Met behulp van Linear Agarose kanalen om te studeren Drosophila Larvale Crawling Behavior

Summary

De Drosophila larven is een krachtig modelsysteem om neuronale controle van gedrag te bestuderen. Deze publicatie beschrijft het gebruik van lineaire agarose kanalen om aanhoudende aanvallen van lineaire kruipen en methoden te lokken om de dynamiek van larvale structuren te kwantificeren tijdens repetitieve kruipen gedrag.

Abstract

Drosophila larven kruipen is in opkomst als een krachtig model voor neurale controle van sensomotorische gedrag te bestuderen. Echter, larven kruipen gedrag op een vlakke ondergrond geopend is complex, met inbegrip van: pauzeren, draaien en kronkelen. Deze complexiteit in het repertoire van beweging belemmert gedetailleerde analyse van de gebeurtenissen die zich tijdens een enkele kruipen stap cyclus. Om dit obstakel te overwinnen, werden lineaire agarose kanalen gemaakt dat larvale gedrag recht, duurzame, ritmische kruipen beperken. In principe, omdat agarose kanalen en de Drosophila larven lichaam zowel optisch helder, de beweging van larvale structuren gelabeld door genetisch gecodeerde fluorescerende probes kan worden gevolgd in intacte, vrij bewegende larven. In het verleden werden larven in lineaire kanalen geplaatst en kruipen op het niveau van hele organisme, segment, en spier werden geanalyseerd ^1. In de toekomst kan larven kruipen kanalen worden gebruikt calcium imaging neuro bewakennal activiteit. Bovendien kunnen deze werkwijzen worden gebruikt met larven van elke genotype en eventuele-onderzoeker ontworpen kanaal. Waardoor het protocol hieronder is breed toepasbaar voor studies op de Drosophila larven als model motorbesturing begrijpen.

Introduction

Het algemene doel van deze methode is om Drosophila larven kruipen in detail te bestuderen. Experimenten op motoriek hebben een belangrijke rol in het ontwikkelen en testen van theorieën over motorische controle ² gespeeld. Traditioneel motoriek is onderzocht bij waterdieren (bv, bloedzuiger, lamprei, kikkervisje) ^3. Het repetitieve karakter van de motoriek bij deze dieren is toegelaten voor de studie van rhythmogenesis, voor de analyse van de biofysische evenementen rijden motoriek, en voor het bewaken van de neurale afvuren patronen die de motoriek te begeleiden.

Het gebruik van Drosophila

Protocol

1. Bereiding van Larven

1. Een week voor het opnemen van het gedrag, het opzetten van een kruis (minimaal 25 maagden en 5 mannen). Onderhouden van alle kruisen en nageslacht bij 25 ° C.
   LET OP: De temperatuur van kweekomstandigheden kan worden gewijzigd, maar de tijdslijn hieronder beschreven nodig zou hebben voor veranderingen in de ontwikkelingspsychologie snelheid aan te passen om rekening te houden.
2. 5 dagen voor de opname, het eerste wat in de ochtend, zet het kruis in een verzameling kooi met een agar / sap pet en een schar (0,5-1 ml) van gist deeg in het midden van de agar / sap cap.
   1. Om een ​​verzameling kooi te maken, porren g....

Results

Dit artikel beschrijft een werkwijze voor het geleiden Drosophila larven gedrag middels agarose kanalen en voor het meten van de dynamiek van larvale structuren over een cyclus kruipen. Larven in lineaire kanalen voeren aanhoudende aanvallen van ritmische kruipen (figuur 3). Omdat zowel larven en kanalen zijn optisch helder, kunnen kanalen worden gebruikt met larven uitdrukken fluorescerende probes uitgedrukt in een structuur van belang. We namen larven die GFP .......

Discussion

Een microfluïdische apparaat werd gebouwd om lineaire agarose kanalen die geschikt zijn Drosophila larven (figuur 1) te maken. Bij Drosophila larven in deze lineaire agarose kanalen geplaatst zijn gedragsrepertoire beperkt tot kruipen, waardoor gedetailleerde observatie van de dynamiek van larvale structuren via kruipen cyclus.

Een opname op wanneer een larve voeren een reeks ritmische stappen (Figuur 3). Als dit niet gebeurt, controleer hi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
6 oz square Drosophila bottle	Scimart	DR-103
agar	sigma	A1296
sucrose	sigma	S9378
apple juice			not from concentrate
Tegosept	Fisher	T2300	methyl-p-hydroxybenzoate
35 x 10 mm round petri dish	Fisher	351008
baker's yeast
PDMS casting mold	FlowJem		can be requested from authors
Isopropyl alcohol	Fisher	A417-1
laboratory wipes	Fisher	06-666-11
canned air	Fisher	18-431
10 cm petri dish	BioPioneer	GS82-1473-001
agarose	Fisher	50-444-176
razor blade	Fisher	12-640
forceps	FST	11241-40
22 x 40 cover glass, #1.5	Fisher	50-365-605
Fiji (version 1.51d)	NIH		fiji.sc
Excel 2016	Microsoft		www.microsoftstore.com
MATLAB R2016	Mathworks		www.mathworks.com