Dit manuscript beschrijft meerdere protocollen voor het toedienen van farmacologische middelen aan de bijen, waaronder eenvoudige niet-invasieve methoden voor vrij vliegende bijen, evenals meer invasieve varianten die precies gelokaliseerde behandeling van ingehouden bijen mogelijk.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Neurofarmacologische Manipulatie van ingetogen en vrij vliegende Honingbijen,
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Honingbijen demonstreren verbazingwekkend leervermogen en geavanceerde sociaal gedrag en communicatie. Bovendien is hun hersenen is klein, eenvoudig te visualiseren en te bestuderen. Daarom hebben de bijen al lang een geliefd model onder neurobiologists en neuroethologists voor het bestuderen van de neurale basis van sociaal en natuurlijk gedrag. Het is echter belangrijk dat de experimentele technieken voor bijen studie niet interfereren met het gedrag bestudeerd. Hierdoor was het noodzakelijk om een reeks van technieken voor farmacologische manipulatie van honingbijen ontwikkelen. In dit artikel tonen we aan methoden voor de behandeling van ingehouden of vrij vliegende honingbijen met een brede waaier van farmacologische middelen. Deze omvatten zowel niet-invasieve methoden zoals orale en topische behandelingen, evenals meer invasieve methoden maken het precies geneesmiddelafgifte in zowel systemische of gelokaliseerde wijze. Tot slot bespreken we de voor- en nadelen van elke methode en beschrijfvoorkomende hindernissen en de beste manier om te overwinnen hen. We sluiten af met een discussie over het belang van het aanpassen van de experimentele methode om de biologische vragen in plaats van andersom.
Inleiding
Sinds Karl von Frisch toegelicht hun danstaal 1, hebben de bijen een populaire studie soort bleef voor onderzoekers in het gedrag van dieren en neurobiologie. In de afgelopen jaren een groot aantal nieuwe disciplines zijn ontstaan op de kruising van deze twee gebieden, en diverse andere disciplines (zoals moleculaire biologie, genomics, en informatica) hebben samen met hen ontstaan. Dit heeft geleid tot een snelle ontwikkeling van nieuwe modellen is te begrijpen hoe gedrag resulteert uit activiteit in het zenuwstelsel. Vanwege het unieke lifestyle, rijke gedragsrepertoire, en het gemak van de experimentele en farmacologische manipulatie, hebben de....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Drug Administration voor Uitgeruste Bees
- orale behandeling
- Bereid 1,5 M sucrose oplossing door het mengen van 257 g sucrose met 500 ml water (het is gemakkelijker om deze hoeveelheid sucrose oplossen in kokend water). Bewaar sucrose-oplossing bij 4 ° C tot gebruik.
OPMERKING: Sucrose-oplossing biedt een zeer gastvrije omgeving voor bepaalde micro-organismen, en dus gemakkelijk verontreinigd raakt en onverteerbaar voor bijen. Bulk sucrose oplossing kan worden hoeveelheden verdeeld en opgeslagen bij -20 ° C tot gebruik. - Beslis over een geschikte dosis drug (hoe het te bereiken, komt aan bod in de discussie hieron....
- Bereid 1,5 M sucrose oplossing door het mengen van 257 g sucrose met 500 ml water (het is gemakkelijker om deze hoeveelheid sucrose oplossen in kokend water). Bewaar sucrose-oplossing bij 4 ° C tot gebruik.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Een selectie van representatieve resultaten van de hierboven beschreven werkwijzen zijn getoond, primair te tonen dat de werkwijzen maken farmacologische middelen naar de hersenen bereiken en beïnvloeden honingbij gedrag.
Specifieke effecten op hersenen processen kunnen gemakkelijk worden verkregen na injectie thorax.
Omdat farmacologische middelen geïnjecteerd door de.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De hierboven beschreven methoden kunt eenvoudige, effectieve en robuuste behandeling van ofwel free-flying of benut honingbijen. Deze werkwijzen kunnen op tal experimentele paradigma en biologische bevat (Tabel 1). Alle free-flying werkwijzen kunnen eenvoudig worden toegepast op benut bijen. Het omgekeerde is minder succesvol, maar omdat tijdelijke beperking en invasieve behandelmethoden vaak compromis vliegende vermogen bijen.
De methoden zijn gepresenteerd vanuit een brein.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit project werd gefinancierd door ARC-subsidie DP0986021 en NHMRC-subsidie 585442. ABB wordt ondersteund door een ARC Future Fellowship (FT140100452). JAP wordt ondersteund door een iMQRES-beurs toegekend door Macquarie University en door een DAAD-Doktorandenstipendium toegekend door de German Academic Exchange Service. JMD wordt ondersteund door CNRS en University Paul Sabatier.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Sucrose | Sigma-Aldrich | S8501 | Elke leverancier is voldoende |
| Sodium Chloride | Sigma-Aldrich | S7653 | |
| Potassium Chloride | Sigma-Aldrich | P9333 | |
| Magnesium Chloride hexahydrate | Sigma-Aldrich | M2670 | |
| Calcium Chloride dihydrate | Sigma-Aldrich | C8106 | |
| Dextrose monohydrate | Sigma-Aldrich | 49159 | |
| Phosphate Buffer Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | P4417 | |
| Protection Wax | Dentaurum | 124-305-00 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| dimethylformamide | Sigma-Aldrich | D4551 | |
| 95% Ethanol | Sigma-Aldrich | 493511 | |
| Glass capillary | WPI | 1B100F-3 | |
| 23 G NanoFil needle | WPI | NF33BV-2 | |
| Very fine forsceps | Dumont | 0208-55-PO | |
| Electrode puller | SRI | 2001 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf | 5247 000.01 | |
| Eicosane | Sigma-Aldrich | 219274 | |
| manual micromanipulator | Brinkmann Instrumentenbau | MM-33 | |
| electronic micromanipulator | Luigs & Neumann Feinmechanik + Elektortechnik | Junior unit XYZ | |
| stereomicroscope | Leica | M80 | |
| soldering iron | Weller | WESD51 | |
| Dextran, Alexa Fluor 546, 10,000 MW | ThermoFisher Scientific | D-22911 | |
| Dextran, Alexa Fluor 568, 10,000 MW | ThermoFisher Scientific | D-22912 | |
| small Petri dish | Sigma-Aldrich | P5481 | |
| mineral oil | Sigma-Aldrich | M5904 | |
| 50 ml Centrifuge tube | ThermoFisher Scientific | 339652 | |
| forceps | Australian Entomological Supplies | ||
| Blade holder and breaker | Australian Entomological Supplies | E130 | |
| Feather double edged razor blade | ThermoFisher Scientific | 50-949-135 | |
| Nichrome wire | Elke leverancier is voldoende | ||
| Electrical wires | Elke leverancier is voldoende | ||
| Model paint | Tamiya USA | Afhankelijk van de kleur | |
| Repeating dispenser | Hamilton company | PB-600-1 | |
| Glass syringe | WPI | NANOFIL | |
| flourescence viewing system | Nightsea | SFR-GR | |
| graticule | ProSciTech | S8014-24 | |
| microcapillary with holder | Drummond | 1-000-0010 | |
| Liquid silicone | Elke leverancier is voldoende | ||
| Thermocouple | Digitech | QM-1324 | |
| Micropipette | Eppendorf |
Referenties
- Frisch, K. . von B. ees Their Vision, Chemical Senses, and Language. , Cornell University Press. Itacha, NY. (1971).
- Giurfa, M. The amazing mini-brain: lessons from a honey bee. Bee World. 84 (1), 5-18 (2003).
- Giurfa, M.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
