Isolatie en Verrijking van Liver Progenitor subsets geïdentificeerd door een Novel Surface Marker Combinatie

Henrike Julich-Haertel; Marina Tiwari; Christina Mehrfeld; Elmar Krause; Miroslaw Kornek; Veronika Lukacs-Kornek

doi:10.3791/55284

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Isolatie en Verrijking van Liver Progenitor subsets geïdentificeerd door een Novel Surface Marker Combinatie

10.7K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/55284

⸱

18 februari 2017

Henrike Julich-Haertel¹ , Marina Tiwari¹ , Christina Mehrfeld¹ , Elmar Krause² , Miroslaw Kornek¹ , Veronika Lukacs-Kornek¹

¹Department of Medicine II, Saarland University Medical Center, ²Department of Physiology, Center for Integrative Physiology and Molecular Medicine (CIPMM), University of Saarland

In dit artikel

Samenvatting

Lever verwondingen worden begeleid door voorlopercellen cel expansie die een heterogene populatie cellen vertegenwoordigt. Nieuwe indeling van deze cellulaire compartiment zorgt voor de onderscheidende meerdere subsets. De hier beschreven methode laat de flowcytometrieanalyse en hoge zuiverheid isoleren van diverse subsets die kunnen worden gebruikt voor verdere tests.

Samenvatting

Tijdens chronische lever verwondingen, progenitorcellen breiden in een proces genaamd ductulaire reactie, die ook betrekking heeft op de weergave van inflammatoire cellulaire infiltraat en epitheliale cel activatie. De populatie voorlopercellen gedurende deze ontstekingsreacties is meestal onderzocht middels enkel oppervlak markers, door histologische analyse of met flowcytometrie-gebaseerde technieken. Echter, nieuwe oppervlak markers geïdentificeerd verschillende functioneel verschillende subgroepen binnen de lever voorloper / stamcel compartiment. De hier gepresenteerde methode beschrijft de isolatie en gedetailleerd flowcytometrie analyse van voorlopercellen subsets door middel van nieuwe oppervlak marker combinaties. Bovendien toont hoe de verschillende voorlopercel deelverzamelingen kunnen worden geïsoleerd met hoge zuiverheid met behulp van geautomatiseerde magnetische en FACS sortering-gebaseerde methoden. Belangrijker nieuwe en vereenvoudigde enzymatische dissociatie van de lever maakt de isolatie van deze zeldzame celpopulaties met een hoge levensvatbaarheiddie superieur in vergelijking met andere bestaande methodes. Dit is met name relevant voor verdere studie voorlopercellen in vitro of scheidt hoogwaardige RNA aan het genexpressieprofiel analyseren.

Inleiding

Leverregeneratie wordt meestal geassocieerd met de zelfvernieuwingscapaciteit van hepatocyten. Niettemin chronische leveraandoeningen letsels ontstaan met progenitor cel activatie en expansie, die zijn geassocieerd met hun vermogen om te differentiëren in hepatocyten en cholangiocyten ^{^1,} ^{^2,} ^{^3,} ^4. Dit is bijzonder relevant omdat, tijdens chronische letsels, hepatocyten proliferatie niet effectief. Ondanks meerdere genetische tracing studies gericht progenitorcellen, hun rol in leverregeneratie blijft controversieel ^{^5,<....}