Eerste beoordeling van antilichaam-geconjugeerde bewerkt met virale afkomstige peptiden voor verhoging van cellulaire accumulatie en verbetering van de Tumor gericht op

Simon Beaudoin; Michel Paquette; Laurent Fafard-Couture; Mylene A. Tremblay; Roger Lecomte; Brigitte Guérin; Jeffrey V. Leyton

doi:10.3791/55440

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Eerste beoordeling van antilichaam-geconjugeerde bewerkt met virale afkomstige peptiden voor verhoging van cellulaire accumulatie en verbetering van de Tumor gericht op

6.6K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/55440

⸱

8 maart 2018

Simon Beaudoin¹ , Michel Paquette¹ , Laurent Fafard-Couture¹ , Mylene A. Tremblay¹ , Roger Lecomte¹^,²^,³ , Brigitte Guérin¹^,²^,³ , Jeffrey V. Leyton¹^,²^,³

¹Department of Nuclear Medicine and Radiobiology, Université de Sherbrooke, ²Sherbrooke Molecular Imaging Center (CIMS), Université de Sherbrooke, ³Sherbrooke Institute of Pharmacology

In dit artikel

Samenvatting

Viral afkomstige peptiden gekoppeld aan antilichaam-geconjugeerde (ACs) is een aanpak die wint dynamiek als gevolg van het potentieel van het leveren van moleculaire payloads met verhoogde tumor cel accumulatie. Gebruik makend van gemeenschappelijke methoden voor evaluatie van peptide conjugatie, AC en lading intracellulaire accumulatie en tumor gericht op, helpt dit protocol onderzoekers tijdens de cruciale eerste ontwikkelingsfasen.

Samenvatting

Antilichaam-geconjugeerde (ACs) bewerkt met virus afkomstige peptiden zijn een potentieel krachtig klasse van tumor cel levering agenten voor moleculaire laadvermogens gebruikt in de behandeling van kanker en imaging als gevolg van verhoogde cellulaire accumulatie over huidige ACs. Tijdens de vroege AC in vitro zijn ontwikkeling, fluorescentie technieken en radioimmunoanalyses voldoende voor het bepalen van de intracellulaire lokalisatie, accumulatie efficiëntie en target cel specificiteit. Op dit moment is er geen consensus over gestandaardiseerde methoden voor het voorbereiden van cellen voor de evaluatie van AC intracellulaire accumulatie en lokalisatie. De eerste testen van ACs bewerkt met virus afkomstige peptiden is essentieel vooral als er meerdere kandidaten zijn aangelegd. Bepalen van intracellulaire accumulatie door fluorescentie kan worden beïnvloed door het signaal van de achtergrond van de ACs aan het celoppervlak en bemoeilijken de interpretatie van accumulatie. Voor radioimmunoanalyses, meestal behandelde cellen zijn gespreide en de radioactiviteit in verschillende cel compartimenten gemeten. Echter lysis van de cel varieert van cel naar cel en vaak nucleaire en cytoplasmatische compartimenten zijn niet afdoende geïsoleerd. Deze kan misleidende gegevens over de eigenschappen van de levering van de lading produceren. De intraveneuze injectie van radiolabeled virus afkomstige peptide gemodificeerde ACs in tumor rekening houdend met muizen gevolgd door radionuclide imaging is een krachtige methode voor het bepalen van de tumor gericht en lading levering eigenschappen in de in-vivo -fase van ontwikkeling. Echter dit is een relatief recente vooruitgang en enkele groepen virus afkomstige peptide gemodificeerde ACs op deze manier hebben geëvalueerd. We beschrijven de verwerking van behandelde cellen om nauwkeuriger virus afkomstige peptide gemodificeerde AC accumulatie bij het gebruik van de confocal microscopie en radioimmunoanalyses. Specifiek, een methode voor trypsinizing cellen verwijderen celoppervlak gebonden ACs. We bieden ook een methode voor het verbeteren van de cellulaire fractionering. Ten slotte, dit protocol voorziet een in vivo -methode met behulp van positron emissie tomografie (PET) evaluatie van de eerste tumor gericht op onroerend goed in tumor-dragende muizen. We gebruiken de isotoop ⁶⁴Cu (t-_1/2 = 12,7 h) als de payload van een voorbeeld in dit protocol.

Inleiding

Antilichaam-geconjugeerde (ACs) zijn biofarmaceutica die zijn rijpen in een transformatieve klasse effectieve geneesmiddelen voor de verbetering van behandelingen van kanker en voor het opsporen van tumoren. Samengesteld uit een monoklonaal antilichaam (mAb) geconjugeerd met moleculaire payloads zoals radio-isotopen, kleine moleculen en biologische toxines, ACs kunnen leveren deze codering van de payloads tot kankercellen met uitgelezen doelwit antigeen affiniteit en specificiteit. Dus ACs hebben het potentieel om aanzienlijk verminderen van niet-specifieke toxiciteit en lading activiteit op de site van de tumor te verhogen. Therapeutisch, zijn ACs vervoer van cytotox....