Het knaagdier Model van nonarteritic anterior ischemische optische neuropathie (rNAION)

Samenvatting

Het volgende rapport beschrijft hoe je het knaagdiermodel van nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (rNAION) kunt repliceren, met behulp van de juiste kleurstof, contactlens en laserparameters. We onthullen ook de juiste stappen voor het evalueren van de rNAION-laesie in vivo.

Samenvatting

Non-arteriettische anterieure ischemische optische neuropathie (NAION) is een focale ischemische laesie van de oogzenuw die 1 op de 700 personen gedurende hun leven treft. NAION resulteert in oogontzending, selectieve verliezen van de retinale ganglioncelneuronen (RGC's) en atrofie van de oogzenuw. Er is een knaagdiermodel van NAION ontwikkeld dat de meeste kenmerken en gevolgen van NAION vertoont en dat zowel op ratten als op muizen van toepassing is. Dit model maakt gebruik van een focale lasertoepassing met een golflengte van 532 nm om een fotoactieve kleurstof, Rose Bengal (RB), te belichten en hierdoor capillaire schade en lekkage te veroorzaken in de beoogde voorste oogzenuw (de laminaire regio). Na inductie van rNAION is er een vroege oogzenuwishemie, oogontzending en intraneurale ontsteking, gevolgd door selectieve RGC- en axonalverliezen. Omdat de oogzenuw een witte stofbaan van het centrale zenuwstelsel is, is het rNAION-model toepasbaar voor mechanistische studies van selectieve ischemische witte stof, evenals voor neuroprotectieve analyses en korte en lange termijn mechanismen van gliale en neuronale reacties op ischemische aandoeningen.

Inleiding

Nonarteritic anterior ischemische optische neuropathie (NAION) is een focale ischemische letsel van het voorste gedeelte van de oogzenuw (ON) ^1. NAION is de meest voorkomende oorzaak van plotselinge oogzenuw gerelateerde gezichtsverlies bij personen ouder dan 50 ^2. Het mechanisme wordt aangenomen dat een compartiment syndroom dat resulteert in intraneurale oedeem en compressie veroorzaakt van de capillairen leveren axons in de oogzenuw ^3.

Aangezien de ON eigenlijk een centraal zenuwstelsel (CZS) kanaal, kan het knaagdier NAION (rNAION) model worden gebruikt om de mechanismen te bestuderen en reacties op ge....

Protocol

Dit protocol werd goedgekeurd door de Universiteit van Maryland Institutional Animal Care en Ingebruikname Comité (IACUC, Baltimore, MD, USA)

1. Experimental Set-up

1. Wordt maat ontworpen contactlens van een heldere optische kwaliteit cirkelvormige 7 mm diameter plexiglas, dikte 3 mm. Snijd de ronde lenzen met een kolomboormachine. Gebruik een standaard boorbeitel aan de binnenbocht maken, en ten slotte polijsten de buitenste en binnenste weer door middel van een contactlens polijstmachine ultrafijne korrel (1000/3000).
2. Bereid 2,5 mM Rose Bengal (RB) in pH 7,4 fosfaatbuffer zoutoplossing (PBS) vooraf filter steriliseren....

Resultaten

De contactlens ingeschakeld centrale retina visualiseren (figuur 1). Het brandpunt laserspot belicht de optische schijf aan de achterkant van de retina (Figuur 2). De normale-un geïnduceerde retina wordt afgebeeld door spleetlamp bio-microscoop (figuur 3A) en SD-oktober (Figuur 3B en 3C). Tijdens laser inductie, als er geen kleurstof aanwezig in de circulatie, laserlicht niet tot vat en schijf fluorescentie

Discussie

Hoewel er een aantal modellen van de schade aan de oogzenuw (oogzenuw verpletteren ^12, oogzenuw doorsnijding ^13, en PION ^14), de rNAION model humaan is, aan te passen aan zowel ratten en muizen. Het lijkt beter de menselijke klinische toestand van NAION. Deze voorwaarde omvat progressieve anterior oogzenuw oedeem, een anterieure oogzenuw compartiment syndroom, focale axonale ischemie, geïsoleerde retinale ganglion cel axonen schade en verlies over een langere tijdsverloop. Dit verslag le.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
50 mW 532 nm laser	Iridex		Standaard oogheelkundige laser
0 - 100 mW 532 nm laser	Laserglow technologies		Vervanger voor iridex
Laser spleetlamp adapter	Iridex		SMA gekoppelde adapter voor laseruitgang
Coherent Fieldmate lasermeter met thermopijlsensor	Coherent		anderen ook geschikt
Oogheelkundig onderzoekende spleetlamp biomicroscoop	Verschillende		Haag-Streit is de beste; goedkopere versies verkrijgbaar op ebay
Rose Bengal	Sigma	330000-1G	Foto-inducerend middel
Fundus contactlens of glazen deksel	custom/Cantor en Nissel (UK)		Op maat gemaakte planoconvexe plastic lens voor oogonderzoek en inductie
Tropicamide 1%
Tamiya polijstpasta	Tamiya, INC	87068	contactlens polijsten
2,5% Hypromellose (Goniovisc)/1% Methycellulose	HUB Pharmaceuticals		contactlens koppelingsmiddel
2,5% Neosynephrine oogdruppels	Alcon labs		pupilverwijdend middel
Tropicamide 1%	Alcon labs		pupilverwijdend middel
0,5% Proparacaine	Alcon labs		topisch verdovingsmiddel
30 G versmolten naald insulinespuit	Verschillende	Verschillende	voor intraveneuze injectie van rose bengal
Oogheelkundig antibioticumzalf met toegevoegd dexamethason (drivoudige antibioticumzalf)	Verschillende	Verschillende	Aanbrengen na inductie om hoornvlieslittekens te minimaliseren
Heidelberg Corporation Spectral domein-Optische Coherenstomograaf	Heidelberg Corporation		Voor optische coherentiemetingen baseline en post-inductie; niet essentieel voor inductie