Methodenartikel

Neurologische Reflex Testing in de neonatale rat Pups

DOI:

10.3791/55261

⸱

24 april 2017

 ,  , 
1Department of Pediatrics, University of Alberta

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Behavioral testen is de gouden standaard voor het bepalen van de resultaten na hersenletsel, en kan de aanwezigheid van ontwikkelingsstoornissen bij zuigelingen en kinderen te identificeren. Neurologische reflexen zijn een vroege indicator van deze afwijkingen. Een groot aantal eenvoudig te realiseren ontwikkelingsstoornissen reflex testen in de neonatale knaagdieren werden ontwikkeld en beschreven.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Neurologische reflex testen wordt vaak gebruikt in de klinische praktijk om de rijping van het zenuwstelsel te beoordelen. Neurologische reflexen ook wel primitieve reflexen. Ze zijn gevoelig en in overeenstemming met latere uitkomsten. Abnormale reflexen worden beschreven als een afwezigheid, persistentie, opnieuw verschijnen of latentie reflexen, voorspellende indices van kinderen die een hoog risico op neurologische aandoeningen. Diermodellen van neurologische handicap, zoals hersenverlamming, vertonen vaak afwijkende ontwikkelingsstoornissen reflexen, zoals in de menselijke baby's zouden worden nageleefd. De beschreven technieken in diverse neurologische reflexen in neonatale ratten. Neurologische reflex testen biedt de onderzoeker een testmethode die anders niet beschikbaar in zulke jonge dieren. De hier gepresenteerde methode is bedoeld om onderzoekers te helpen bij het onderzoeken van mijlpalen in de ontwikkeling van pasgeboren ratten als een methode voor het detecteren early-onset brain letsel en / of het bepalen van de effectiviteit van therapeutische interventies. De hier gepresenteerde methodologie is erop gericht om een ​​algemene richtlijn voor onderzoekers.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Neurologische reflexen, of mijlpalen in de ontwikkeling, zijn een van de vroegste evaluaties gebruikt op menselijke pasgeborenen en zuigelingen. Neurologische reflexen onwillekeurige en herhaalde bewegingen die hersenstam en ruggenmerg reflexen te tonen. Rijping van hogere corticale netwerken gekenmerkt door zich ontwikkelende migratie, myelinisatie en synaptogenese bevorderen willekeurige controle en corticale inhibitie. Veranderingen in het normale verloop van het centrale zenuwstelsel evolutie kan verstoren ontwikkeling van de hersenen, wat resulteert in abnormale corticale bedrading, functioneren en myelinisatie, waardoor neurologische reflex vertragingen of afwezigheid. Human zuigelingen met een hoog risico op neurologische handicap, worden vaak abnormaal vroege reflexen. Abnormale reflexen kunnen presenteren als een vertraging in aankopen, afwezigheid, langdurige aanwezigheid of terugkeer later in het leven, en zijn voorspellend ontwikkelingsstoornissen. 1, 2 Daarom, Is het belangrijk om reflex vertragingen in experimentele modellen van neurologische handicap na te bootsen.

Knaagdieren worden gewoonlijk gebruikt als experimentele modellen. Rat pups altricial toen geboren, en dus te onvolwassen aan specifieke of complexe motorische, zintuiglijke en / of cognitieve gedragstherapie taken uit te voeren. In dit opzicht hun ontwikkelings onvolwassenheid heeft betrekking op zowel hun fysieke en orgel ontwikkeling. Ratten zijn geboren haarloze met een onvermogen om thermoregulate, zijn blind, en niet in staat om te lopen. Verwijzend naar hersenontwikkeling aanzienlijke corticale rijping plaatsvindt postnataal. Pasgeboren ratten (dag van de geboorte aangeduid als postnatale dag 1; PD1) zijn voorgesteld om een ​​ontwikkeling van het brein niveau dat vergelijkbaar is met een premature menselijk brein van 23 te bereiken - 28 weken zwangerschap, terwijl PD7-10 pups zijn gelijkwaardig aan near- menselijk brein termijn. 3, 4, 5, 6Deze correlatie is gebaseerd op bruto anatomische analyses echter andere maatregelen van het brein zoals myelinisatie en amplitude geïntegreerd electroencephalograms zijn eveneens beschreven. 5, 7 bijvoorbeeld, pre-oligodendrocyten zijn de belangrijkste cellen in het ontwikkelende menselijke foetale hersenen 23-32 weken in utero en maturatie dit stadium correspondeert met een PD1-3 knaagdieren. 5, 8, 9, 10 Bovendien myelinisatie begint in utero bij mensen terwijl bij jonge ratten blijkt in de voorhersenen rond PD7-10; de pasgeborene knaagdierenbrein blijft grotendeels un-gemyeliniseerde. 11, 12 Tucker et al. gevonden dat de amplitude geïntegreerde elektro patroon van een P1 rat te vergelijken met een 23 weken zijn gestatie menselijke foetus, terwijl een PD7 en PD10 pup is te vergelijken met een 30-32 week en termijn zuigeling, respectievelijk. 7 Om deze redenen, pasgeboren reflex testen in de neonatale rat pups biedt een mogelijkheid voor het vastleggen van de ontogenie en / of verstoring van de ontwikkeling van de hersenen.

De batterij reflexen hieronder beschreven zijn afgeleid van studies van WM Fox en A. Lubics 13, 14 WM Fox was een van de eerste onderzoekers met betrekking tot de ontogenie van reflexen in de muis. 13 Deze reflexen omvatten, maar zijn niet beperkt tot, ledematen grijpen en plaatsen, klif vermijding, rechtzetten, versnelde rechtzetten, gang, auditieve schrikreactie, houding en opening van de ogen. Zowel voorpoot en achterpoot greep (hierna handpalm en plantaire greep bij de mens, respectievelijk) worden vergemakkelijkt door spinale reflexen en corticospinal remming van niet-primaire motorische gebieden. 15, 16 achterbeen plaatsing (voetzoolreflex) weerspiegelt rijping van de corticospinal darmkanaal. 16, 17, 18 Cliff vermijden (beschermende responsen) oprichten (doolhof) en versnelde oprichten omvatten integratie en communicatie tussen sensorische input en motoruitgang (zoals die betrokken zijn bij de vibrissae en vestibulaire systemen). 19, 20, 21 Gait weerspiegelt motoriek. 14 Auditieve schrikreactie beoordeelt akoestische stimulatie en synaptische verbindingen van grote neuronen in de nucleus reticularis pontis caudalis. 21 houding impliceert geschikte corticale-spinale / spinale-corticale uitsteeksels, spierkracht en neuromusculaire innervatie. 22, 23 Maturation van het gamma-aminoboterzuur receptoren correleren met eye opening. 24 Het is belangrijk om in gedachten te houden dat de reflexen weerspiegelen een veel ingewikkelder netwerk en die hier is een algemene correlatie. Bovendien zijn deze reflexen zorgen voor een snelle en eenvoudige methode voor het beoordelen van de neurologische ontwikkeling op zeer jonge leeftijd, waar meer complexe gedragsproblemen testen is niet haalbaar.

Het doel van dit document is een algemene richtlijn voor neurologische reflextesten die gemakkelijk in neonatale ratten experimentele studies opgenomen kan worden. De beschreven methode werd uitgevoerd in Long-Evans neonatale ratten uitgevoerd en kwantificering van de resultaten was gebaseerd op de eerste dag van verschijning. De dag dat het testen reflex wordt geïnitieerd en de gebruikte apparatuur kan worden aangepast om beter bij een ander experimenteel model (zoals verschillende stammen en species). Hiertoe werd het normale fysiologische progressie van reflex rijping in een bepaald diermodel, kunnen onderzoekers de effecten van externe stressoren, endogene manipulaties en / of therapeutische ingrepen op neurodevelopment neonatale ratmodellen evalueren. Kortom, het gebruik van reflexen als een bepaling van hersenrijping voordelig bij het voorspellen perinatale hersenletsel en weerspiegelt latere neurologische resultaten.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De Animal Care en gebruik Comite, Health Sciences aan de Universiteit van Alberta keurden alle dierproeven.

Noot: Hoewel dit protocol kan worden aangepast aan andere soorten en stammen, wordt dit protocol geschreven Long-Evans ratten. Deze ratten bleken superieur motor prestaties en gezichtsscherpte in vergelijking met andere knaagdieren stammen. 25 26 Het protocol voor getimede zwangerschappen, voedingssupplementen, moeder ontsteking, en neurologische reflexen is als volgt.

1. Proefdieren

  1. Bij ratten komen de stallen faciliteit, zich te onthouden van enige interactie voor een dag of twee om hen in staat stellen om te wennen aan hun nieuwe omgeving. Na acclimatisatie, omgaan met de ratten elke dag voor ongeveer vijf dagen, of wanneer de ratten niet meer tekenen van stress. Door de mens veroorzaakte stress kan testresultaten en le veranderenadvertentie naar de zwangerschap verlies.
  2. Zodra de ratten zijn comfortabel, het fokken begint. Plaats twee vrouwtjes en een mannelijke rat in een dubbeldeks kweekkooi (h = 38 cm, 1800 cm 2 vloeroppervlakte) overnacht (03:00-08:00). Deze kooien voorkomen dat stress en overbevolking. 'S Morgens hand van een transferpipet Spoel de vagina van het vrouwelijke ratten met ongeveer 0,25 ml zoutoplossing. De oplossing wordt in een microcentrifugebuis.
  3. Plaats de twee vrouwelijke en mannelijke terug in hun respectieve conventionele kooien.
  4. Bekijk de oplossing verzameld in paragraaf 1.2 onder een lichtmicroscoop (100X) om te bepalen welke fase van de loopsheid de rat ervaart en of zaadcellen aanwezig zijn. Als er zaadcellen, noteer datum embryonale dag (E1) (figuur 1). Als u zwanger bent, geef de vrouw haar eigen kooi op E14.
    OPMERKING: De cellen in het vaginale uitstrijkje duidelijk zijn, daarom gebruik maken van een weinig licht setting. Zorg ervoor dat de condensor is afgestemd op de laagste stand. Advertentiealleen de helderheid van het licht te dimmen. Als een helderheid wijzerplaat is beschikbaar, stel deze in op 1.

2. Voedingssupplementen

LET OP: Dit protocol is bedoeld om de therapeutische effecten van voeding broccoli spruit verbruik tijdens de laatste week van de zwangerschap te beoordelen. Groeien de spruiten volgens Wu et al. 27.

  1. Week de broccoli spruiten zaden voor de 2 - 3 uur. Verspreid de zaden op een aanrecht zaad sprouter doos en zet op een warme ondergrond voor kieming.
  2. Water de zaden tweemaal per dag, een keer in het uur (8-9 uur) en een keer in het uur (3-4 uur).
  3. Op dag vijf, plaatst de spruitjes door een venster voor de dag (spruiten moeten twee bladeren elkaar te hebben en zal groen over de dag worden).
  4. Aan het eind van de dag, het oogsten van spruiten voorzichtig uit het gezeefde box trekken van de broccoli spruiten en lag op een vlak oppervlak te drogen.
  5. Zodra de scheuten volledig gedroogd, wEigh uit 200 mg nauwkeurig af in een afgesloten plastic zak.
  6. Beginnend op E14, voer elk zwangere rat 200 mg gedroogde broccolikiemen dagelijks tot PD21 (de dag pups gespeend).

3. Ontsteking

  1. Om de ontsteking te veroorzaken en te reproduceren witte stof schade bij nakomelingen, injecteren zwangere ratten met lipopolysaccharide (LPS) om de 12 uur op de E19 en E20. Op de dag van de injectie, breng de kooi in het laboratorium van de behuizing faciliteit. Laat de zwangere rat te acclimatiseren en zich kalm gedurende ten minste 1 uur. Wanneer een rat geeft klinische verschijnselen van systemische of permanente nierbeschadiging, zal het onmiddellijk worden gedood en uit het onderzoek.
  2. Weeg de zwangere dam.
  3. Oplossen 200 ug / kg LPS (serotype 0127: B8) in 100 pl zoutoplossing. Verstuif de oplossing in een 1 ml spuit met een 30 G naald ½.
    1. Gebruik een nieuwe naald voor elke injectie. Laat de oplossing op te warmen voor een paar minuten om het ongemak te minimaliseren.
  4. Noteer de tijd en injecteer de zwangere dam intraperitoneaal. Alternatieve injecties tussen partijen een gelijke verdeling ontstaat.
    OPMERKING: Machholz et al. beschrijving van de juiste terughoudendheid en injectie procedures. 28

4. Developmental Reflex Tests

  1. Op PD1 (geboortedag), verwijder pups van de dam en opnemen geboortegewicht. Plaats de pups terug in hun respectieve kooien en verplaats ze naar het dier faciliteit tot PD3. Hierdoor maternale binding tussen moeder en jong.
    1. Noteer de reflex testen voor een betrouwbare beoordeling. Stel de videocamera zodat deze bij maximale sluitersnelheid voor beeld-voor-beeld analyse (1 / 1.000 s). Plaatst de videocamera zodat deze direct boven of naast de rattenpup en alle materialen die voor elke reflex. Bijvoorbeeld voor hindlimb plaatsen, plaats de camera naast het rattenpup te zorgen voor optillen en plaatsen van de achterpoot wordt vastgelegd.
    2. Voor versnelde oprichtend, plaats de camera boven de rattenpup en contacteervlakje teneinde het vermogen van de pup naar rechts in de lucht opnemen.
  2. Record gewichten dagelijks tot het einde van het experiment. Aan PD3 beginnen neurologische reflex test (Figuur 4). Verplaats kooien in een rustige kamer voor een minimum van 1 uur voorafgaand aan het testen te laten wennen aan de omgeving.
  3. Voer neurologische reflex testen op een consistente tijd elke dag als ratten zijn nachtdieren. Bijvoorbeeld, testen tussen 09:00-12:00 dagelijks. Houd de pups direct onder een warmtelamp of een warmte-pad te allen tijde een stabiele lichaamstemperatuur van 36,5 ° C te handhaven; rat pups van deze leeftijd verliest warmte gemakkelijk. Meten met een rectale temperatuursensor. Als efficiënt gedaan, hoeft pups lichaamstemperatuur niet veranderen, omdat ze niet van de dam en strooisel lang genoeg worden verwijderd. OPMERKING: Controleer de temperatuur van warmtelamp om te verzekeren dat niet meer dan 37 ° C.
    1. Noteer de score van elke reflex elke dag tot een positieve reactie wordt waargenomen. Een positief reflex reactie treedt op wanneer de pup is in staat om een ​​taak uit te voeren op twee opeenvolgende dagen. De datum van het eerste optreden van een positieve respons wordt gebruikt voor kwantificering. Geen verder onderzoek nodig is naar aanleiding van de positieve reactie. Vandaar de einddatum per reflex is variabel.
  4. voorpoot Grasping
    1. Beginnend op PD3, het gedrag van de voorpoot grijpreflex test. Plaats een stompe stang tegen de palm van elke voorpoot en lichte druk handmatig toepassen. Gelet druk moet iets verdringen voorpoot te kontakt ontstaat waarborgen en de pups kan de stang voelen. Grasping zal verschijnen als buiging van alle cijfers om de staaf. Succesvolle overname van deze reflex treedt op wanneer beide voorpoten grijpen de stang voor twee dagen op een rij.
    2. Score de voorpoot greep:
      0 voor geen enkele grijpen
      1 voor een succesvolle grijpen met één voorpoot (links of rechts voorpoot kan hier worden gespecificeerd)
      2 voor een succesvolle grijpen door beide voorpoten
  5. achterbeen Grasping
    1. Beginnend op PD3, het gedrag van de achterbeen grijpreflex test. Plaats een stompe stang tegen de zool van elke achterpoot en lichte druk handmatig toepassen. Gelet druk moet iets verdringen achterpoot om kontakt ontstaat waarborgen en de pups kan de stang voelen. Succesvolle grijpen van de staaf verschijnt als flexie van de vingers om de staaf. Succesvolle overname van deze reflex treedt op wanneer beide achterpoten begrijpen de hengel voor twee dagen op een rij.
    2. Score het achterbeen greep:
      0 voor geen enkele grijpen
      1 voor een succesvolle grijpen één achterpoot (linker of rechter achterpoot kan hier worden vermeld)
      2 voor een succesvolle grijpen door beide achterpoten
  6. Oprichtproef
    1. Beginnend op PD3, beginnen de oprichtende reflex test. Stevig vast te houden de pup in een liggende positie, met alle vier poten rechtop. Laat of de pup en onmiddellijk start de timer. Oprichtende wordt bereikt wanneer de pup kan draaien / rollen op vier poten, en elke poot loodrecht op het lichaam. Geef elke pup een maximum van 15 s om dit doel te bereiken.
    2. Score de oprichtende:
      0 voor het liggen op de rug (of 15 s voor de maximale geplande tijd)
      1 voor het liggen op de zijde (links of rechts kan hier worden vermeld) of het vermogen van de pup naar rechts, maar in de verkeerde houding (of 15 s voor de maximale geplande tijd)
      2 voor een succesvolle opricht en passende houding
  7. achterbeen plaatsing
    1. Beginnend op PD4, beginnen met het achterbeen plaatsen reflex test. Houd de pup verticaal in de lucht, door de romp. Voorzichtig slag dorsum van de achterpoot met een stomp oppervlak (zoals de rand van een tabel). Een juiste plaatsing reflex is wanneer de rattenpup intrekt gestimuleerde achterpoot, gevolgd door plaatsing van de achterpoot naar beneden op dat oppervlak.
    2. Score het achterbeen placing reflex:
      0 voor geen enkele successen
      1 voor het plaatsen van een achterpoot (linker of rechter achterpoot kan hier worden vermeld)
      2 voor een succesvolle achterbeen plaatsing voor zowel hindpaws
  8. Cliff vermijden
    1. Beginnend op PD4, beginnen de klif vermijding testen. Plaats het rattenpup aan de rand van een vlakke ondergrond, zodat de voorpoten en snuit van de pup zijn over de rand. De juiste resultaat is een beschermende reactie, waarbij de rattenpup zich van de rand van de rots. De experimentator de hand of een schuim landing wordt geplaatst onder de klif naar de pup van de val op te vangen.
    2. Score de klif vermijden:
      0 voor geen beweging of de rand valt
      1 voor het doorbreken van de klif bewegen maar met opknoping ledematen
      2 voor een succesvolle beweging weg van de rots
  9. Gang
    1. Begin de evaluatie van de gang op PD6. Plaats pups in het centrum van een 15 cm Diameter cirkel en laat de pup 30 s om de taak te voltooien. 14 Een succesvolle gang wordt uitgevoerd wanneer de rattenpup kan zowel voorpoten buiten de kring binnen 30 s verplaatsen.
    2. Ril de gang als de tijd in seconden is van rattenpup buiten de cirkel bewegen. Noteer de tijd die het kost de pup om zowel voorpoten buiten de cirkel te verplaatsen. Record 30 s als de pup niet in staat is om de taak binnen de gegeven tijd te voltooien
  10. auditieve schrikreactie
    1. Begin de analyse van de auditieve schrikreactie op PD10. Indiening van een hard geluid (bel) direct via pup te beoordelen of een schrikreactie aanwezig is. Een positieve schrikreactie wordt waargenomen wanneer de pup wordt een 'schokken' beweging van het geluid.
    2. Score de schrikreacties:
      (Of geen) zonder schrikreactie
      (Of yes) een positieve schrikreactie
  11. Houding
    1. Begin houding analyse van PD12. Plaats pups op een stroef open oppervlak gebruiken en de houding van de pup bij het verplaatsen. Een onvolwassen houding wordt gereflecteerd door het slepen van het abdomen bij het verplaatsen, en loodrecht richten van beide voorpoten en achterpoten opzichte van het lichaam. Een volwassen houding wordt verkregen wanneer de pup de buik van het oppervlak kan optillen en beide voorpoten en achterpoten zijn recht gericht, parallel aan het lichaam, bij het verplaatsen.
    2. Score de houding:
      0 voor geen beweging
      1 van onvolwassen lichaamshouding verplaatsen
      2 naar volwassen houding tijdens het verplaatsen
  12. Oog opening
    1. Begin-eye opening analyse PD12. Noteer de dag beide oogleden geopend:
      0 voor geen zichtbare ogen
      1 één zichtbaar oog (links of rechts kan hier worden vermeld)
      2 twee zichtbare ogen
  13. versnelde oprichtende
    1. Beginnend op PD14, beginnen versnelde oprichtende testen. Plaats de pup in liggende positie 30.48 centimeters boven een schuim landing. Laat de pup en observeer haar vermogen om recht zelf. Oprichtend verwijst wanneer de pup kan draaien om buikligging en land op zijn poten.
    2. Score de versnelde oprichtende:
      0 voor vallende op zijn rug
      1 om plat te zijde (links of rechts kan hier worden vermeld)
      2 voor de landing op zijn poten

Opmerking: Verschillende types van kwantificering van de reflexen zijn beschikbaar, afhankelijk van de vraag van de onderzoekers. Kwantificering van de reflexen kan worden gedaan als de eerste waarneming van een reflex, eerste dag van verschijning tot het verdwijnen van de reflex, tijd die nodig is om de taak succesvol uit te voeren, de snelheid van de prestaties, en / of verbetering van de prestaties in de tijd. 13, 14, 29, 30, 31 voor de cUIDIGE studie, de eerste dag van verschijning werd gebruikt als een score. Bij het gebruik van multiparous modellen, pups uit hetzelfde nest meestal werken op dezelfde manier als gevolg van hun genetische make-up, in de baarmoeder en postpartum milieu, en nutritionele beschikbaarheid. 32 Derhalve één pup kan niet worden verwerkt als n = 1 als gevolg van afval bias. Pups daarvan binnen een toom kan worden gemiddeld, zodat elk nest een n = 1. 32, 33 tevens verschillende pups binnen hetzelfde nest kan worden geanalyseerd met de gemengde effecten model, dat rekening houdt pups binnen hetzelfde nest. 32, 33

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De tijdlijn van het experimentele ontwerp is weergegeven in figuur 2. 30 De methoden en resultaten zijn eerder gepubliceerd. 30 Het doel van de studie was om te beoordelen of aanvulling van de voeding met broccoli spruiten tijdens de dracht en het spenen periode beschermd de nakomelingen van neurologische vertraging veroorzaakt door in utero blootstelling aan LPS. Getimede drachtige ratten...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Neurologische reflextesten de voorspellende maatstaf van abnormale corticale ontwikkeling en rijping, die van belang onder omstandigheden waarin openlijke neuropathologie niet evident zijn. Tijdens neurologische testen, is het essentieel om te waarborgen dat pups tegelijkertijd dagelijks onderzocht. Ratten zijn nachtdieren en daarom kunnen hun circadiane ritme prestaties veranderen als het testen wordt uitgevoerd op verschillende tijdstippen gedurende de dag. 34 Tests moeten in een rustige kamer ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs willen onze financiering agentschappen, die NeuroDevNet (een Nationaal Centers of Excellence) onder meer dank, de ALVA Foundation, de Women's en Children's Health Research Institute, en de Universiteit van Alberta.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Kweekproces
Transfer pipettesFisherbrand12-711-9AMGebruikt voor vaginale flushes.
Steriele zoutoplossingHospira7983254De oplossing die wordt gebruikt om cellen te verzamelen tijdens vaginale flushes.
400 µL Microcentrifuge tubesFisherbrand05-408-120Gebruikt om de zoutoplossing te bewaren.
LichtmicroscoopLeicaLeica ATC 2000Voor het observeren van de zoutoplossing. Kan elke lichtmicroscoop zijn die in het laboratorium wordt gebruikt.
GlijsjesFisherbrand12-552-5De zoutoplossing wordt op het glijtje geplaatst. Kan elk glijtje zijn dat in het laboratorium wordt gebruikt.
DekvlakkenFisherbrand12-545-FOm de glijtjes te dekken. Kan elk dekvlakte dat in het laboratorium wordt gebruikt.
Dieet aanvulling
Broccoli spruiten zadenMumm's Sprouting SeedsBroccoli spruiten zaden worden besteld en gekweekt in het laboratorium.
Countertop Seed Sprouter BoxMumm's Sprouting SeedsEen box wordt gebruikt om de zaden te laten ontkiemen en te laten groeien voor de oogst.
250 mL bekerDe beker wordt gebruikt om het zaad te weken. Elke maat beker die past kan worden gebruikt.
Maternelle ontsteking
Lipopolysaccharide (LPS)SigmaL3129De endotoxine die wordt gebruikt om maternale ontsteking na te bootsen.
1 mL spuitBD Syringe309659Gebruikt om de zwangere rat te injecteren.
Nadel (30 G x 1/2)BD PrecisionGlide Needle305106Gebruik de kleinste naald om pijn en ongemak te voorkomen.
Steriele zoutoplossing (0,9% natriumchloride, USP)HospiraZoutoplossing wordt gebruikt om LPS op te lossen.
Weegschalen
WeegschaalDenver InstrumentVoor het noteren van de gewichten. Kan elke weegschaal zijn met 2 decimalen die in het laboratorium wordt gebruikt.
Neurodevelopmentale reflexen
Dun stomp staafjeKan een paperclip of tandenstoker zijn. Dit is voor grijpen met voor- en achterpoten.
Ronde filterpapierWhatman1001 15015 cm diameter papier dat wordt gebruikt voor loopanalyse.
TijdmeterFisher Scientific06-662-51Voor het meten van de tijd die wordt toegewezen aan rechtopkomen en lopen.
Blunt oppervlakKan een tafelrand zijn. Dit is voor het plaatsen van achterpoten en klifafwending.
Schuim landingVoor wanneer de pups versneld rechtop komen.
VideorecorderSonyVCT-D580RMOm alle geteste reflexen op te nemen. Moet in staat zijn om op te nemen met 1/1.000 fps
BelVoor auditieve schrikreactie.
Warmtelamp of -padOm de lichaamstemperatuur van de pups tijdens onderzoek te handhaven.

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Farber, J. M., Shapiro, B. K., Palmer, F. B., Capute, A. J. The diagnostic value of the neurodevelopmental examination. Clin Pediatr (Phila. 24 (7), 367-372 (1985).
  2. Zafeiriou, D. I. Primitive reflexes and postural reactions in the neurodevelopmental examination). Pediatr. Neurol. 31 (1), 1-8 (2004).
  3. Clancy, B., Finlay, B. L., Darlington, R. B., Anand, K. J. S. Extrapolating brain development from experimental species to humans. Neurotoxicology. 28 (5), 931-937 (2007).
  4. Dobbing, J., Sands, J. Comparative aspects of the brain growth spurt. Early Hum. Dev. 3 (1), 79-83 (1979).
  5. Semple, B. D., Blomgren, K., Gimlin, K., Ferriero, D. M., Noble-Haeusslein, L. J. Brain development in rodents and humans: Identifying benchmarks of maturation and vulnerability to injury across species. Prog. Neurobiol. , (2013).
  6. Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch. Dis. Child. 48 (10), 757-767 (1973).
  7. Tucker, A. M., Aquilina, K., Chakkarapani, E., Hobbs, C. E., Thoresen, M. Development of amplitude-integrated electroencephalography and interburst interval in the rat. Pediatr. Res. 65 (1), 62-66 (2009).
  8. Dean, J. M., et al. Strain-specific differences in perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with. Dev. Neurosci. 33 (3-4), 251-260 (2011).
  9. Back, S. A., Riddle, A., McClure, M. M. Maturation-dependent vulnerability of perinatal white matter in premature birth. Stroke. 38, 724-730 (2007).
  10. Back, S. A., et al. Late oligodendrocyte progenitors coincide with the developmental window of vulnerability for human perinatal white matter injury. J. Neurosci. 21 (4), 1302-1312 (2001).
  11. Downes, N., Mullins, P. The development of myelin in the brain of the juvenile rat. Toxicol. Pathol. 42 (5), 913-922 (2014).
  12. Jakovcevski, I., Filipovic, R., Mo, Z., Rakic, S., Zecevic, N. Oligodendrocyte development and the onset of myelination in the human fetal brain. Front. Neuroanat. 3 (5), (2009).
  13. Fox, W. M. Reflex-ontogeny and behavioural development of the mouse. Anim. Behav. 13 (2), 234-241 (1965).
  14. Lubics, A., et al. Neurological reflexes and early motor behavior in rats subjected to neonatal hypoxic-ischemic injury. Behav. Brain Res. 157 (1), 157-165 (2005).
  15. Futagi, Y., Toribe, Y., Suzuki, Y. The grasp reflex and moro reflex in infants: hierarchy of primitive reflex responses. Int. J. Pediatr. , 191562(2012).
  16. Hashimoto, R., Tanaka, Y. Contribution of the supplementary motor area and anterior cingulate gyrus to pathological grasping phenomena. Eur. Neurol. 40 (3), 151-158 (1998).
  17. Isaza Jaramillo, S. P., et al. Accuracy of the Babinski sign in the identification of pyramidal tract dysfunction. J. Neurol. Sci. 343 (1-2), 66-68 (2014).
  18. Donatelle, J. M. Growth of the corticospinal tract and the development of placing reactions in the postnatal rat. J. Comp. Neurol. 175 (2), 207-231 (1977).
  19. Palanza, P., Parmigiani, S., vom Saal, F. S. Effects of Prenatal Exposure to Low Doses of Diethylstilbestrol, o,p'DDT and Methoxychlor on Postnatal Growth and Neurobehavioral Development in Male and Female Mice. Horm. Behav. 40 (2), 252-265 (2001).
  20. Pantaleoni, G. C., et al. Effects of maternal exposure to polychlorobiphenyls (PCBs) on F1 generation behavior in the rat. Fundam. Appl. Toxicol. 11 (3), 440-449 (1988).
  21. Yeomans, J. S., Frankland, P. W. The acoustic startle reflex: neurons and connections. Brain Res. Rev. 21 (3), 301-314 (1995).
  22. Vinay, L., Brocard, F., Clarac, F. Differential maturation of motoneurons innervating ankle flexor and extensor muscles in the neonatal rat. Eur. J. Neurosci. 12 (12), 4562-4566 (2000).
  23. Geisler, H. C., Westerga, J., Gramsbergen, A. Development of posture in the rat. Acta Neurobiol. Exp.(Wars. 53 (4), 517-523 (1993).
  24. Heinen, K., et al. Gabaa receptor maturation in relation to eye opening in the rat visual cortex). Neuroscience. 124 (1), 161-171 (2004).
  25. Whishaw, I. Q., Gorny, B., Foroud, A., Kleim, J. A. Long-Evans and Sprague-Dawley rats have similar skilled reaching success and limb representations in motor cortex but different movements: some cautionary insights into the selection of rat strains for neurobiological motor research. Behav. Brain Res. 145 (1-2), 221-232 (2003).
  26. Prusky, G. T., Harker, K. T., Douglas, R. M., Whishaw, I. Q. Variation in visual acuity within pigmented, and between pigmented and albino rat strains. Behav. Brain Res. 136 (2), 339-348 (2002).
  27. Wu, L., et al. Dietary approach to attenuate oxidative stress, hypertension, and inflammation in the cardiovascular system. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (18), 7094-7099 (2004).
  28. Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and. J. Vis. Exp. (67), (2012).
  29. Rousset, C. I., et al. Maternal exposure to lipopolysaccharide leads to transient motor dysfunction in neonatal rats. Dev. Neurosci. 35 (2-3), 172-181 (2013).
  30. Nguyen, A. T., Bahry, A. M. A., Shen, K. Q., Armstrong, E. A., Yager, J. Y. Consumption of broccoli sprouts during late gestation and lactation confers protection against developmental delay induced by maternal inflammation. Behav. Brain Res. 307, 239-249 (2016).
  31. Black, A. M., Armstrong, E. A., Scott, O., Juurlink, B. J., Yager, J. Y. Broccoli sprout supplementation during pregnancy prevents brain injury in the newborn rat following placental insufficiency. Behav. Brain Res. 291, 289-298 (2015).
  32. Wainwright, P. E. Issues of design and analysis relating to the use of multiparous species in developmental nutritional studies. J. Nutr. 128 (3), 661-663 (1998).
  33. Lazic, S. E., Essioux, L. Improving basic and translational science by accounting for litter-to-litter variation in animal models. BMC Neurosci. 14, 14-37 (2013).
  34. Sergio, D. P., Sanchez, S., Ruben, V. R., Ana, B. R., Barriga, C. Changes in behaviour and in the circadian rhythms of melatonin and corticosterone in rats subjected to a forced-swimming test. J Appl Biomed. 1 (47), (2005).
  35. Castelhano-Carlos, M., Baumans, V. The impact of light, noise, cage cleaning and in-house transport on welfare and stress of laboratory rats. Lab. Anim. 43 (4), 311-327 (2009).
  36. Zimmerberg, B., Ballard, G. A., Riley, E. P. The development of thermoregulation after prenatal exposure to alcohol in rats. Psychopharmacology (Berl. 91 (4), 479-484 (1987).
  37. Fan, L. W., et al. Hypoxia-ischemia induced neurological dysfunction and brain injury in the neonatal rat). Behav. Brain Res. 165 (1), 80-90 (2005).
  38. Smart, J. L., Dobbing, J. Vulnerability of developing brain. VI. Relative effects of foetal and early postnatal undernutrition on reflex ontogeny and development of behaviour in the rat. Brain Res. 33 (2), 303-314 (1971).
  39. Fox, M. W. Neuro-Behavioral ontogeny: A synthesis of ethological and neurophysiological concepts. Brain Res. 2 (1), 3-20 (1966).
  40. Piper, M. C., Mazer, B., Silver, K. M., Ramsay, M. Resolution of neurological symptoms in high-risk infants during the first two years of life. Dev. Med. Child Neurol. 30 (1), 26-35 (1988).
  41. Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J. Neurosci. Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
  42. Vorhees, C. V., Williams, M. T. Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory. Nat. Protoc. 1 (2), 848-858 (2006).
  43. Walf, A. A., Frye, C. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents. Nat. Protoc. 2 (2), 322-328 (2007).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Grijpreflex voorpotenGrijpreflex achterpotenRighting reflex testPlaatsingsreflex achterpotenCliff avoidance testGanganalyseAuditieve schrikreactieVersnelde righting test

Gerelateerde artikelen