Deze studie beschrijft de chirurgische procedures en experimentele technieken voor het uitvoeren van wakker cysteometrie in een vrij bewegende muis. Daarnaast biedt het experimentele bewijsmateriaal ter ondersteuning van de optimalisatie en normalisatie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Evaluatie van de procedure voor het uitvoeren van Awake Cystometry in een muis model
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Wakker cystometrie is al lang gebruikt om de blaasfunctie in vrij bewegende muizen te beoordelen, maar de specifieke methoden variëren van laboratoria. Het doel van deze studie was om de microchirurgische procedure te beschrijven die gebruikt werd om een intravesische buis te implantaten en de experimentele techniek voor het opnemen van urineblaasdruk in een wakker, bewegende muis. Daarnaast worden experimentele gegevens voorgesteld om aan te geven hoe de operatie, evenals type en grootte van de buis, invloed hebben op de lagere urinewegfunctie en de opnamegevoeligheid. Het effect van buisdiameter op drukopname werd beoordeeld in zowel polyethyleen als polyurethaanbuis met verschillende inwendige diameters. Vervolgens werd de best presterende buis van beide materialen ingezet in de koepel van de urine blaas van mannelijke C57BL / 6 muizen. Twaalf uur 's nachts mictuurfrequentie werd opgenomen in gezonde, intacte dieren en dieren 2, 3, 5 en 7 dagen na de operatie. Bij oogst, blaas wEre werd beoordeeld op tekenen van zwelling met behulp van grove waarneming en werden vervolgens verwerkt voor pathologische analyse. De grootste mate van blaaszwelling werd waargenomen op dag 2 en 3, die gecorreleerd was met gedragsverwijderingsgegevens die aanzienlijk verminderde blaasfunctie vertoonden. Op dag 5 was de blaar histologie en voiding frequentie genormaliseerd. Op basis van de literatuur en het bewijs dat door onze studies wordt verstrekt, stellen we de volgende stappen in voor in vivo opname van intravesische druk en vochtvolume in een wakker muis: 1) Doe de operatie met behulp van een operationele microscoop en microchirurgische hulpmiddelen. 2) Gebruik polyethyleen-10 Buizen om bewegingsartifacten te minimaliseren, en 3) Cystometrie op postoperatieve dag 5 uitvoeren wanneer blaaszwelling wordt opgelost.
Inleiding
Vulcystometrie (FC) is een diagnostische methode waarbij een katheter in de urine blaas wordt geplaatst om druk op te nemen tijdens langzame blaasvulling. Eerst geïntroduceerd in 1927 als een klinische diagnostische methode om de lagere urinewegfunctie te evalueren, is het veel gebruikt. 1 Bij onderzoeksapplicaties kan FC worden gebruikt om blaasfunctie in gezonde en zieke diermodellen te testen en de effecten van farmacologische middelen te onderzoeken. Knaagdierenmodellen worden vaak gebruikt om de lagere urinewegfunctie te onderzoeken. 2 In deze groep zoogdieren werd FC eerst ontwikkeld voor gebruik bij ratten.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Dieren werden gehuisvest in de Universiteit van Vermont Animal Care Facility volgens de institutionele richtlijnen. Alle dierproeven werden uitgevoerd in overeenstemming met de gids National Institutes of Health voor de zorg en het gebruik van laboratoriumdieren.
1. Intravesische Tube Implantatie
- Voorbereiding van buizen en instrumenten voor de chirurgische procedure
- Knip een 7 cm stuk PE10-buis om de katheter te maken voor implantatie.
- Maak een flare aan het ene uiteinde van de PE10 buis door het einde langzaam naar een open vlam te brengen.
OPMERKING: Verwijder de buis zo snel als de....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Er was geen significant verschil tussen de buismaterialen en de diameters in de consistentie van drukstijging en vallen binnen het systeem tijdens buisbezetting. Blaaswand zwelling na intravesische buis implantatie was significant voor zowel polyethyleen (PE) en polyurethaan (PU) materialen. Op dag 2 ontwikkelde ernstige submucosale zwelling. Het heeft de helft van de doorsnede van de blaas bezet, waardoor het lumen verstoord raakt. Op dag 5 is het oedeem volledig opgelost, waardoor de s.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Optimale materiaal en grootte van intravesical tubing
Om te bepalen welke effect de diameter van de buis heeft op drukopnamen, hebben we verschillende microfluïdische buizen getest; PE50 (0,58 mm ID), polyurethaan PU027 (0,4 mm ID), PE25 (0,46 mm ID) en PE10 (0,28 mm ID). Voor elke buis werd druk geregistreerd met de infusiepomp met 1 ml / h, terwijl de buis de verticale beweging van 0 tot 30 cm snel verplaatst. Aanvankelijke in vivo-experimenten probeerden PE50-buizen te gebruiken, maar waren .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Deze studie werd gefinancierd door de afdeling Chirurgie van de Universiteit van Vermont, de Deense Raad voor Onafhankelijk Onderzoek en door het Universitair Ziekenhuis Odense.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Polyethylene (PE) 10 tubing | Instech | BTPE-10 | Past op 30G connectoren/pluggen |
| Polyethylene (PE) 50 tubing | Instech | BTPE-50 | Past op 22G connectoren/pluggen |
| 22 G enkele kanaal roestvrij stalen draaibaar | Instech | 375/22 | |
| High Carbon Steel Utility Extension Spring (9/64" OD) | Grainger | 1NAH1 | Beschermt PE50 buis - Op lengte gesneden |
| 22 G connector | Instech | SP22/12 | |
| Yutaoz Professionele Hot Melt Lijmpistool | Yutaoz | Gebruik lage temperatuur instelling (100 °C) - Elke hotmelt lijmpistool met een instelbaar temperatuurbereik werkt | |
| Surebonder DT-2010 all purpose lijmstift | Surebonder | Elke all purpose hot lijm werkt | |
| Dumont #5 gebogen microforceps | World Precision Instruments | 500232 | |
| Dumont #7 gebogen microforceps | World Precision Instruments | 14188 | |
| Mini dissecerende schaar - recht | World Precision Instruments | 503240 | |
| Micro muggentang (12.5 cm) | World Precision Instruments | 500451 | |
| Dissecerende schaar - recht | World Precision Instruments | 14393 | |
| Castroviejo Naaldhouder | World Precision Instruments | 503258 | |
| Isofluraan, USP | Phoenix | 2%, 1 L/min stroomsnelheid | |
| Buprenorfine | 0,05 mg/kg | ||
| 0,9% Sodium Chloride Irrigation, USP | Baxter | ||
| 6-0 Ethilon zwart monofilament, niet-resorbeerbare hechting | Ethicon | Blaasbind | |
| 6-0 Vicryl violet gevlochten, resorbeerbare hechting | Ethicon | Spierhechting, loopt | |
| 6-0 Prolene blauwe monofilament, niet-resorbeerbare hechting | Ethicon | Huidhechting, verticale matras, begraven onderbroken | |
| KD Legato 210 infuse/terugtrekken pomp | KD Scientific | 1,5 mL/hr | |
| Wegneembare druktransducer | Digitimer | NL108T2 | |
| Drukversterker | Digitimer | NL108A | |
| Power1401-3 data-acquisitie-interface | Digitimer | ||
| Spike2 | Cambridge Electronic Design Limited | PC-software voor drukregistratie | |
| Leica MZ6 chirurgische operatiemicroscoop (3,2 - 20X) | Leica Microsystems | Vergroting |
Referenties
- Perez, L. M., Webster, G. D. The History of Urodynamics. Neurourol Urodyn. 11 (1), 1-21 (1992).
- Fry, C. H., et al. Animal models and their use in understanding lower urinary tract dysfunction. Neurourol Urodyn. 29 (4), 603-608 (2010).
- Maggi, C. A., Santicioli, P., Meli, A.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
