Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Oprichting van een Biorepository op een kliniek

6.3K weergaven

DOI:

10.3791/55583

29 mei 2017

In dit artikel

Samenvatting

Kutane tumoren worden vaak weggegooid na Mohs micrografische chirurgie. Hier wordt een protocol beschreven dat klinisch ondersteunend personeel effectief kan verwerken en opslaan van huidkanker ( bv. Plaveiselcelcarcinoom, basale celcarcinoom en melanoom) monsters voor stroomafwaartse laboratoriumtoepassingen zonder in te grijpen bij klinische operaties.

Samenvatting

De incidentie van huidkanker (bijvoorbeeld plaveiselcarcinoom, basaalcelcarcinoom en melanoom) is de afgelopen jaren toegenomen. Er wordt verwacht dat er sprake is van een parallelle vraag naar cutane tumormonsters voor biomedische onderzoeksstudies. De beschikbaarheid van weefsel is echter beperkt door de kosten van het opstellen van een biorepository en het ontbreken van protocollen die beschikbaar zijn voor het verkrijgen van klinische monsters die de klinische operaties niet interfereren. Er werd een protocol opgezet om kutane tumor en bijbehorende bloed- en speekselmonsters te verzamelen en te verwerken die minimale invloed hebben op routine klinische procedures op de datum van een Mohs-operatie. Tumormonsters worden verzameld en verwerkt van patiënten die hun eerste laag van Mohs-operatie ondergaan voor biopsie-bewezen kutane maligniteiten door de Mohs-histotechnoloog. Aangrenzend normaal weefsel wordt verzameld op het moment van chirurgische sluiting. Extra monsters die kunnen worden verzameld, zijn volledige bloed- en buccale swabs. Door gebruik te maken van weefselmonsters die normaal gesproken worden weggegooid, werd een biorepository gegenereerd die verschillende belangrijke voordelen biedt door in de kliniek versus de laboratoriumomgeving te zijn. Deze omvatten een breed scala van verzamelde monsters; Toegang tot ontdekte patiëntrecords, inclusief pathologieverslagen; En, voor de typische donor, toegang tot aanvullende monsters tijdens follow-upbezoeken.

Inleiding

Kanker- en biomarker onderzoek is gebaseerd op een aanbod van kwaliteit menselijk weefselmonsters, en de beperkte voorraad heeft onderzoek 1 , 2 gehinderd. Veel dermatologische studies zijn beperkt door de ontoereikende toevoer, de variabele kwaliteit en de kosten die verband houden met het gebruik van menselijk weefsel. De kosten voor het opzetten van een grote, toegewijde biobank zijn geschat op ongeveer twee miljoen dollar 3 , en deze kosten maken het gebruik van menselijk weefsel buiten bereik van veel onderzoekers. Bovendien bestaat het proces van het genereren en opslaan van onde....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle experimenten op humane weefselmonsters werden goedgekeurd door Western IRB (WIRB Protocol # 20142461). Het enige criterium voor het verzamelen van weefsels voor deze procedures is een biopsie-bewezen diagnose van SCC. Er werden geen uitsluitingskriteria beschreven in het oorspronkelijke IRB-protocol, maar monsters van patiënten met een bekende overdraagbare overdraagbare ziekte werden niet gebruikt. Geïnformeerde toestemming werd verkregen voor het verzamelen van kutane weefsel, bloed en speeksel. Midwestern Institutional Review Board heeft het validatiewerk goedgekeurd met klinische biorepository monsters bij Midwestern University (AZ # 807).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Tumor en ANT zijn succesvol gebruikt bij het isoleren van eiwitten en getest door Western blotting. Zoals getoond in Figuur 3 kunnen cutane plaveiselcelcarcinoommarkers (Muc114, FHL-115 en p40 16 , 17 ) gedetecteerd worden in patiëntmonsters die zijn verzameld en opgeslagen in onze klinische biorepositor.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Naar de kennis van de auteur is dit protocol de eerste in zijn soort dat zich richt op de klinische aanbesteding van cutane weefselmonsters in zowel een kosteneffectieve als snelle aanpak. Patiënten die Mohs-microchirurgie ondergaan, worden meestal gepland tijdens specifieke tijdstippen, en de inzameling is beperkt tot deze perioden. Proefcollectie omvat inspanning van de medische assistent die betrokken is bij patiëntenzorg, de Mohs-histotechnoloog die de tumormonsters verwerkt en een aangewezen laboratoriumpersoneel d.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door fondsen van de Midwestern University College of Health Sciences Research Facilitation Grant, toegekend aan EEH, en het Midwestern University Office of Research en Gesponsorde Programma's Intramural Grant, toegekend aan KJL. Aanvullende ondersteuning is verleend door aangesloten laboratoria en geaffilieerde dermatologie. Wij bedanken Sarah Potekhen, Jamie Barto, Stefani Fawks, Cody Jording, Stacie Schimke, Heather Kissel en Ali Zaidi voor hun technische bijstand.

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
BD Vacutainer Plastic Blood Collection Tubes with K3EDTAThermoFisher Scientific02-685-2B
Electron Microscopy Sciences Double Edge BladesThermoFisher Scientific50-949-411
Curved Medium Point General Purpose ForcepsThermoFisher Scientific16-100-110
Premium Microcentrifuge TubesThermoFisher Scientific05-408-138
Lonza Walkersville KGM Keratinocyte MediumThermoFisher ScientificNC9791321
Electron Microscopy Sciences Tissue TEK OCT CompoundThermoFisher Scientific50-363-579
Leica CM1950 CryostatLeica Biosystems14047743909
Frosted Microscope SlidesThermoFisher Scientific12-550-343
Shandon Rapid-Chrome H&E Frozen Section Staining KitThermoFisher Scientific99-900-01
Nalgene Long-Term Storage Cryogenic TubesThermoFisher Scientific03-337-7X
Falcon 15 mL Conical Centrifuge TubesThermoFisher Scientific14-959-53A
Boca Scientific BuccalT-Swab ThermoFisher ScientificNC9679349
Cell Signaling Technology 10x RIPA BufferThermoFisher Scientific50-195-822
Halt Protease and Phosphatase Inhibitor CocktailThermoFisher ScientificPI78443
Eppendorf 5424R MicrocentrifugeThermoFisher Scientific05-401-203
Pellet Morter Cordless HomogenizerThermoFisher Scientific12-141-3
RNAse Free Pellet PestleThermoFisher Scientific121-141-364
Forma SteriCycle CO2 IncubatorThermoFisher Scientific13-998-089
HyClone Fetal Bovine SerumThermoFisher ScientificSH30071.02
Gibco Advanced DMEM/F-12ThermoFisher Scientific12-634-028
Gibco Penicillin-StreptomycinThermoFisher Scientific15140148
Gibco 1 M HepesThermoFisher Scientific15-630-130
Nunc Cell Culture 35 mm with VentThermoFisher Scientific1256591
Anti-CFH monoclonal antibody clone OX-24AbnovaMAB12583
Anti-p40 (p63 delta) antibodyAbnovaABX-144A
Anti MUC-1 antibodySanta Cruz Biotechsc-7313
Anti-Snail + Slug (phospho S246)AbcamAb63568
Goat anti-rabbit IgG, Alexa Fluor 488InvitrogenA-11034
Alexa Fluor 568 PhallodinMolecular Probes A12380
ProLong Gold Antifade Mountant with DAPIMolecular Probes P36941
Zeiss Axio Imager Z1 Microscope with Axiocam cameraZeiss4300009901
Olympus IX51 phase contrast with DP72 cameraOlympusIX511F3

Referenties

  1. Baker, M. Biorepositories: Building better biobanks. Nature. 486, 141-146 (2012).
  2. Ambrosone, C. B., Nesline, M. K., Davis, W. Establishing a cancer center data bank and biorepository for multidisciplinary research. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 15<....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

HuidtumorsamplesMohs chirurgieweefselcollectieisolatie van bloedplasmaRNA extractieWestern blot analysegelelektroforesekoppeling van pati ntendossiersontwikkeling van vloeibare biopsie