 rpm) bij kamertemperatuur in het donker. Pellet de gekoppelde korrels door microcentrifugatie bij 10.000 xg gedurende 2 minuten.
  4. Verwijder het supernatant en resuspendeer de kralen in 500 ul fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) -bovine serumalbumine (BSA) -polyoxyethylenesorbitan monolauraat (Tween-20) natriumnitraat azide (PBS-TBN) pH 7,4 door vortex en sonicatie. Pellet de kralen door microcentrifugatie bij 10.000 xg gedurende 2 minuten en verwijder het supernatant.
    Let op: Natriumazide is een acuut giftig chemisch product. Het is dodelijk bij inslikken of in contact komt met de huid. Voorkom inademen van stof / rook / gas / nevel / damp of spray. Draag geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen (PBM's) bij het hanteren en afvoeren in overeenstemming met de relevante wetten.
  5. Resuspendeer de kralen in 1 ml PBS-TBN van vortex en sonicatie gedurende 20 sec.
  6. Pellet de korrels door microcentrifugatie bij 10.000 xg gedurende 2 minuten.
  7. Herhaal de stappen 2,5 en 2,6.
    Opmerking: Dit levert een totaal van twee wassingen met PBS-TBN.
  8. Resuspendeer de gekoppelde en gewassen kralen in 1 ml PBS, 1% BSA, 0,05% azide, pH 7,4. Bewaar de gekoppelde parels in een 2-8 ° C koelkast in het donker.

3. Bead Count

  1. Bereid een 1:10 verdunning van de gekoppelde korrels in water of PBS buffer.
  2. Load 10 ul van de verdunning kraal op een hemocytometer op monsterintroductie punt.
  3. Tel de korrels gezien in één van de 4 x 4 corner roosters. Bereken het aantal gekoppelde korrels met de volgende formule: Count (1 hoek van 4 x 4 raster) x (1 x 10 4) x (verdunningsfactor) x resuspensie in ml.

4. Bevestiging van de Antigen Coupling

  1. Resuspendeer de voorraad mengsel van kralen gekoppeld aan antigenen van rente door vortex en sonicatie gedurende 20 sec.
  2. Bereid een werkende kraal mengsel door verdunning van de gekoppelde kraal voorraden tot een definitieveconcentratie van 100 kralen / ul van elke unieke kralen in PBS-1% BSA (PBS-1% BSA, pH 7,4).
  3. Maak minstens 7 tweevoudige seriële verdunningen van anti-species IgG primaire antilichaam volgens de aanbevelingen van de fabrikant in 96-well rondbodem plaat met PBS-1% BSA buffer.
  4. Pre-nat afzonderlijke 8-putjes kolom (8 rijen) van een 96-well filter bodemplaat voor elke test antigen koppeling bevestiging met 100 ui wasbuffer en verwijder supernatant door vacuüm. Voeg 50 ul van werken bead mengsel (-antigen gekoppelde korrels) in de pre-nat putjes.
  5. Voeg 50 ul antilichaam verdunningen 1-7 rijen van elke kolom van de 96-well filterplaat en 50 pi PBS-1% BSA buffer rij 8 in plaats van verdund antilichaam te dienen als achtergrond putjes. Meng met een multi-kanaal pipet op en neer te pipetteren 5 keer. Voer dezelfde procedure voor elk antigeen gekoppeld kraal set te worden bevestigd.
  6. Dek af en laat incubeer in het donker bij kamertemperatuurerature gedurende 1 uur op een microplaat schudinrichting bij 500 rpm. Verwijder supernatant door vacuüm.
  7. Was de putjes met 100 ui wasbuffer en verwijder supernatant door vacuüm. 1x herhalen. Resuspendeer de kralen in 50 ul PBS-1% BSA met een multi-channel pipet.
  8. Verdun gebiotinyleerd anti-species IgG secundaire detectie antilichaam tegen 16 ug / ml in PBS-1% BSA.
  9. Voeg 50 pl verdund secundair antilichaam aan elk putje door en neer te pipetteren 5 keer.
  10. Bedek filterplaat en laat incubeer in het donker bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten op een plaat schudder. Verwijder supernatant door vacuüm. Was de putjes met 100 ui wasbuffer en verwijder supernatant door vacuüm. Herhaal wassen 1x.
  11. Resuspendeer de kralen in 50 ul PBS-1% BSA met een multi-channel pipet.
  12. Verdunde streptavidine-R-fycoerythrine reporter (SAPE) tot 24 ug / ml in PBS-1% BSA.
  13. Voeg 50 ul van reporter aan elk putje en meng door en neer te pipetteren 5 keer.
  14. Cvia filterplaat en laat incubeer in het donker bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten op een plaat schudder. Verwijder supernatant door vacuüm. Was de putjes met 100 ui wasbuffer en verwijder supernatant door vacuüm. Herhaal wassen 1x.
  15. Resuspendeer kralen in 100 ul PBS-1% BSA en geanalyseerd 50 gl met de analysator 29.
    Opmerking: De resultaten van de kraal-gebaseerde multiplex immunoassay worden gemeten in Median Fluorescence Intensity (MFI). Raadpleeg altijd de meest recente versie van de software handleiding, indien beschikbaar om fouten te voorkomen.

5. Speeksel Multiplex Immunoassay

  1. Verwijderen speeksel uit de -80 ° C vriezer en laten ontdooien bij kamertemperatuur.
  2. Resuspendeer antigen gekoppeld kralen voorraden door vortex en sonicatie gedurende 20 sec.
  3. Maak een werkoplossing door verdunning kraal mengsel de gekoppelde kraal voorraden tot een uiteindelijke concentratie van 100 kralen / ul van elke unieke set kralen in PBS-1% BSA buffer.
  4. Maak een 1: 4 verdunning van speeksel wet PBS-1% BSA buffer in een 96 well, diepe put plaat.
  5. Pre-nat filter plaat met 100 ul wasbuffer en verwijder supernatant door vacuüm.
  6. Voeg 50 ul van een werkende korrel mengsel en een gelijk volume verdund speeksel 95 putjes van de 96 putjes filterplaten een 1: 8 eindverdunning. Meng reacties met een multi-channel pipet. De ene controleputje, voeg 50 ul antigen gekoppelde korrels plus 50 pi PBS-1% BSA buffer (ter vervanging van speeksel).
  7. Dek af en laat incubeer in het donker bij kamertemperatuur gedurende 1 uur op een microplaat schudinrichting bij 500 rpm. Verwijder supernatant door vacuüm. Was de putjes met 100 ui wasbuffer en verwijder supernatant door vacuüm. Herhaal wassen 1x.
  8. Resuspendeer kralen in 50 ul PBS-1% BSA met een multi-channel pipet.
  9. Verdun gebiotinyleerd geit anti-humaan IgG secundair antilichaam voor detectie 16 ug / ml in PBS-1% BSA.
  10. Voeg 50 ul verdund secundair antilichaam aan elk putje en meng de inhoud meteen multi-channel pipet.
  11. Bedek filterplaat en laat incubeer in het donker bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten op een plaat schudder. Verwijder supernatant door vacuüm. Was de putjes met 100 ui wasbuffer en verwijder supernatant door vacuüm. Herhaal wassen 1x.
  12. Resuspendeer kralen in 50 ul PBS-1% BSA met een multi-channel pipet.
  13. Verdunde streptavidine-R-fycoerythrine reporter (SAPE) tot 24 ug / ml in PBS-1% BSA.
  14. Voeg 50 ul aan elk putje reporter en meng met een multi-channel pipet.
  15. Bedek filterplaat en laat incubeer in het donker bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten op een plaat schudder. Verwijder supernatant door vacuüm. Was de putjes met 100 ui wasbuffer en verwijder supernatant door vacuüm. Herhaal wassen 1x.
  16. Resuspendeer kralen in 100 ul PBS-1% BSA en geanalyseerd 50 gl met de analysator 29.
    Opmerking: De resultaten van de multiplex immunoassay worden gemeten in Median Fluorescence Intensity (MFI) eenheden. Raadpleeg altijdde nieuwste versie van de software manual, indien beschikbaar om fouten te voorkomen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Een unieke kraal set werd gebruikt als een controle om niet-specifieke binding te meten en het monster van de variabiliteit proeven. Deze bolletjes werden identiek behandeld om het antigeen gekoppeld kralen met de uitzondering dat ze niet werden geïncubeerd met elk antigeen in de koppelingsstap. MFI-waarden> 500 verkregen uit de controle kralen geïncubeerd met alle speekselmonsters werden verwijderd uit verdere analyses vanwege vermoedelijke besmetting uit serum en de resterende react...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Deze resultaten geven aan dat de multiplex immunoassay werkwijze nuttig voor het onderscheiden tussen speekselmonsters die immunologisch of immunonegative zijn. Om immunopositivity te bepalen werd een cut-off point ontwikkeld door berekening van het gemiddelde plus drie standaardafwijkingen van de log-getransformeerde MFI reacties van de besturing gekoppelde parels getest met alle speekselmonsters. De cut-off point leverde de mogelijkheid van blootstelling en immunoprevalence beoordelen in een enkele of meerdere pathoge...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De United States Environmental Protection Agency via haar Bureau voor Onderzoek en Ontwikkeling gefinancierd en beheerd de hier beschreven onderzoek. Het is onderworpen aan een administratieve herziening van het Agentschap en goedgekeurd voor publicatie. Vermelding van handelsnamen of commerciële producten geen goedkeuring of aanbeveling voor het gebruik opleveren.

Dankbetuigingen

Clarissa Curioso kreeg ondersteuning via een benoeming in het Research Participation Program bij de U.S. Environmental Protection Agency, beheerd door het Oak Ridge Institute for Science and Education via een interdepartementaal akkoord tussen het U.S. Department of Energy en de U.S. EPA.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Utrusting en Software
MicrocentrifugeThermo Electron Corporation75002446Worden gebruikt om monsters te centrifugeren
Vortex MixerVWRG560Worden gebruikt om monsters te mengen
Sonicator (mini)Fisher Scientific15-337-22Worden gebruikt om kralen te scheiden
Pipettors P10, P20, P100, P1000, 8 ch.CappVerschillende
Hemacytometer (Bright Line)Housser Scientific 3200Worden gebruikt om gekoppelde kralen te tellen
Multiscreen Vacuum ManifoldMilliporeMSVMHTS00Worden gebruikt in wasstappen om supernatant te verwijderen
MicroShakerVWR12620-926Worden gebruikt om kralen tijdens incubatie te agiteren
Buisjesrek (1,5 ml en 0,5 ml) (gesorteerd)VWR30128-346
WeegschaalMettler of andereWorden gebruikt om wasreagentia te meten voor het maken van buffers
Dynabead Sample MixerInvitrogen947-01Worden gebruikt tijdens koppelingsincubatiestap
MatLab (R2014b)The MathWorks, Inc.Worden gebruikt om antilichaamresponsgegevens te analyseren
Microsoft Excel 2014Microsoft CorporationWorden gebruikt om antilichaamresponsgegevens te analyseren
Luminex Analyzer met xPonent 3.1 softwareLuminex CorporationLX200-XPON3.1Instrument en software die worden gebruikt om het test uit te voeren
Antigenen
GI.1 Norwalk Virus: p-deeltjeXi Jiang (CCHMC)*NA*Cincinnati Childrens' Hospital. Laatste conc. 5 µg.
GII.4 Norovirus VA387: p-deeltjeXi Jiang (CCHMC)*NA*Cincinnati Childrens' Hospital. Laatste conc. 5 µg.
Hepatitis A Virus: concentraat van graad II uit celkweekMeridian Life Sciences8505Antigeen gekoppeld bij 100 µg
Helicobacter pylori: lysateMeridian Life SciencesR14101Antigeen gekoppeld bij 25 µg
Toxoplasma gondii: recombinant p30 (SAG1)Meridian Life SciencesR18426Antigeen gekoppeld bij 25 µg
Campylobacter jejuni: verhitte hele cellenKPL50-92-93Antigeen gekoppeld bij 50 µg
Primaire antilichamen
Guinea pig anti-Norovirus(CCHMC)*NAWorden gebruikt voor koppelingsbevestiging
Muis anti-Hepatitis A IgGMeridian Life SciencesC65885MWorden gebruikt voor koppelingsbevestiging
Muis anti-Hepatitis A IgGMeridian Life SciencesC65885MWorden gebruikt voor koppelingsbevestiging
BacTraceAffinity Gezuiverd Antilichaam voor Helicobacter pyloriKPL01-93-94Worden gebruikt voor koppelingsbevestiging
Geiten pAb to Toxoplasma gondiiAbcamAb23507Worden gebruikt voor koppelingsbevestiging
BacTrace Geiten anti-Campylobacter soortenKPL01-92-93Worden gebruikt voor koppelingsbevestiging
Secundaire  Antilichamen
Biotin-SP-Conjugated AffiniPure Ezel anti-Geit IgG (H+L)Jackson705-065-149Worden gebruikt voor koppelingsbevestiging
Biotinyleerde Konijn anti-Geit IgG (H+L)KPL16-13-06Worden gebruikt voor koppelingsbevestiging
Biotinyleerde Geiten anti-Muis IgG (H+L)KPL16-18-06Worden gebruikt voor koppelingsbevestiging
Affiniteit Gezuiverd Antilichaam Biotinyleerde Geiten anti-Konijn IgG (H+L)KPL176-1506Worden gebruikt voor koppelingsbevestiging
Verbruiksartikelen
1,5 ml copolymere microcentrifugebuisjesUSA Scientific1415-2500Worden gebruikt als microcentrifugebuisjes met lage binding
10 µl pipettentipvullingenBioVentures5030050C
200 µl pipettentipvullingenBioVentures5030080C
1.000 µl pipettentipvullingenBioVentures5130140C
AluminiumfolieVerschillende leveranciersWorden gebruikt om kralen in het donker te houden tijdens incubatie
Diepe puttenVWR40002-009Worden gebruikt voor het verdunnen van speekselmonsters
Multiscreen Filter PlatenMilliporeMABVN1250Worden gebruikt voor het uitvoeren van tests
Oracol speekselopvangsysteemMalvern Medical Developments LimitedWorden gebruikt voor speekselopvang
Reagentia
Gecarboxyleerde microsferen (kralen)Luminex CorporationAfhankelijk van kralenstelAntigenen worden gekoppeld aan de microsferen
EDC (1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl] carbodiimide hydrochloride)Pierce77149 of 22980Worden gebruikt bij kralenactivatie
Sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide)Pierce24510Worden gebruikt bij kralenactivatie
Steptavidin-R-fycoerytrine (1 mg/ml)Molecular ProbesS-866Worden gebruikt als reporter
MES (2-[N-Morpholino]ethanesulfonic acid)SigmaM-2933Worden gebruikt voor koppeling
Tween

Referenties

  1. Prüss-Üstün, A., Gore, F., Bartram, J. Safer water, better health: costs, benefits and sustainability of interventions to protect and promote health. , World Health Organization. Geneva. (2008).
  2. Augustine, S., et al. Statistical approaches to developing a multiplex immunoassay for determining human exposure to environmental pathogens. J Immunol Methods. 425, 1-9 (2015).
  3. Griffin, S., et al. Application of salivary antibody immunoassays for the detection of incident infections with Norwalk virus in a group of volunteers. J Immunol Methods. 424, 53-63 (2015).
  4. Griffin, S., Chen, I., Fout, G., Wade, T., Egorov, A. Development of a multiplex microsphere immunoassay for the quantitation of salivary antibody responses to selected waterborne pathogens. J Immunol Methods. 364 (1-2), 83-93 (2011).
  5. Ferguson, D. Current diagnostic uses of saliva. J Dent Res. 66, 420-424 (1987).
  6. Mandel, I. The diagnostic uses of saliva. J Oral Pathol Med. 19, 119-125 (1990).
  7. Malamud, D. Saliva as a Diagnostic Fluid. Brit Med J. 305, 207-208 (1992).
  8. Ballam, L., et al. Western blotting is useful in the salivary diagnosis of Helicobacter pylori infection. J Clin Pathol. 53, 314-317 (2000).
  9. Estevez, P., Satoguina, J., Nwakanma, D., West, S., Conway, D., Drakeley, C. Human saliva as a source of anti-malarial antibodies to examine population exposure to Plasmodium falciparum. Malar J. 10, 104(2011).
  10. Abd-Alla, M., Jackson, T., Reddy, S., Ravdin, J. Diagnosis of invasive amebiasis by enzyme-linked immunosorbent assay of saliva to detect amebic lectin antigen and anti-lectin immunoglobulin G antibodies. J Clin Microbiol. 38 (6), 2344-2347 (2000).
  11. Toyoguchi, A., et al. Antibody reactivity to Cryptosporidium parvum in saliva of calves after experimental infection. J Vet Med Sci. 62 (11), 1231-1234 (2000).
  12. Choo, S., Zhang, Q., Seymour, L., Akhtar, S., Finn, A. Primary and booster salivary antibody responses to a 7-valent pneumococcal conjugate vaccine in infants. J Infect Dis. 182 (4), 1260-1263 (2000).
  13. Tourinho, R., et al. Importance of the cutoff ratio for detecting antibodies against hepatitis A virus in oral fluids by enzyme immunoassay. J Virol Methods. 173 (2), 169-174 (2011).
  14. Moorthy, M., Daniel, H., Kurian, G., Abraham, P. An evaluation of saliva as an alternative to plasma for the detection of hepatitis C virus antibodies. Indian J Med Microbiol. 26 (4), 327-332 (2008).
  15. Moe, C., Sair, A., Lindesmith, L., Estes, M., Jaykus, L. Diagnosis of norwalk virus infection by indirect enzyme immunoassay detection of salivary antibodies to recombinant norwalk virus antigen. Clin Diagn Lab Immunol. 11 (6), 1028-1034 (2004).
  16. Yap, G., Sil, B., Ng, L. Use of saliva for early dengue diagnosis. PLoS Negl Trop Dis. 5 (5), e1046(2011).
  17. Schramm, W., Angulo, G., Torres, P., Burgess-Cassler, A. A simple saliva-based test for detecting antibodies to human immunodeficiency virus. Clin Diagn Lab Immunol. 6 (4), 577-580 (1999).
  18. Chart, H., Perry, N., Willshaw, G., Cheasty, T. Analysis of saliva for antibodies to the LPS of Escherichia coli O157 in patients with serum antibodies to E. coli O157 LPS. J Med Microbiol. 52 (Pt 7), 569-572 (2003).
  19. Ashbolt, N., Bruno, M. Application and refinement of the WHO risk framework for recreational waters in Sydney, Australia. J Water Health. 1 (3), 125-131 (2003).
  20. Westrell, T., Schonning, C., Stenstrom, T., Ashbolt, N. QMRA (quantitative microbial risk assessment) and HACCP (hazard analysis and critical control points) for management of pathogens in wastewater and sewage sludge treatment and reuse. Water Sci Technol. 50 (2), 23-30 (2004).
  21. Ashbolt, N. Microbial contamination of drinking water and disease outcomes in developing regions. Toxicology. 198 (1-3), 229-238 (2004).
  22. Eisenberg, J., Soller, J., Scott, J., Eisenberg, D., Colford, J. Jr A dynamic model to assess microbial health risks associated with beneficial uses of biosolids. Risk Anal. 24, 221-236 (2004).
  23. Wade, T. J., et al. Report on 2009 National Epidemiologic and Environmental Assessment of Recreational Water Epidemiology Studies, US EPA. US EPA Report Number: EPA/600/R-10/168: US EPA2011. , (2011).
  24. Fujii, Y., et al. Serological surveillance development for tropical infectious diseases using simultaneous microsphere-based multiplex assays and finite mixture models. PLoS Negl Trop Dis. 8, e3040(2014).
  25. Rota, M., Massari, M., Gabutti, G., Guido, M., De Donno, A., Ciofi degli Atti, M. Measles serological survey in the Italian population: interpretation of results using mixture model. Vaccine. 26 (34), 4403-4409 (2008).
  26. Vyse, A., Gay, N., Hesketh, L., Pebody, R., Morgan-Capner, P., Miller, P. Interpreting serological surveys using mixture models: the seroepidemiology of measles, mumps and rubella in England and Wales at the beginning of the 21st century. Epidemiol Infect. 134 (6), 1303-1312 (2006).
  27. Baughman, A., et al. Establishment of diagnostic cutoff points for levels of serum antibodies to pertussis toxin, filamentous hemagglutinin, and fimbriae in adolescents and adults in the United States. Clin Diagn Lab Immunol. 11 (6), 1045-1053 (2004).
  28. Clotilde, L., Bernard, C. IV, Hartman, G., Lau, D., Carter, J. Microbead-based immunoassay for simultaneous detection of Shiga toxins and isolation of Escherichia coli O157 in foods. J Food Prot. 74 (3), 373-379 (2011).
  29. Luminex User Software Manual (RUO) xPONENT 3.1 Rev. 2. 3, 6-102 (2014).
  30. Waterboer, T., Sehr, P., Pawlita, M. Suppression of non-specific binding in serological Luminex assays. J Immunol Methods. 309 (1-2), 200-204 (2006).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

bead gebaseerde assayflowcytometrieantigeenkoppelingmenselijk speekselsecundaire detectiestreptavidine R PEmediane fluorescentie intensiteit
Het ontwikkelen van een Speeksel Antibody Multiplex Immunoassay menselijke blootstelling aan Environmental Pathogens Meet
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.