Methodologie voor de studie van horizontale genoverdracht in Staphylococcus aureus

Summary

We beschrijven hier drie verschillende protocollen voor de in vitro onderzoek conjugatie, transductie en natuurlijke transformatie in Staphylococcus aureus.

Abstract

Een belangrijk kenmerk van de belangrijkste opportunistische humaan pathogeen Staphylococcus aureus is het buitengewone vermogen om snel resistent worden tegen antibiotica. Genomische studies blijkt dat S. aureus draagt vele virulentie en resistentiegenen in mobiele genetische elementen, wat suggereert dat horizontale genoverdracht (HGT) speelt een cruciale rol in S. aureus evolutie. Echter, een volledige en gedetailleerde beschrijving van de gebruikte HGT studeren in S. aureus ontbreekt nog, in het bijzonder met betrekking tot natuurlijke transformatie, die onlangs is gemeld in deze bacterie methodologie. Het beschrijft drie protocollen die bruikbaar zijn voor de in vitro onderzoek HGT in S. aureus conjugatie, faag transductie en natuurlijke transformatie. Om dit doel, de cfr-gen (chlooramfenicol / florfenicol weerstand), die de Phenicols verleent, Lincosamiden, oxazolidinonen, pleuromutilinen en Streptogramine A (PhLOPSA) resistentie fenotype, werd gebruikt. Het begrijpen van de mechanismen waarmee S. aureus overdraagt genetisch materiaal naar andere stammen is essentieel voor het begrijpen van de snelle verwerving van weerstand en helpt bij het vormen van verspreiding gerapporteerd bewakingsprogramma's of om verspreiding modus in de toekomst voorspellen verder verduidelijken.

Introduction

Staphylococcus aureus is een commensale Gram-positieve bacterie die van nature leeft in de huid en neusholte van mensen en dieren. Deze soorten bacteriën is de belangrijkste oorzaak van nosocomiale infecties in ziekenhuizen en instellingen voor gezondheidszorg. Bovendien is zijn vermogen om resistentie tegen andere antimicrobiële verbindingen aangaan het beheer van de infecties veroorzaakt door deze bacterie in een mondiaal probleem gemaakt.

Twee belangrijke routes betrokken bij de verspreiding van resistentie fenotypen bekend: de klonale verspreiding van resistente genotypes en de verspreiding van genetische determinanten van de....

Protocol

OPMERKING: De stammen en waaruit dit werk worden in Tabel 1 en Tabel Materials, respectievelijk. In de transmissie-experimenten, N315 en COL cfr -positieve derivaten werden gebruikt als donoren van de cfr-gen (N315-45 en COL-45). Deze stammen werden voorheen verkregen door conjugatie, waarbij als donor klinisch cfr-positieve Staphylococcus epidermidis stam (ST2), na conjugatie standaard protocol (zie hieronder). Deze stam koesterde de cfr-gen op een pSCFS7-achtige plasmide ^7.

1. vervoeging met behulp van de Filter-paring Method

Results

De resultaten hier vertegenwoordigd zijn eerder gepubliceerd (aangepast uit referentie ⁷ met toestemming van de uitgever). We bestudeerden de mogelijke stralingsroutes van de cfr gen dat linezolid lage weerstand en de expressie van de PhLOPSA-fenotype ^{14, 15} in S. aureus stammen veroorzaakt, door het onderzoeken van drie mechanismen HGT.

Discussion

Dit werk beschrijft de drie belangrijkste methoden om de HGT van genetische determinanten in S. aureus te bestuderen. Hoewel transductie en vervoeging zijn onderzocht voor tientallen jaren, werd het bestaan van natuurlijke transformatie pas onlangs erkend ^2. Aldus S. aureus is uitgerust met alle drie belangrijkste takken van HGT en testen allemaal nodig is om de mogelijke verspreiding paden van genetische determinanten verduidelijken. Het doel van dit werk is om volledige .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tryptic Soy Broth (TSB)	Becton Dickinson	211825
Brain Heart Infusion (BHI)	Becton Dickinson	211059
Nutrient Broth No. 2	Oxoid	CM0067
Sheep blood agar	Eiken Chemical Co.,Ltd.	E-MR96	Tryptic soy agar added with 5% (v/v) sheep blood according to the manufacturer.
Agar powder	Wako Pure Chemical Industries	010-08725
Sodium citrate (Trisodium citrate dihydrate)	Wako Pure Chemical Industries	191-01785
Cellulose Ester Gridded 0.45 μL HAWG filter	Merck Milipore	HAWG 02500
QIAfilter Plasmid Midi kit	QIAGEN	12243