Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Antikanker werkzaamheid van Photo Dynamische Therapie met longkanker-Gerichte Nanodeeltjes

8.3K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/54865

⸱

1 december 2016

 ,  , 
1Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University Bundang Hospital, 2College of Pharmacy, Kangwon National University, 3Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University College of Medicine

In dit artikel

Samenvatting

Fotodynamische therapie (PDT) is een alternatieve keuze voor de behandeling van longkanker. Om het therapeutische effect van PDT te verhogen, werden op longkanker gerichte nanodeeltjes in combinatie met chemotherapie ontwikkeld. Zowel in vitro als in vivo werden de antikankereffectiviteiten van PDT met bereide nanodeeltjes geëvalueerd.

Samenvatting

Fotodynamische therapie (PDT) is een niet-invasieve en niet-chirurgische methode die een aantrekkelijke alternatieve keuze vertegenwoordigt voor de behandeling van longkanker. Fotosensitizers accumuleren selectief in tumorweefsel en leiden tot tumorceldood in de aanwezigheid van zuurstof en de juiste golflengte van licht.

Om het therapeutische effect van PDT te verhogen, ontwikkelden we zowel fotosensitizer- als kankerbestrijdende middel-geladen longkanker-gerichte nanodeeltjes. Zowel passieve targeting gebaseerd op het effect van verhoogde permeabiliteit en retentie (EPR) als actieve targeting gebaseerd op de interactie tussen hyaluronzuur en CD44 werd toegepast. CD44 is een bekende hyaluronzuurreceptor die vaak wordt geïntroduceerd als een biomerker van niet-kleincellige longkanker.

Daarnaast wordt in de huidige studie een combinatie van PDT en chemotherapie toegepast. Dit combinatieconcept kan de kankerbestrijdende therapeutische effecten verhogen en bijwerkingen verminderen.

We kozen hypocrellin B (HB) als een nieuwe fotosensitizer in deze studie. Er is gerapporteerd dat HB een hogere kankerbestrijdende werkzaamheid van PDT veroorzaakt in vergelijking met hematoporfyrinederivaten1. Paclitaxel werd geselecteerd als het kankerbestrijdende middel omdat het bewezen heeft een potentiële behandeling voor longkanker te zijn2.

De antitumor-effectiviteiten van de fotosensitizer (HB) oplossing, de fotosensitizer ingekapselde hyaluronzuur-ceramideen nanodeeltjes (HB-NP's), en zowel de fotosensitizer- als het kankerbestrijdende middel (paclitaxel) ingekapselde hyaluronzuur-ceramideen nanodeeltjes (HB-P-NP's) na PDT werden zowel in vitro als in vivo vergeleken. De in vitro fototoxiciteit in A549 (menselijke longadenocarcinoom) cellen en de in vivo antitumor-effectiviteit bij A549 tumor-dragende muizen werden geëvalueerd.

De HB-P-NP behandelingsgroep vertoonde het meest effectieve kankerbestrijdende effect na PDT. Concluderend, vertegenwoordigen de HB-P-NP's bereid in de huidige studie een potentiële en nieuwe fotosensitizer-afleveringssysteem bij de behandeling van longkanker met PDT.

Inleiding

Fotodynamische therapie (PDT) bestaat uit drie belangrijke factoren: fotosensibilisatoren, licht en zuurstof. PDT wordt gerapporteerd als een veelbelovende behandeling voor verschillende vormen van kanker3. Wanneer de fotosensibilisatoren worden toegediend aan de kankerpatiënt, accumuleren ze selectief in de tumorweefsels. Wanneer de juiste golflengte van licht wordt toegepast, leiden de zeer reactieve singlet zuurstof en andere vrije radicalen tot schade aan de tumorcellen4.

Longkanker werd geïntroduceerd als een van de eerste toepassingen voor PDT in de vroege jaren 805. PDT biedt verschillende voordelen bij de behandeling van longkanker. Omdat PDT een niet-invasieve en niet-chirurgische behandeling is, is het een aantrekkelijke alternatieve keuze voor patiënten waarbij chirurgische resectie ongeschikt is.

Er zijn veel uitdagingen geweest om de kanker-targetende werkzaamheid van de fotosensibilisatoren te verbeteren. Het verhogen van de accumulatie van fotosensibilisatoren op kankerplaatsen en het verminderen van de accumulatie in normale weefsels zijn de identieke doelen voor de kanker-targetende studies. Een verscheidenheid aan gerichte geneesmiddelafgiftesystemen, zoals polymeren, liposomen en nanodeeltjes, worden gebruikt als fotosensibilisatorendragers6-8. In onze eerdere studies verhoogden nanodeeltjes effectief de kanker-targetende capaciteiten van de fotosensibilisatoren9,10. Nanodeeltjes zijn ideale kanker-targetende dragers omdat ze zowel passieve als actieve targeterende capaciteiten hebben. De lekkende tumorvaten bieden de mogelijkheid voor nano-groottedragers om gemakkelijk in tumoren te accumuleren, wat bekend staat als het verhoogde permeabiliteit- en retentie-effect (EPR-effect)11,12. De interactie tussen de nanodeeltjes en de specifieke receptoren op kankercellen maakt actieve kankertargeting mogelijk. In deze studie hebben we hyaluronzuur-gebaseerde nanodeeltjes bereid om te interageren met CD44, de belangrijkste hyaluronzuurreceptor die overdreven wordt uitgedrukt op longkankercellen13.

Om de antikankerwerkzaamheid te maximaliseren, wordt in de huidige studie een combinatie van PDT en chemotherapie toegepast. Dit combinatieconcept kan een verhoogd therapeutisch effect toestaan. Bovendien kunnen verlaagde doses van zowel de fotosensibilisator als het antikankermiddel bijwerkingen verminderen. We selecteerden hypocrellin B (HB) als een nieuwe fotosensibilisator in de huidige studie. HB wordt geïsoleerd uit de Chinese medicinale schimmel Hypocrella bambuase. Shang et al. rapporteerden dat HB-gebaseerde PDT een hogere antikankerwerkzaamheid bezit in vergelijking met hematoporfyrinederivaat-gebaseerde PDT1. Paclitaxel werd geselecteerd als het antikankermiddel omdat het bewezen heeft een potentiële behandeling voor verschillende vormen van kanker te zijn, inclusief longkanker2.

Hier vergelijken we de antikankerwerkzaamheden van fotosensibilisator (hypocrellin B, HB) oplossing, fotosensibilisator-gekapselde hyaluronzuur-ceramideenanodeeltjes (HB-NPs), en zowel fotosensibilisator- als antikankermiddel (paclitaxel)-gekapselde hyaluronzuur-ceramideenanodeeltjes (HB-P-NPs) na PDT. De in vitro fototoxiciteit in A549 (menselijke longadenocarcinoom) cellen en de in vivo antitumorwerkzaamheid in A549 tumor-dragende muizen werden geëvalueerd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

LET OP: Alle dierlijke studie protocollen werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van Seoul National University Bundang Ziekenhuis (BA1308-134 / 072-01).

1. Synthese van hyaluronzuur-Ceramide (HACE)

  1. Oplosbaar 12.21 mmol van hyaluronzuur (HA) oligomeer en 9,77 mmol van tetra-n-hydroxide (TBA) in 60 ml dubbel gedestilleerd water (DDW). Roer gedurende 30 minuten.
  2. De DS-Y30 linker synthetiseren lossen 8,59 mmol DS-Y30 ceramide en 9,45 mmol triethylamine in 25 ml tetrahydrofuran (THF). Meng met 8,59 mmol van 4-chloromethylbenzoyl chloride in THF. Roer gedurende 6 uur bij 60 ° C.
  3. Los het gesynthetiseerde 8,10 mmol HA-TBA en 0,41 mmol van DS-Y30 linker in een mengsel van THF en acetonitril (4: 1, v / v). Roer gedurende 5 uur bij 40 ° C.
  4. Verwijderen onzuiverheden door het filteren met een filter middel en elimineren het organische oplosmiddel door vacuümverdamping. Zuiver het product met behulp van een dialysemembraan (moleculair gewicht cut-off: 3,5 kDa) en Lyophilize.

2. Bereiding van de nanodeeltjes

  1. Los 1 mg HB en 1 mg paclitaxel in 0,5 ml dimethylsulfoxide (DMSO) en mengen met 0,5 ml DDW door vortex-mengen gedurende 5 minuten. Vervolgens HACE oplosbaar in het mengsel van vortex-mengen gedurende nog eens 5 min.
  2. Het oplosmiddel, verwarmen bij 70 ° C gedurende 4 uur elimineren onder een voorzichtige stroom stikstofgas.
  3. Resuspendeer de film uit HACE, HB en paclitaxel met 1 ml DDW. Filter met een injectiespuit filter (0,45 pm poriegrootte) om niet-ingekapseld drugs te verwijderen.

3. In vitro fototoxiciteit

  1. Opname van nanodeeltjes in longkankercellijnen
    1. Bereid RPMI-1640-medium bevattende 10% (v / v) foetaal runderserum en 1% (w / v) penicilline-streptomycine.
    2. Zaad A549-cellen in 24-well celcultuur platen bij een dichtheid van 1 x 10 5 cellen / putje (drievouden pergroep). Incubeer gedurende 24 uur bij 37 ° C in een bevochtigde 5% CO2 en 95% lucht atmosfeer.
    3. Na celhechting Verwijder het medium en was de cellen door toevoeging van 1 ml met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS).
    4. Los de nanodeeltjes in PBS tot een eindconcentratie van 2 uM / ml HB. Vervolgens incuberen van de cellen met 1 ml PBS, lege NP, HB-NP of HB-P-NP in elk putje gedurende 4 uur in het donker.
    5. Verwijderen van de oplossing en was de cellen door toevoeging van 1 ml koude PBS. Herhaal de wasstap nog eens. Voeg vers kweekmedium.
  2. Cellevensvatbaarheid assay
    1. Plaats de celcultuur plaat onder de PDT vezel (met 1 cm afstand van de PDT fiber to the well). Draag laser veiligheidsbril en verlichten de cellen met een PDT laser (630 nm, 400 mW / cm 2) in het donker gedurende verschillende tijdsperioden: 0, 5, 10, 20, 30, en 40 sec (0, 2, 4 , 8, 12 en 16 J / cm 2). Vervolgens incuberen van de cellen gedurende 24 uur in het donker.
    2. Zuig het medium en was de cellen door toevoeging van 1 ml koude PBS. Herhaal de wasstap nog eens.
    3. Voeg 10 ul van cytotoxiciteit meetoplossing aan elk putje. Incubeer in het donker gedurende 2 uur.
    4. Meet de absorptie bij 450 nm met een microplaat reader.
  3. microscopische analyse
    1. Plaats de celcultuur plaat onder de PDT vezel (met 1 cm afstand van de PDT fiber to the well). Draag laser veiligheidsbril en verlichten de cellen met een PDT laser (630 nm, 400 mW / cm2) in het donker gedurende 0, 20 of 40 sec (0, 8 of 16 J / cm 2). Vervolgens incuberen van de cellen gedurende 24 uur in het donker.
    2. Zuig het medium en was de cellen door toevoeging van 1 ml koude PBS. Herhaal de wasstap nog eens.
    3. Voeg 50 ul van annexine V-FITC en 50 gl 4 ', 6-diamidino-2-fenylindol (DAPI, 1,5 ug / ml). Schud de plaat en incubeer gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur in het donker.
      OPMERKING: Gebruik annexine V-FITC van de fluorescentiemicroscoop kit.
    4. Was de cellen door toevoeging van 1 ml koude PBS. Herhaal de wasstap nog eens. Houd de cellen in vers PBS. Identificeer de apoptotische cellen met behulp van licht microscopie bij 100X vergroting.
  4. Fluorescentie geactiveerde celsortering (FACS) analyse
    1. Plaats de celcultuur plaat onder de PDT vezel (met 1 cm afstand van de PDT fiber to the well). Draag laser veiligheidsbril en verlichten de cellen met een PDT laser (630 nm, 400 mW / cm2) gedurende 0, 20, of 40 sec (0, 8 of 16 J / cm 2). Vervolgens incuberen van de cellen gedurende 24 uur in het donker.
    2. Zuig het medium en was de cellen door toevoeging van 1 ml koude PBS. Herhaal de wasstap nog eens.
    3. Resuspendeer de cellen in 1 ml van 1 x bindingsbuffer (verdund 1 deel van de 10x bindingsbuffer; 0,1 M Hepes / NaOH (pH 7,4), 1,4 M NaCl, en 25 mM CaCl 2 tot 9 delen gedestilleerd water) en overdracht 100 ul van de monsteroplossing een 5-mlcultuur buis.
    4. Voeg 5 ul van annexine V-FITC en 5 ui propidium jodide (PI). Voorzichtig vortex de buis en incubeer gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur (RT) in het donker. Voeg 400 ul van 1 x bindingsbuffer.
      OPMERKING: Gebruik annexine V-FITC en PI van de fluorescentie microscoop kit.
    5. Identificeer de apoptotische cellen door FACS 14. De excitatie laserlijnen PI en annexine V-FITC zijn 488 nm en 635 nm, respectievelijk. Meet de fluorescentie-emissie van PI en annexine V-FITC bij 610 ± 20 nm en 660 ± 20 nm. Verzamel de verworven cellen op de flowcytometer per 10.000 gebeurtenissen.

4. In vivo antikanker werkzaamheid bij tumordragende muizen

  1. Lung-kanker-geïnduceerde muismodel
    1. Bereid 1 x 10 6 A549-cellen in 0,1 ml RPMI-1640 medium; hou het in ijs.
    2. Verdoven de muizen een ip injectie van xylazine en een mengsel van tiletamine en zolazepam (1: 2, 1 ml /kg). Bevestig de juiste verdoving door zachtjes te knijpen een kleine plooi van de huid van muizen. Gebruik dierenarts zalf op de ogen te voorkomen droogheid terwijl onder verdoving.
      OPMERKING: Indien er geen beweging wordt waargenomen, het dier voldoende verdoofd om de experimenten te starten.
    3. Injecteer de cellen subcutaan in de linker flank van BALB / C mannelijk naakt muizen (6-7 weken, 20-22 g).
    4. Houd het observeren van de muizen tot ze beginnen te bewegen rond de kooi.
      LET OP: Wees niet een dier onbeheerd achter, totdat het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. Heeft een dier dat een operatie heeft ondergaan om het gezelschap van andere dieren totdat deze volledig is hersteld niet meer terug. Houd de muizen onder specifieke pathogeenvrije (SPF) omstandigheden.
    5. Meet de tumorgrootte met remklauwen elke dag. Bereken het tumorvolume (mm3) als (lengte x breedte 2) / 2. Wanneer de tumorgrootte er ongeveer 200 mm3 in volume, start het experiment.
  2. Antikanker effectiviteitsstudie
    1. Willekeurig verdelen de muizen in 4 groepen (n = 10 voor elke groep).
    2. Verdoven de muizen een ip injectie van xylazine en een mengsel van tiletamine en zolazepam (1: 2, 1 ml / kg). Bevestig de juiste verdoving door zachtjes te knijpen een kleine plooi van de huid van muizen. Gebruik dierenarts zalf op de ogen te voorkomen droogheid terwijl onder verdoving.
      OPMERKING: Indien er geen beweging wordt waargenomen, het dier voldoende verdoofd om de experimenten te starten.
    3. Los de nanodeeltjes in PBS tot een eindconcentratie van 2 mg / ml HB. Injecteer PBS, vrij HB HB-NP of HB-P-NPs via de staartader (2 mg / kg HB) tweemaal op dagen 0 en 7.
    4. Houd het observeren van de muizen tot ze beginnen te bewegen rond de kooi.
      LET OP: Wees niet een dier onbeheerd achter, totdat het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. Heeft een dier dat een operatie heeft ondergaan om het gezelschap van andere dieren tot het volledig niet terugkerenhersteld. Houd de kooien donker en onder specifieke voorwaarden SPF.
    5. 24 uur na elke injectie, verdoven de muizen een ip injectie van xylazine en een mengsel van tiletamine en zolazepam (1: 2, 1 ml / kg). Bevestig de juiste verdoving door zachtjes te knijpen een kleine plooi van de huid van muizen. Gebruik dierenarts zalf op de ogen te voorkomen droogheid terwijl onder verdoving.
      OPMERKING: Indien er geen beweging wordt waargenomen, het dier voldoende verdoofd om de experimenten te starten.
    6. Plaats de tumorplaats onder PDT vezel (met 1 cm afstand van de PDT vezel naar de tumor). Draag een veiligheidsbril laser bril, zet de schakelaar, en verlichten de tumor met een PDT laser (630 nm, 400 mW / cm 2) voor 500 sec (200 J / cm2) tweemaal op dag 1 en 8.
    7. Houd het observeren van de muizen tot ze beginnen te bewegen rond de kooi. Heeft een dier niet onbeheerd achter te laten tot het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. Heeft een dier dat undergon heeft niet terugkerene operatie om het gezelschap van andere dieren tot volledig hersteld.
    8. Houd de kooien onder SPF-omstandigheden. Handhaaf de kooien in het donker gedurende 24 uur na laserbehandeling.
    9. Visueel controleren het tumorvolume en de veranderingen op de tumorplaats dagelijks. Meet de tumorgrootte met remklauwen, en bereken het volume (lengte x breedte 2) / 2 (mm 3). Neem foto's van de tumor plaatsen elke dag om te controleren of de tumor oppervlakte wijzigingen na PDT.
    10. Op dag 16, offeren vijf muizen per groep door terminale anesthesie met behulp van isofluraan.
    11. Met een pincet en een schaar, knip de buitenste schil en bloot de tumoren 15. Zorgvuldig oogsten hen. Bevestig ze in 10% formaline, insluiten in paraffine, en vlekken ze met hematoxyline en eosine (H & E) voor histologische analyse 16.
    12. Na 45 dagen van de monitoring, offeren de resterende muizen door terminal anesthesie met behulp van isofluraan.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

We bereidden twee HB-NPs en HB-P-NPs met de bovengenoemde technieken. De gemiddelde diameters van HB-NPs en HB-P-NPs waren 220,9 ± 3,2 nm en 211,9 ± 1,6 nm.

De cel levensvatbaarheid van A549 cellen na 4 uur incuberen met PBS, lege NP, HB-NPs en HB-P-NPs gevolgd door bestraling met licht (0-16 J / cm 2) wordt getoond in figuur 1. Zonder licht, de HB-NP behandelde groep vertoonde geen cytotoxiciteit t...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De meest kritische stap in deze studie is het selecteren van de juiste laser voorwaarden: golflengte, energie en bestralingstijd. De juiste golflengte van licht die geschikt zijn voor de specifieke fotosensibilisator is noodzakelijk voor de PDT. We gebruikten een 630-nm laser die geschikt is voor hypocrelline B. Het uitgangsvermogen is een andere belangrijke factor, die werd ingesteld op 400 mW / cm 2 op basis van vele modelstudies was. Uitgangsvermogen van meer dan 400 mW / cm 2 beschadigde cellen...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Deze studie werd ondersteund door subsidie ​​niet. 14-2014-017 van de SNUBH Research Fund.

De auteurs zijn verschuldigd aan J. Patrick Barron, emeritus hoogleraar, Tokyo Medical University en Adjunct Professor, Seoul National University Bundang ziekenhuis voor zijn pro bono redactie van dit manuscript.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
oligo hyaluronzuurBioland Co., Ltd._
DS-Y30 (ceramide 3B; voornamelijk N-oleoyl-fytosphingosine)Doosan Biotech Co., Ltd._
adip zuurdihydrazideSigma AldrichA0638
N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimideSigma Aldrich39391
4-(chlooromethly)benzoylchlorideSigma Aldrich270784
Tween 80Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.T0546
spuitfilterSartorius Stedim Biotech GmbH1776215 mm, RC, PP, 0,45 µm
trietylamineSigma AldrichT0886
Mini-GeBAflex buisjesGene Bio-Application Ltd.D070-12-100
PaclitaxelTaihua Corporations_
RPMI-1640Gibco Life Technologies, Inc.11875
Penicilline–streptomycineGibco Life Technologies, Inc.15070
Foetaal bovien serumGibco Life Technologies, Inc.16140071
Celite (filtermiddel)Sigma Aldrich6858Zie stap 1.4

Referenties

  1. Shang, L., Zhou, N., Gu, Y., Liu, F., Zeng, J. Comparative study on killing effect of esophageal cancer cell line between hypocrellin B-photodynamic therapy and hematoporphyrin derivative-photodynamic therapy. Chin J Cancer Prev Treat. 12, 1139-1142 (2005).
  2. Huisman, C., et al. Paclitaxel triggers cell death primarily via caspase-independent routes in the non-small cell lung cancer cell line NCI-H460. Clin Cancer Res. 8 (2), 596-606 (2002).
  3. Dolmans, D. E., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  4. Pass, H. I. Photodynamic therapy in oncology: mechanisms and clinical use. J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).
  5. Sutedja, T. G., Postmus, P. E. Photodynamic therapy in lung cancer. A review . J. Photochem. Photobiol. 36 (2), 199-204 (1996).
  6. Peng, C. L., Shieh, M. J., Tsai, M. H., Chang, C. C., Lai, P. S. Self-assembled star-shaped chlorin-core poly(epsilon-caprolactone)-poly(ethylene glycol) diblock copolymer micelles for dual chemo-photodynamic therapies. Biomaterials. 29 (26), 3599-3608 (2008).
  7. Chen, B., Pogue, B. W., Hasan, T. Liposomal delivery of photosensitising agents. Expert Opin Drug Deliv. 2 (3), 477-487 (2005).
  8. Lee, S. J., et al. Comparative study of photosensitizer loaded and conjugated glycol chitosan nanoparticles for cancer therapy. J Control Release. 152 (1), 21-29 (2011).
  9. Chang, J. E., et al. Anticancer efficacy of photodynamic therapy with hematoporphyrin-modified, doxorubicin-loaded nanoparticles in liver cancer. J. Photochem. Photobiol. 140, 49-56 (2014).
  10. Chang, J. E., Cho, H. J., Yi, E., Kim, D. D., Jheon, S. Hypocrellin B and paclitaxel-encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles for targeted photodynamic therapy in lung cancer. J. Photochem. Photobiol. 158, 113-121 (2016).
  11. Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. Nanoparticle delivery of cancer drugs. Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).
  12. Matsumura, Y., Maeda, H. A new concept for macromolecular therapeutics in cancer chemotherapy: mechanism of tumoritropic accumulation of proteins and the antitumor agent smancs. Cancer Res. 46 (12 Pt 1), 6387-6392 (1986).
  13. Penno, M. B., et al. Expression of CD44 in human lung tumors. Cancer Res. 54 (5), 1381-1387 (1994).
  14. Wilkins, R., Kutzner, B., Truong, M., Sanchez-Dardon, J., McLean, J. Analysis of radiation-induced apoptosis in human lymphocytes: Flow cytometry using Annexin V and propidium iodide versus the neutral comet assay. Cytometry. 48 (1), 14-19 (2002).
  15. Bannas, P., et al. Validation of nanobody and antibody based in vivo tumor xenograft NIRF-imaging experiments in mice using ex vivo flow cytometry and microscopy. J Vis Exp. (98), e52462(2015).
  16. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. (5), (2008).
  17. Lam, S. Photodynamic therapy of lung cancer. Semin Oncol. 21 (6 Suppl 15), 15-19 (1994).
  18. Simone, C. B. 2nd, et al. Photodynamic therapy for the treatment of non-small cell lung cancer. J Thorac Dis. 4 (1), 63-75 (2012).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

NanodeeltjesafgiftehyaluronzuurCD44 targetinghypocrelline BpaclitaxelA549 cellenin vitro assayin vivo model
Antikanker werkzaamheid van Photo Dynamische Therapie met longkanker-Gerichte Nanodeeltjes
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.