Dissectie van de alvleesklier muis voor histologisch analyse en metabole profilering

Samenvatting

Dit video artikel vindt u een uitgebreide demonstratie van de procedures die nodig zijn om met succes de alvleesklier van een muis door dissectie voor histologisch analyse en metabole profilering.

Samenvatting

We hebben onderzocht de alvleesklier specifieke transcriptiefactor, 1a cre-recombinase; Lox-stop-lox-Kristen rat Sarcoom, glycine aan asparaginezuur op de 12 codon (Ptf1a^{cre / +}; LSL-Kras^{G12D / +}) stam muis als een model van menselijke pancreatic kanker. Het doel van onze lopende onderzoeken is het identificeren van de roman metabole biomarkers van pancreatic kanker progressie. Wij hebben uitgevoerd metabole profilering van urine, ontlasting, bloed, en alvleesklier weefsel extracten, evenals histologische analyses van de alvleesklier om de progressie van kanker te regisseren. De alvleesklier muis is niet een welomschreven solide orgel als bij de mens, maar is veeleer een diffuus gedistribueerde weke delen, dat is niet gemakkelijk geïdentificeerd door personen onbekend met interne anatomie van de muis of door personen die weinig of geen ervaring uitvoeren hebben muis orgel dissecties. Het doel van dit artikel is bedoeld als een gedetailleerde stapsgewijze visuele demonstratie bij beginners in de verwijdering van de alvleesklier muis door dissectie. Dit artikel moet vooral waardevol voor studenten en onderzoekers nieuw onderzoek waarvoor het oogsten van de alvleesklier muis door dissectie voor metabole profilering of histologische analyses.

Inleiding

De muis heeft ontpopt als een belangrijke diermodel voor menselijke pancreatic kanker^1,2. In de Ptf1a^{cre / +}; LSL-Kras^{G12D / +} muismodel, de Kristen rat Sarcoom (K-Ras) oncogen is geactiveerd uitsluitend in de alvleesklier, resulterend in de inleiding van voorstadia laesies in de alvleesklier, bekend als de alvleesklier geest neoplasias (PanINs), dat de vooruitgang aan alvleesklier ductaal adenocarcinomas, kortweg PDACs³. Deze muis modelsysteem biedt een van de beste beschikbare dierlijke modellen voor menselijke alvleesklierkanker^4,

Protocol

de procedures uitgevoerd in de video hieronder beschreven zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) aan de Universiteit van Miami.

1. voorbereiding en stimulans Test

1. stellen twee verschillende gebieden voor de chirurgische ingreep, de operatietafel en de tabel na operatie. Etappe van beide gebieden met alle materialen en keukengerei die nodig zijn.
   1. De operationele fase tabel onder een geventileerde kap. De tabel met de apparatuur op een wijze waarmee de continue en onbelemmerde uitoefening van de procedure regelen.
   2. Tot stand brengen van een postoperatieve tabel in dezelfde ....

Resultaten

Figuur 1 toont een overzicht van de operationele omgeving en Figuur 2 toont de post operatie gebied. Terwijl deze instelling de minimale hoeveelheid materiaal biedt en enscenering, individuen verkiezen kunnen om te veranderen dit best aan individuele behoeften. Het protocol moet worden geoptimaliseerd volgens de specifieke behoeften van het experiment. Deze procedure wordt uitgevoerd op een wijze die het leven van een muis, die g.......

Discussie

Betekenis ten opzichte van bestaande methoden
Terwijl andere informele video's van muis dissecties bestaan, deze video artikel levert de eerste professionele kwaliteit, peer reviewed, visuele demonstratie van alle gedetailleerde stappen nodig zijn voor de extractie en het oogsten van de alvleesklier muis door dissectie¹⁰ . Met de alvleesklier wordt een hoofdorgel voor metabole activiteit en insuline zorgt productie, dissectie en oogsten van de alvleesklier voor het behoud van d.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Glass Jar	Corning	3140-150	Het glazen potje dat in de video is gebruikt, is niet meer verkrijgbaar.  Dit is de vervanger.
Lid of Glass Jar	Corning	9985-150	Het glazen potje deksel dat in de video is gebruikt, is niet meer verkrijgbaar.  Dit is de vervanger.
15 mL Falcon Tubes	Fisher Scientific	339650
Surgical Scissors	Fisher Scientific	9201
Squeeze bottle	Fisher Scientific	03-409-10DD
100% Ethanol	Fisher Scientific	22-032-103
Formalin	Fisher Scientific	245-684
Foam Boards	Therapak	562908
Forceps	Fisher Scientific	200205SHN
1 mL 21G Syringes	BD Biosciences	309624
50 mL Falcon Tubes	Fisher Scientific	339652
2.0 mL Microcentrifuge Tubes	Fisher Scientific	02-681-258
Surgical Pads	Fisher Scientific	S67011
T-Pins Length:  2"	Advance Store Products	X32T-05
Sterilizing Wipes	Professional Disposables International Inc.	Q85084
Sharps Container	Fisher Scientific	14-827-122
Analytical Balance	Marshall Scientific	ME-AE200
4L Dewar	Taylor-Wharton	4LD
Shallow Wide Mouth Dewar	Fisher Scientific	F3087-V
Floating Microtube Rack	VWR	60986-100
Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile	Fisher Scientific	10-500-25
Isothesia (Isoflurane)	Henry Schein Animal Health	050033
Liquid Nitrogen	Wright Brothers	NIT-60-XX
Mouse Kras Strain	The Jackson Laboratory	OO8179
Mouse Cre Strain	MMRRC	OOO435-UNC