Er is een methode ontwikkeld om de specifieke warmtecapaciteit en thermische geleidbaarheid van bladweefsel te bepalen door niet-invasieve, contactloze nabij-infrarode laseronderzoek, wat minder dan 1 minuut per monster vereist.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Er is een methode ontwikkeld om de specifieke warmtecapaciteit en thermische geleidbaarheid van bladweefsel te bepalen door niet-invasieve, contactloze nabij-infrarode laseronderzoek, wat minder dan 1 minuut per monster vereist.
Planten kunnen waardevolle stoffen zoals secundaire metabolieten en recombinante eiwitten. De zuivering van deze uit plantaardige biomassa op elkaar afstemt door warmtebehandeling (blancheren). Een blancheren inrichting kan nader worden ontworpen als het thermische eigenschappen van de bladeren in detail, dat wil zeggen, de soortelijke warmte en thermische geleidbaarheid bekend. Het meten van deze eigenschappen is tijdrovend en arbeidsintensief, en meestal vereist invasieve methoden die rechtstreeks contact opnemen met het monster. Dit kan het product opbrengst te verminderen en kunnen onverenigbaar zijn met insluiting eisen zijn, bijvoorbeeld in het kader van de goede praktijken bij het vervaardigen. Om deze problemen aan te pakken, werd een niet-invasieve, contactloze methode ontwikkeld die de specifieke warmtecapaciteit en thermische geleidbaarheid van een plant blad intact in ongeveer één minuut bepaalt. De werkwijze omvat de toepassing van een korte laserpuls van gedefinieerde lengte en intensiteit tot een klein gebied van debladmonster, waardoor een temperatuurstijging die wordt gemeten met een nabij-infrarood sensor. De temperatuurstijging wordt gecombineerd met bekende eigenschappen blad (dikte en dichtheid) aan de specifieke warmtecapaciteit bepalen. De thermische geleidbaarheid wordt dan berekend op basis van het profiel van de daaropvolgende daling temperatuur, waarbij thermische straling en convectie warmteoverdracht rekening. De bijbehorende berekeningen en kritische aspecten van het monster handling worden besproken.
De grootschalige verwerking van biologische materialen vereist vaak warmte-behandelingsstappen, zoals pasteurisatie. Apparatuur voor dergelijke processen kan nauwkeuriger worden ontworpen indien de thermische eigenschappen van het biologisch materiaal goed gekarakteriseerd, inclusief de specifieke warmtecapaciteit (c p, s) en warmtegeleidingsvermogen (λ). Deze parameters kunnen gemakkelijk worden bepaald voor vloeistoffen, suspensies en homogenaten door calorimetrie 1. Echter, het meten van deze parameters in vaste stoffen arbeidsintensief en vereist vaak direct contact met het monster of de vernietiging 2. Bijvoorbeeld, fotothermische technieken vereisen direct contact tussen het monster en de detector 3. Dergelijke beperkingen zijn tijdens de verwerking van levensmiddelen acceptabel, maar niet verenigbaar zijn met sterk gereguleerde processen zoals de productie van biofarmaceutische eiwitten in planten in het kader van de goede praktijken bij het vervaardigen 4. ikn dergelijke context herhaald (bijvoorbeeld wekelijks) bewaking thermische eigenschappen worden gedurende zeven weken groeiperiode individuele bedrijven als kwaliteitscontrole gereedschap nodig. Indien een dergelijke controle vergt en verbruiken blad voor elke meting, zou er geen biomassa links te verwerken bij de oogst.
Bovendien zou het gebruik alleen bladdelen plaats zou veroorzaken verwonding aan de plant en het risico van necrose of pathogeen infectie opnieuw verminderen het proces opbrengst. De kans pathogeen infectie kan ook toenemen indien een methode met rechtstreeks contact met het monster worden gebruikt, induceren het risico dat een gehele partij planten kunnen worden geïnfecteerd door contact met besmette sensorinrichting. Vergelijkbare aspecten moeten worden overwogen voor de bewaking van installaties benadrukt, zoals droogte, bijvoorbeeld in een ecofysiologische context. Zo wordt waterverlies vaak gevolgd door een verandering in de verse biomassa, die een invasieve tre vereistatment van de planten in het kader van het onderzoek 5, bijvoorbeeld, het ontleden van een blad. In plaats daarvan bepalen van de soortelijke warmte, die afhangt van het watergehalte van een monster op een niet-invasieve manier zoals hier beschreven, kan worden gebruikt als een surrogaat parameter voor vochtstatus planten. In beide scenario's (farmaceutische productie en ecofysiologie), zou kunstmatige spanningen veroorzaakt door destructieve of invasieve meettechnieken schadelijk zijn als ze de experimentele gegevens kunnen verstoren. Daarom eerder beschreven flitsmethoden 6 of het plaatsen van monsters tussen zilver platen 7 zijn geschikt voor dergelijke processen en experimenten omdat ze ofwel direct contact met het monster nodig hebben of destructief. De parameters c p, s en λ moeten worden bepaald om de procesapparatuur te ontwerpen voor een blancheerstap die productzuivering kan vereenvoudigen en dus vermindering productiekosten 8-10. beide cp, s en λ kunnen nu snel worden bepaald door contactvrije non-destructieve nabij infrarood (NIR) laser sonderen op consistente en reproduceerbare wijze 11 en deze nieuwe methode wordt hieronder in detail toegelicht. De met deze werkwijze verkregen resultaten werden met succes gebruikt voor warmteoverdracht simuleren tabaksbladeren 12, waardoor het ontwerp van geschikte apparatuur en de selectie van overeenkomstige parameters zoals de temperatuur blancheren.
De methode is eenvoudig op te zetten (figuur 1) en heeft twee fasen, meting en analyse, die elk twee belangrijke stappen. In de meting fase wordt een blad monster eerste lokaal verwarmd door een korte laserpuls en de maximale temperatuur van het monster wordt vastgelegd. Het temperatuurprofiel van het monster wordt vervolgens geregistreerd voor een periode van 50 s. In de analysefase, blad zoals densiteit (gemakkelijk en nauwkeurig bepaald pyknometrische measurement) worden met de maximale monstertemperatuur te cp berekenen, s. In de tweede stap wordt het blad temperatuurprofiel gebruikt als input voor een energiebalans vergelijking, waarbij geleiding, convectie en straling, houdt, λ berekenen.
Uitvoerige stap-voor-stap instructies vindt u in de sectie protocol, dieper ingaan op de inhoud van de bijbehorende video. Typische metingen worden vervolgens getoond in de sectie resultaten. Tenslotte, de voordelen en beperkingen van de werkwijze worden toegelicht in de bespreking doorsnede met potentiële verbeteringen en verdere toepassingen.

Figuur 1: apparatuur die wordt gebruikt om blad thermische eigenschappen te bepalen. A. Foto van de meetinrichting gebruikt om de specifieke warmtecapaciteit en warmtegeleidingsvermogen van le bepalenAves. Randapparatuur (computers, oscilloscoop) niet getoond. B. Schematische weergave van de meetinrichting. De laser en de aangesloten apparatuur zijn rood gemarkeerd, wordt de NIR detector voor temperatuurmeting getoond in paars, het blad monster is groen en de fotodiode stroom sensor is blauw. C. Tekening van de elementen van de meetopstelling met dezelfde kleurcode als in B. De maat balk geeft 0,1 m. D. Screenshot illustreert de typische elementen van de laser besturingssoftware. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
1. plantenteelt en Monstervoorbereiding
2. Bepaal Leaf dikte en de dichtheid

3. Bepaal de Spectral Transmission en Reflectie van Bladeren

4. Stel de meetapparatuur
5. Bereid de Leaf Samples
6. Neem de temperatuurmetingen


Figuur 2: Het meten blad transmissie met behulp van een fotodiode stroom sensor. A. Typische profiel spanning voor een referentie-experiment zonder een blad steekproef gevisualiseerd met behulp van een oscilloscoop. B. spanningsprofielmet een blad monster aangebracht in de inrichting. In beide gevallen, het uitgezonden laservermogen evenredig is met elk van de twee flanken. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
7. Bereken de soortelijke warmte van de Leaf Sample




8. Bereid de temperatuur profiel gegevens voor Thermal geleidbaarheid Berekeningen


Figuur 3: Data verwerking schema voor de berekening van de λ. A. Na datareductie, de temperatuurprofielen genormaliseerd tot de omgevingstemperatuur. B. Vervolgens datapunten voor de maximale monstertemperatuur (T max) worden verwijderd. C. Meting artefacten (weergegeven in de "inconsistent" data set) worden geïdentificeerd op basis van de temperatuur verschuift groter dan three maal de basislijnruis en verwijderd uit de dataset voorafgaand aan montage op een exponentiële functie. D. De Celsius temperatuurschaal wordt omgezet in het Kelvin schaal. E. Voor elk tijdsinterval is λ berekend op basis van het temperatuurprofiel. F. Een venster van 20 s gedefinieerd waarop een relevante temperatuur verandering kan worden waargenomen. G. Op basis van de geselecteerde tijdvenster, worden de gemiddelde en de standaarddeviatie berekend voor λ. H. Representatieve resultaten voor twee verschillende N. tabacum blad monsters. Oranje pijlen en lijnen geven het effect van de desbetreffende bewerkingsstap op de gepresenteerde gegevens. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
9. Berekening van de thermische geleidbaarheid van het blad Sample






Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Meting van de Leaf Properties
Onder toepassing van bovenstaande microscopische methode, een bladdikte van 0,22-0,29 x 10-3 m werd voor beide N. tabacum (0,25 ± 0,04 x 10-3 m, n = 33) en N. benthamiana (0,26 ± 0,02 x 10 - 3 m, n = 24), hetgeen ruim binnen het 0,20-0,33 x 10-3 m bereik eerder gerapporteerde ...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De contactloze, niet-destructieve meetmethode beschreven kan worden bepaald c p, s en ʎ in een gelijktijdige en reproduceerbare wijze. De berekening van ʎ name hangt af van verschillende parameters die gevoelig zijn voor fouten. Toch is de invloed van deze fouten is lineair of sub-proportionele en de variatiecoëfficiënt voor alle parameters bleek minder dan 10% bedragen. Hoewel de werkwijze dus zo robuust kunnen worden beschouwd, kunnen sommige technische verbeteringen worden aangebracht in de rester...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.
De auteurs zijn Dr. Thomas Rademacher en Ibrahim Al Amedi dankbaar voor het kweken van de planten die in dit onderzoek zijn gebruikt. We willen Dr. Richard M. Twyman bedanken voor zijn hulp bij het bewerken van het manuscript. Dit werk werd gedeeltelijk gefinancierd door de European Research Council Advanced Grant "Future-Pharma", voorstelnummer 269110, de Fraunhofer Zukunftsstiftung (Toekomststichting), de Fraunhofer-Gesellschaft Interne Programma's onder subsidienummer Attract 125-600164.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 1" tube | Thorlabs | SM1L10E | Buis voor vezelhouder |
| Agarose | Sigma Aldrich | A0701 | Agarose |
| Bi-Convex lense f=25.4 | Thorlabs | LB1761 | Lens |
| Digital Handheld Optical Power and Energy Meter Console | Thorlabs | PM100D | Console voor thermische oppervlakte-absorber sensor |
| Digital Phosphor Oscilloscope | Tektronix | DPO7104 | Oscilloscoop |
| DMR light microscope | Leica | n.a. | Lichtmicroscoop |
| Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-432-2 | Pyknometer |
| Ferty 2 Mega | Kammlott | 5.220072 | Mest |
| Fiber holder | Thorlabs | Vezelhouder | |
| Forma -86 °C ULT freezer | ThermoFisher | 88400 | Vriezer |
| Greenhouse | n.a. | n.a. | Voor plantencultuur |
| Grodan Rockwool Cubes 10 x 10 cm | Grodan | 102446 | Steengoedblok |
| Infrared Detector Optris CT | Optris | OPTCTLT15 | Infrarooddetector |
| Infrared Detector Software Compact Connect | Optris | n.a. | Besturingssoftware voor infrarooddetector |
| Lambda 1050 UV/Vis spectrophotometer | PerkinElmer | L1050 | UV/VIS Spectrofotometer |
| Laser 400 μm, 1,550 nm Conduction Cooled Single Bar Fiber Coupled Module | DILAS | M1F-SS2.1 | Laser |
| Laser cover | Amtron | LM200 | Lasercover |
| Laser Driver | Amtron | CS 408 | Laserdriver |
| Osram cool white 36 W | Osram | 4930440 | Lichtbron |
| Photodiode sensor | Thorlabs | PDA20H-EC | Vermogenssensor voor transmissiemetingen |
| Precision weight Ohaus Analytical Plus | Ohaus | 80251552 | Precisiegewicht |
| Sample frame | Fraunhofer ILT | n.a. | Vestiging van het bladmonster |
| Software Pyro Control | Amtron | n.a. | Laservermogensbesturingssoftware |
| Stainless-steel-holder | n.a. | n.a. | Houder voor meetopstelling |
| Teflon plates 2 cm | Fraunhofer ILT | n.a. | Teflondemping |
| Thermal surface absorber Power sensor | Thorlabs | S314C | Sensor voor laservermogensmetingen |
| Vibratome | Leica | 1491200S001 | Vibratome |
| Zoc/Pro 6.51 | EmTec Innovative Software | n.a. | Laserbesturingssoftware |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.